PCDH9、BAG-1S蛋白表達(dá)對(duì)非小細(xì)胞肺癌新輔助化療預(yù)后狀況的影響*

羅好秋

中晚期非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）無法耐受手術(shù)，而大部分早期非小細(xì)胞肺癌患者術(shù)后仍需輔助化療[1]?；熓欠切〖?xì)胞肺癌的主要治療手段，但目前非小細(xì)胞肺癌化療有效率較低，其主要原因?yàn)榛熋舾行越档蚚2]。原鈣黏附蛋白9（Protocadherin，PCDH9）在成人小腸、卵巢、前列腺、胸腺和脾臟組織中的表達(dá)明顯高于胎兒組織[3]?？沟蛲龅鞍譈AG-1S（Bcl-2associated athanogenel，BAG-1S）高表達(dá)提示惡性腫瘤局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率較高[4]。但關(guān)于PCDH9、BAG-1S蛋白表達(dá)對(duì)非小細(xì)胞肺癌新輔助化療預(yù)后狀況的影響研究甚少，本研究就這一問題進(jìn)行探究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2008年1月-2009年12月本院腫瘤科非小細(xì)胞肺癌患者178例作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：全部患者均符合非小細(xì)胞肺癌的病理診斷標(biāo)準(zhǔn)，具有手術(shù)適應(yīng)證，術(shù)后6~8周期新輔助化療[5]。排除標(biāo)準(zhǔn)：至隨訪截止日期2014年12月，隨訪資料不完整。所選患者中男90例，女88例，年齡42~77歲，平均（63.41±6.14）歲，組織學(xué)類型：腺癌96例，鱗癌82例。組織學(xué)分化程度：低分化60例，中分化52例，高分化66例。臨床分期：Ⅰ期42例，Ⅱ期57例，Ⅲ期79例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移113例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移65例。研究經(jīng)本院醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，全部患者均簽署知情同意書。

1.2 方法 采用免疫組化檢測(cè)法。（1）試劑與儀器：鼠抗BAG-1S多克隆抗體（CC9E8，工作稀釋度為1∶15）購自Santa Cruz公司，兔抗人PCDH9一抗及鼠抗兔二抗均購自美國(guó)Abcam公司，EDTA抗原修復(fù)液（pH=9.5）、DAB顯色試劑盒和SP免疫組化試劑盒購自北京中杉金橋生物公司，（2）操作步驟：術(shù)中采集非小細(xì)胞肺癌組織（178例）和癌旁組織（距離腫瘤組織2 cm，154例），石蠟切片、脫蠟、水化，磷酸鹽（Phosphate Buffered Saline，PBS）緩沖液沖洗3 min×3次，高溫高壓下采用EDTA抗原修復(fù)液行抗原修復(fù)，滴加3%H2O2溶液，室溫下孵育10 min阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，PBS緩沖液沖洗3 min×3次，加第一抗體，室溫下孵育60 min，PBS緩沖液沖洗5 min×3次，滴加聚合物增強(qiáng)劑，室溫下孵育20 min，PBS緩沖液沖洗3 min×3次，加酶標(biāo)抗鼠聚合物，室溫下孵育30 min，PBS緩沖液沖洗3 min×3次，滴加DAB顯色試劑，電子顯微鏡下觀察，棕黃色為陽性，自來水沖洗，HE復(fù)染，0.1%鹽酸分化，自來水沖洗，PBS緩沖液返藍(lán)，乙醇梯度脫水干燥，中性樹脂封片。

1.3 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) 組織切片由兩名病理學(xué)醫(yī)師重復(fù)觀察，隨機(jī)選取5個(gè)高倍鏡視野，按陽性細(xì)胞數(shù)比例分級(jí)，無細(xì)胞著色評(píng)定為0分，細(xì)胞著色≤10%評(píng)定為1分，細(xì)胞著色10%~25%評(píng)定為2分，細(xì)胞著色26%~50%評(píng)定為3分，細(xì)胞著色51%~100%評(píng)定為4分；組織切片無色評(píng)定為0分，淡黃色評(píng)定為1分，棕黃色評(píng)定為2分，棕褐色評(píng)定為3分。兩者積分相加≤2分為陰性；反之為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 本研究數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以（±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用 字2檢驗(yàn)，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組PCDH9、BAG-1S蛋白表達(dá)比較 非小細(xì)胞肺癌組織PCDH9陽性表達(dá)率明顯低于非小細(xì)胞肺癌癌旁組織，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），非小細(xì)胞肺癌組織BAG-1S陽性表達(dá)率明顯高于非小細(xì)胞肺癌癌旁組織，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

表1 兩組PCDH9、BAG-1S蛋白表達(dá)比較 例（%）

2.2 不同PCDH9蛋白表達(dá)對(duì)非小細(xì)胞肺癌新輔助化療預(yù)后的影響 PCDH9陽性表達(dá)者總生存期及無進(jìn)展生存期均明顯高于PCDH9陰性表達(dá)者，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表 2。

表2 不同PCDH9蛋白表達(dá)對(duì)非小細(xì)胞肺癌新輔助化療預(yù)后影響的比較（x-±s） 個(gè)月

2.3 不同BAG-1S蛋白表達(dá)對(duì)非小細(xì)胞肺癌新輔助化療預(yù)后的影響 BAG-1S陽性者總生存期及無進(jìn)展生存期均明顯低于BAG-1S陰性表達(dá)者，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表3。

表3 不同BAG-1S蛋白表達(dá)對(duì)非小細(xì)胞肺癌新輔助化療預(yù)后影響的比較（x-±s） 個(gè)月

3 討論

美國(guó)肺部惡性腫瘤總體5年生存率約為15%，而我國(guó)肺部惡性腫瘤總體5年生存率僅為10%，大部分國(guó)家肺部惡性腫瘤發(fā)生率呈逐漸增高趨勢(shì)，而關(guān)于肺部惡性腫瘤的病理發(fā)生機(jī)制尚未完全明確。非小細(xì)胞肺癌是常見的肺部惡性腫瘤之一，其病情進(jìn)展較快，預(yù)后欠佳，且對(duì)常規(guī)放化療耐藥，5年生存率較低。

原鈣黏蛋白（PCDH）根據(jù)基因組結(jié)構(gòu)差異分為團(tuán)簇性和非團(tuán)簇性，非團(tuán)簇性PCDH具有細(xì)胞黏附分子的異質(zhì)性和同質(zhì)性，參與細(xì)胞黏附因子的生物功能[6-7]。PCDH9基因有1個(gè)特別長(zhǎng)的外顯子編碼，其屬于細(xì)胞黏附分子cadherin超家族成員，鈣黏蛋白缺失可促進(jìn)惡性腫瘤浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移[8]。相關(guān)研究亦顯示，PCDH9在膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)明顯低于癌旁組織，且在高級(jí)膠質(zhì)瘤組織PCDH9表達(dá)缺乏，PCDH9陰性表達(dá)者生存期較PCDH9陽性表達(dá)者明顯縮短[9]。因此，PCDH9可作為膠質(zhì)瘤預(yù)后的特異性指標(biāo)。經(jīng)臨床實(shí)踐研究同時(shí)證實(shí)，PCDH9在乳腺癌組織中表達(dá)顯著降低，明顯低于胸腺纖維腺瘤，且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及其侵犯呈明顯的負(fù)相關(guān)，揭示了PCDH9表達(dá)在乳腺癌的臨床治療效果和預(yù)后的預(yù)測(cè)中具有重要的意義。但關(guān)于PCDH9對(duì)肺部惡性腫瘤預(yù)后狀況的評(píng)估意義研究甚少。

BAG-1S歸屬BAG-1，后者是近期發(fā)現(xiàn)的抗凋亡蛋白，其包括BAG-1M、BAG-1L和BAG-1S等不同亞型。BAG-1與Bcl-2相結(jié)合發(fā)揮多種生物功能。BAG-1S通過與多種基因蛋白產(chǎn)物相互作用共同調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖和凋亡，在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，BAG-1S分別與Bal-2和HSP70相結(jié)合調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡和增殖功能[10]。BAG-1S與RAF-1激酶、類固醇激素受體等蛋白發(fā)生作用，還可與Bal-2形成復(fù)合物，共同促進(jìn)抗細(xì)胞凋亡功能。BAG-1S在人類正常組織中幾乎不表達(dá)，但在大部分惡性腫瘤組織中顯著性高表達(dá)。文獻(xiàn)[11]報(bào)道顯示，BAG-1S在食管鱗癌組織和胃腺癌組織中的表達(dá)明顯增高，其表達(dá)程度與組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)深度和臨床分期等緊密相關(guān)。同時(shí)，食管鱗癌組織BAG-1S陽性表達(dá)顯著高于食管鱗癌癌旁正常組織，提示BAG-1S參與食管癌的發(fā)生和發(fā)展。但關(guān)于BAG-1S在非小細(xì)胞肺癌疾病的發(fā)生和發(fā)展中的作用有待進(jìn)一步的臨床研究。

本研究結(jié)果顯示，非小細(xì)胞肺癌組織PCDH9陽性表達(dá)率明顯低于非小細(xì)胞肺癌癌旁組織，BAG-1S陽性表達(dá)率明顯高于非小細(xì)胞肺癌癌旁組織，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），研究結(jié)果揭示了非小細(xì)胞肺癌組織PCDH9表達(dá)缺失，而BAG-1S呈高表達(dá)，與相關(guān)研究報(bào)道結(jié)果一致[12]。PCDH9陽性表達(dá)者總生存時(shí)間和無進(jìn)展生存期均明顯增高，BAG-1S陽性者總生存時(shí)間和無進(jìn)展生存期均明顯降低。相關(guān)研究報(bào)道顯示，BAG-1S在正常人體組織中弱表達(dá)甚至不表達(dá)，而在大部分腫瘤細(xì)胞均明顯高表達(dá)[13-14]。該研究同樣表明，胃腺癌組織，食管鱗癌組織和大腸癌組織中的BAG-1S顯著性高表達(dá)，其與浸潤(rùn)深度、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期等緊密相關(guān)。大量研究證實(shí)了BAG-1S高表達(dá)參與的惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展[4]。結(jié)合本研究結(jié)果，PCDH9陰性表達(dá)的非小細(xì)胞肺癌預(yù)后欠佳，而BAG-1S陽性表達(dá)的非小細(xì)胞肺癌預(yù)后欠佳。因此，PCDH9陽性或BAG-1S陰性表達(dá)有助于改善非小細(xì)胞肺癌新輔助化療患者的預(yù)后狀況。

綜上所述，PCDH9、BAG-1S蛋白表達(dá)可預(yù)示非小細(xì)胞肺癌新輔助化療預(yù)后狀況，其中PCDH9陽性表達(dá)越高，BAG-1S陽性表達(dá)越低，疾病預(yù)后越佳。

[1] Toyokawa G，Takenoyama M，Ichinose Y，et al.Multimodality treatment with surgery for locally advanced non-small-cell lung cancer with N2 disease：a review article[J].Clinical Lung Cancer，2014，16（1）：6-14.

[2]陳弢，胡國(guó)華.原鈣黏蛋白20研究進(jìn)展[J].重慶醫(yī)學(xué)，2014，43（23）：3088-3090.

[3] Raymond H M，Hermann G，John H L，et al.Outcomes by tumor histology and KRAS mutation status after lung stereotactic body radiation therapy for early-stage non-small-cell lung cancer[J].Clinical Lung Cancer，2015，16（1）：24-32.

[4] Hinitt C A M，Wood J，Lee S S，et al.BAG-1 enhances cell–cell adhesion，reduces proliferation and induces chaperone-independent suppression of hepatocyte growth factor-induced epidermal keratinocyte migration[J].Experimental Cell Research，2010，316（13）：2042-2060.

[5] Eguchi K，Oyama T，Tajima A，et al.Intratumoral gene expression of 5-fluorouracil pharmacokinetics-related enzymes in stage Ⅰ andⅡ non-small cell lung cancer patients treated with uracil-tegafur after surgery：a prospective multi-institutional study in Japan[J].Lung Cancer，2015，87（1）：53-58.

[6]孫曉艷，王亞帝，何東寧，等.BAG-1S和COX-2基因在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其對(duì)預(yù)后的意義[J].中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2014，16（32）：3840-3845.

[7] Takenaka T，Takenoyama M，Toyozawa R，et al.Concurrent chemoradiotherapy for patients with postoperative recurrence of surgically resected non-small-cell lung cancer[J].Clinical Lung Cancer，2015，16（1）：51-56.

[8]張連民，郝李剛，張華，等.血清癌胚抗原與非小細(xì)胞肺癌患者EGFR突變的關(guān)系及其對(duì)預(yù)后的影響[J].中國(guó)腫瘤臨床，2014，41（17）：1075-1079.

[9]徐寶寧，張磊，田大力，等.RhoA蛋白在人非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及臨床意義[J].中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，43（8）：710-713.

[10]高亞維，哈敏文.CIP2A在非小細(xì)胞肺癌的表達(dá)及患者預(yù)后分析[J].中國(guó)生化藥物雜志，2014，34（4）：81-84.

[11] Hattori Y，Satouchi M，Shimada T，et al.A phase 2 study of bevacizumab in combination with carboplatin and paclitaxel in patients with non-squamous non-small-cell lung cancer harboring mutations of epidermal growth factor receptor （EGFR） after failing first-line EGFR-tyrosine kinase inhibitors （HANSHIN Oncology Group 0109）[J].Lung Cancer，2015，87（2）：136-140.

[12]張引子，劉華.鴉膽子油乳注射液聯(lián)合DP方案治療非小細(xì)胞肺癌的臨床療效[J].中國(guó)老年學(xué)雜志，2014，34（17）：4766-4767.

[13]郭威早，紀(jì)紅，嚴(yán)之紅，等.紫杉醇和微小RNA對(duì)非小細(xì)胞肺癌的協(xié)同抑制作用[J].中國(guó)老年學(xué)雜志，2014，22（21）：6147-6149.

[14] Hinitt C A M，Benn T M，Threadgold S，et al.BAG-1L promotes keratinocyte differentiation in organotypic culture models and changes in relative BAG-1 isoform abundance may lead to defective stratification[J].Experimental Cell Research，2011，317（15）：2159-2170.