四逆湯加味對(duì)高脂血癥小鼠降血脂作用研究*

賈媛媛，培春生，常銳碧，孟慶婷，殷 紅，代 蓉△

(1.云南中醫(yī)學(xué)院，云南 昆明 650500；2.云南省迪慶州人民醫(yī)院，云南 香格里拉 674400)

四逆湯加味對(duì)高脂血癥小鼠降血脂作用研究*

賈媛媛1，培春生2，常銳碧1，孟慶婷1，殷 紅1，代 蓉1△

(1.云南中醫(yī)學(xué)院，云南 昆明 650500；2.云南省迪慶州人民醫(yī)院，云南 香格里拉 674400)

目的 研究四逆湯加味對(duì)蛋黃乳致小鼠高脂血癥總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)的影響。方法 健康昆明種小鼠60只，隨機(jī)分為5組：正常對(duì)照組、模型組、非諾貝特陽(yáng)性組(0.2 g/kg)、四逆湯加味高劑量組、四逆湯加味低劑量組。除正常組、模型組灌胃給予相同體積蒸餾水外，其余組灌胃給予相應(yīng)藥物。腹腔注射蛋黃乳劑復(fù)制小鼠高脂血癥模型，觀察小鼠血清TC、Tg，HDL-C、LDL-C水平變化。結(jié)果 與模型組比較，四逆湯加味高劑量組能顯著降低小鼠血清TC、Tg，并升高HDL-C水平。結(jié)論 四逆湯加味高劑量組對(duì)高脂血癥模型小鼠具有一定的降血脂作用。

四逆湯加味；高脂血癥；降血脂

高脂血癥(HyperliPidemia，HL)即脂質(zhì)代謝紊亂，是指TC、TG水平過高，LDL-C水平過高或HDL-C水平過低[1]。高脂血癥是腦卒中、冠心病、心肌梗死等獨(dú)立而重要的危險(xiǎn)因素。脂類物質(zhì)沉積于血管壁內(nèi)膜，逐漸形成小的斑塊，其直接損害是加速全身動(dòng)脈粥樣硬化。斑塊表面逐漸纖維化并壞變脫落，形成粥樣硬化潰瘍，隨著這一過程的發(fā)展，脂質(zhì)不斷沉積，多種炎性細(xì)胞逐漸浸潤(rùn)，慢慢演變?yōu)椴环€(wěn)定斑塊[2]。以不穩(wěn)定斑塊的裂縫、糜爛或破裂為基礎(chǔ)形成血栓，最終導(dǎo)致嚴(yán)重心腦血管損害如腦卒中、冠心病、心肌梗死等[3]。

中醫(yī)將高血脂歸屬于“眩暈”、“胸痹”、“中風(fēng)”、“痰濁”、“血?！钡劝Y范疇[4]。高脂血癥的發(fā)生與脾、腎、肝等臟腑功能失常關(guān)系密切。素體脾氣不足，運(yùn)化無力，濕濁內(nèi)生，阻遏經(jīng)絡(luò)；腎氣受損，氣不化津，則清從濁化，或水不涵木，木不疏土，致脾胃虛弱，濕濁內(nèi)生；肝氣郁結(jié)，肝陽(yáng)上亢，木旺克土，脾胃功能受損，運(yùn)化失司，濕濁化痰、蘊(yùn)熱，使水谷精微不能正常輸布而發(fā)病。云南迪慶州平均海拔3380 m，高寒缺氧，易致氣虛、陽(yáng)虛，氣虛則行血無力，因虛致瘀[5]；高原多寒冷，易損脾腎陽(yáng)氣，陽(yáng)氣虧虛，運(yùn)化無力，濕濁內(nèi)生，加上居民嗜食肥甘、醇酒乳酪，易化濕為痰蘊(yùn)熱，痰瘀互結(jié)；因此，該地區(qū)高脂血癥的發(fā)生多是在臟腑氣血虧虛基礎(chǔ)上，嗜食肥甘，天氣寒冷等形成正虛邪實(shí)證，尤以脾腎虧虛，痰瘀互結(jié)型高脂血癥為主[6]。該方針對(duì)高原地區(qū)高脂血癥發(fā)生的特點(diǎn)，在四逆湯基礎(chǔ)上加入道地藥材化裁而來，方中附子、干姜、炙甘草、上肉桂、吳茱萸以溫補(bǔ)肝腎；茯苓、白術(shù)以健脾祛濕益氣；當(dāng)歸、生水蛭加道地藥材滇三七、紅景天、藏紅花以活血化瘀，臨床用于治療高原地區(qū)脾腎虧虛，痰瘀互結(jié)型高脂血癥取得了較好的效果。為進(jìn)一步開發(fā)利用本方提供科學(xué)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，筆者針對(duì)該方的主治證，以蛋黃乳復(fù)制急性高脂血癥模型為研究對(duì)象，擬探討四逆湯加味對(duì)該模型血脂的影響。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 藥物 方劑組成：附片15 g，干姜30 g，炙甘草10 g，上肉桂6 g，茯苓30 g，白術(shù)20 g，吳茱萸10 g，當(dāng)歸15 g，生水蛭10 g，滇三七10 g，紅景天15 g，藏紅花10 g，全方具有溫補(bǔ)肝腎、健脾祛濕、活血化瘀之功效。

1.2 藥物制備 方劑煎煮方法：先取附片置一煎煮容器內(nèi)，加相當(dāng)于附片量5～7倍的冷水浸泡1 h以上，文火煮沸30 min左右，煎至入口無麻感為度[7]；取其他中藥飲片置另一煎煮容器內(nèi)，加相當(dāng)于藥材量5～7倍的冷水浸泡1 h，剛煮沸時(shí)與煎好的附子湯合并，再煎至30 min，過濾。藥渣加3～5倍量水繼續(xù)煎煮，煮沸20 min，過濾。合并2次濾液，于水浴上濃縮備用。人臨床用量：92 g/人/d，根據(jù)臨床用量將該方劑量設(shè)置為等效量即為低劑量組。4倍等效量為高劑量組。置于4℃冰箱中冷藏保存?zhèn)溆?，臨用前按劑量現(xiàn)配至所需濃度。

非諾貝特膠囊：參考文獻(xiàn)劑量[8]，經(jīng)預(yù)試驗(yàn)，確定實(shí)驗(yàn)時(shí)給藥劑量為200 mg/kg，給藥體積按0.2 mL/10 g，用蒸餾水配制成濃度為10 mg/mL的溶液，在給藥前搖勻。

蛋黃乳溶液的制備：取新鮮雞蛋，除去蛋清，用消毒生理鹽水?dāng)嚢杌靹?，配?5%的蛋黃乳液備用[9]。

1.3 動(dòng)物 健康清潔級(jí)昆明種小鼠，雌雄各半，體重18～22 g，由四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供，合格證號(hào)：SCXK(川)2008-24，合格批號(hào)：004345。飼養(yǎng)于動(dòng)物房(清潔級(jí))，溫度18～24℃，相對(duì)濕度60%～80%，全價(jià)顆粒飼料來源于云南中醫(yī)學(xué)院藥理教研室動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。

1.4 試劑 非諾貝特膠囊：法國(guó)利博福尼制藥公司，批號(hào)：21265；新鮮雞蛋黃；氯化鈉注射液：昆明南疆制藥有限公司，批號(hào)：A09090191；總膽固醇(TC)酶法測(cè)定試劑盒(中生北控生物科技股份有限公司)，批號(hào)：141701；甘油三酯(TG)酶法測(cè)定試劑盒(中生北控生物科技股份有限公司)，批號(hào)：146701；低密度脂蛋白測(cè)定試劑盒(中生北控生物科技股份有限公司)，批號(hào)：140561；高密度脂蛋白測(cè)定試劑盒(中生北控生物科技股份有限公司)，批號(hào)：140551。

1.5 實(shí)驗(yàn)儀器 Infinite M200 PRO 酶標(biāo)儀：瑞士Tecan公司；分析天平(型號(hào)：AL104METTLER TOLEDO，Switzerland，0.0001 g)；高速低溫離心機(jī)(CF16 RXⅡseries，HITACHI公司)；電動(dòng)玻璃勻漿機(jī)(DY89-Ⅱ型，寧波新芝生物科技股份有限公司)；數(shù)字恒溫水浴鍋(HH-S28S，金壇市大地自動(dòng)化一起廠)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 分組 取60只昆明種小鼠，雌雄各半，體重在18～22 g范圍內(nèi)。隨機(jī)分為5組，每組12只，分別為正常對(duì)照組、高脂模型組、陽(yáng)性對(duì)照組、四逆湯加味高劑量組、低劑量組。

2.2 造模及給藥方法[10～11]四逆湯加味高、低劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組按0.2 mL/10 g體重灌胃(i.g)給藥，正常對(duì)照組和模型組給予等體積蒸餾水。1次/d，連續(xù)用藥7d，于第7d用藥后禁食，但不禁水。末次用藥2 h后，除對(duì)照組腹腔注射等體積生理鹽水外，其余各組均腹腔注射75%蛋黃乳液0.5 mL/只，復(fù)制實(shí)驗(yàn)性高脂血癥。注射16 h后，摘取眼球取血，離心10 min分離血清(4500 r/min)，按酶聯(lián)法檢測(cè)各組小鼠血清TC、TG含量。

2.3 檢測(cè)方法 按照總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白試劑盒說明書操作，測(cè)定血清TC、Tg，LDL-C和HDL-C的含量。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

不同劑量四逆湯加味對(duì)蛋黃乳致高脂血癥小鼠血脂水平的影響，分別測(cè)定各組實(shí)驗(yàn)小鼠血清中的TC、Tg，HDL-C、LDL-C，實(shí)驗(yàn)與分析結(jié)果見表1。

表1 四逆湯加味高劑量、低劑量對(duì)小鼠血脂的影響±s)

注：與空白組比較，△△△P<0.001，△△P<0.01；與模型組比較，***P<0.001，**P<0.01，*P<0.05；四逆湯加味高、低劑量組簡(jiǎn)寫為四高組、四低組。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，高脂模型組小鼠血清的TC、Tg，LDL-C的水平與空白組比較顯著升高(P<0.001)，HDL-C 水平與空白組比較顯著降低(P<0.01)，表明小鼠高脂模型建立成功。

由表1可見：與模型組相比，四逆湯加味高劑量組，對(duì)TC、TG的降低及對(duì)HDL-C的升高有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；四逆湯加味低劑量組對(duì)TC、TG的降低有一定的趨勢(shì)，但與模型組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；四逆湯加味高、低劑量組對(duì)LDL-C的降低無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。說明四逆湯加味高劑量組在降TC、TG及升高HDL-C水平方面具有一定的作用。

4 討論

本方針對(duì)脾腎虧虛、痰瘀互結(jié)型高脂血癥主要從固本和瀉濁兩個(gè)方面治療[12]。以補(bǔ)虛瀉實(shí)為治則，結(jié)合高原地區(qū)飲食氣候等特點(diǎn)因地制宜，通過調(diào)整臟腑陰陽(yáng)氣血平衡，減少濁脂產(chǎn)生，并清除痰濁、瘀血，以達(dá)到調(diào)節(jié)血脂的作用[13]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：四逆湯加味高劑量組灌胃7 d后，能顯著降低實(shí)驗(yàn)小鼠血清TC、Tg，并升高HDL-C水平。TC、TG 是血管粥樣斑塊構(gòu)成的物質(zhì)，異常增高的TC、TG和改變凝血系統(tǒng)和纖溶系統(tǒng)的各種因子促進(jìn)血栓形成，并加快AS的發(fā)展；LDL是致AS的首要脂蛋白，LDL可進(jìn)入血管內(nèi)壁而促使TC沉積。研究表明：冠心病(CAD)的危險(xiǎn)性、死亡率隨TC的升高而增加，特別是與LDL-C水平呈明顯正相關(guān)[14]。HDL-C作為膽固醇的接受體，可將膽固醇從周圍組織中轉(zhuǎn)運(yùn)到肝臟進(jìn)行再循環(huán)或以膽酸的形式排泄，這一過程稱為膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)(RCT)[15]，RCT可以促進(jìn)外周組織移除膽固醇，防止動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生，被認(rèn)為是抗動(dòng)脈粥樣硬化因子。因此，降低TC、Tg，并升高HDL-C水平，可減少脂質(zhì)在血管壁的沉積，降低血漿和血管壁中的膽固醇水平，防止動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生。臨床研究表明：貝特類藥物或煙酸是目前主要用于升高HDL-C水平的藥物，但這些藥物的安全性及升高HDL-C的水平十分有限[16]。四逆湯加味能顯著降低模型小鼠血清TC、Tg，并升高HDL-C水平，為臨床應(yīng)用溫補(bǔ)肝腎、健脾益氣、活血化瘀法調(diào)節(jié)高海拔地區(qū)高血脂患者提供新的治療思路。四逆湯加味高劑量組對(duì)高脂血癥模型小鼠有一定的調(diào)節(jié)血脂作用。

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(1)迪慶州科技計(jì)劃基金項(xiàng)目；(2)云南白藥、云南中醫(yī)學(xué)院中醫(yī)藥教育創(chuàng)新基金項(xiàng)目(NO：YB2014J02)；(3)云南省教育廳科學(xué)研究基金項(xiàng)目(NO：2014Z120)

殷紅(1986-)，女，河南省周口市，研究生，研究方向：中醫(yī)治法與中藥藥效關(guān)系的研究

△通信作者：代蓉，E-mail：1647029626@qq.com

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