培美曲塞及多西他賽聯(lián)合順鉑化療對晚期肺腺癌患者免疫功能的影響

劉 波 鐘明艷 李慶萍 黃 敏 馬熙天

淋巴細(xì)胞亞群分析是檢測細(xì)胞免疫和體液免疫功能重要指標(biāo)，它能總體反映機(jī)體當(dāng)前的免疫功能、狀態(tài)和平衡水平，我們通過測定肺腺癌患者化療前后免疫功能的變化，為免疫治療提供一定依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇從2013年4月－2015年6月我院住院的70例患者，男性40例，女性30例;年齡33～82歲，中位年齡55歲。所有患者經(jīng)支氣管檢查取得病理、手術(shù)組織病理或經(jīng)過CT引導(dǎo)下或B超引導(dǎo)下穿刺下取得明確病理診斷結(jié)果。根據(jù)化療方法將患者分為培美曲塞組、多西他賽組，于化療前及化療結(jié)束后分別取靜脈抗凝血2 m l和血清2 m l，抗凝血用于檢測免疫活性細(xì)胞。

1.2 設(shè)備與方法

我院 CD3、CD4、CD8、CD4/CD8 及 NK 細(xì)胞特異性細(xì)胞固定及檢測法，SemiBio細(xì)胞免疫芯片以細(xì)胞分離固定技術(shù)為基礎(chǔ)，利用抗原抗體特異性反應(yīng)，通過芯片基板達(dá)到將特異性細(xì)胞進(jìn)行固定、分離的目的，完成檢測。具體主要流程:(1)靜脈標(biāo)本血2 ml搖勻K2EDTA抗凝血加于相應(yīng)編號380 ml磷酸鹽緩沖液中，即刻混勻。(2)將濕盒置于水平臺，加室溫水至濕盒底部被完全覆蓋。(3)取出玻片置于濕盒架上，將包被面朝上，按序?qū)?biāo)簽貼于玻片一端，后將玻片置于濕盒架上。(4)吸取5 ml稀釋血樣，滴入玻片方框區(qū)域中心。確認(rèn)沒有血樣流出，且方框內(nèi)無氣泡，蓋緊盒蓋，濕溫(20～30℃)孵育40 min。(5)孵育40 min后，將玻片按序插入玻片架。(6)將玻片架即刻放入磷酸鹽緩沖液中，旋轉(zhuǎn)提拉直至玻片呈無色透明。(7)將玻片架即刻放入過氧化酶染色中，靜置1 min。(8)將1 ml 2.5% ～3.5%過氧化氫溶液加入預(yù)先盛有水(至400 ml刻度線)專用缸中，攪拌均勻后制成新鮮工作溶液中。(9)將稍加瀝干的玻片架轉(zhuǎn)入新鮮過氧化氫工作溶液中，靜置4 min。(10)將玻片架轉(zhuǎn)入75%乙醇(400 ml)專用缸中，旋轉(zhuǎn)提拉直至干凈，提出后振去多余乙醇。(11)打開玻片架搭扣，將其置入SemiBio自動(dòng)玻片干燥儀下干燥6 min，確保黑框內(nèi)干燥。(12)將玻片架放入復(fù)染液中，靜置1 min。(13)將玻片架轉(zhuǎn)入純水(500 ml)專用缸中，靜置30 s，其后根據(jù)玻片數(shù)量不等提拉相應(yīng)次數(shù)，提出后振去多余水分。(14)打開玻片架搭扣將其置于SemiBio自動(dòng)玻片干燥儀下吹干。(15)通過SemiBio全自動(dòng)可視化細(xì)胞檢測儀現(xiàn)場或異地隨時(shí)進(jìn)行細(xì)胞自動(dòng)計(jì)數(shù)，重復(fù)步驟12-14。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

用SPPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料用均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差±s)表示，采用t檢驗(yàn)或方差分析。

2 結(jié)果

(1)培美曲塞組化療前后CD3明顯增高(P＜0.05);CD4值增高(P ＜0.05);CD8明顯降低(P ＜0.05);CD4/CD8升高，(P ＜0.05)，NK 值明顯升高(P＜0.05)，見表1。(2)多西他賽組化療前后 CD3、CD4值稍升高，但無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);CD8值變化無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);CD4/CD8比值稍升高，無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。NK值稍減低，無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見表1。

多西他賽組與培美曲塞組化療前后CD3、CD4、CD8、CD4/CD8、NK變化比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05)(表2)。

表1 多西他賽組與培美曲塞組化療前、后免疫指標(biāo)的表達(dá)比較±s)

表1 多西他賽組與培美曲塞組化療前、后免疫指標(biāo)的表達(dá)比較±s)

指標(biāo)多西他賽組培美曲塞組化療前 化療后 t P 化療前 化療后t P.74 70.90 ±3.35 －1.277 0.160 CD4 31.36 ±5.74 34.44 ±1.67 －6.765 0.000 34.66 ±1.62 35.10 ±2.75 －1.015 0.105 CD8 32.02 ±1.73 29.20 ±2.93 5.862 0.000 32.02 ±1.73 31.78 ±2.28 0.593 0.555 CD4/CD8 1.50 ±0.45 1.64 ±0.52 －2.784 0.005 1.45 ±0.68 1.56 ±0.78 －0.784 0.620 NK 19.64 ±2.70 21.67 ±2.78 －3.684 0.000 21.38 ±CD3 64.52 ±5.74 70.9 ±3.34 －6.784 0.000 68.5 ±5 2.93 22.18 ±2.87 －1.378 0.171

表2 培美曲塞組與多西他賽化療前后的免疫指標(biāo)變化值的比較±s)

表2 培美曲塞組與多西他賽化療前后的免疫指標(biāo)變化值的比較±s)

指標(biāo) 培美曲塞組 多西他賽組t P CD3 6.38 ±7.15 0.14 ±4.10 5.354 0.000 CD4 3.08 ±3.04 －1.16 ±4.10 3.039 0.000 CD8 2.82 ±3.26 0.24 ±2.96 4.142 0.000 CD4/CD8 0.98 ±0.86 0.43 ±0.37 1.354 0.107 NK 2.02 ±3.36 0.80 ±4.09 3.770 0.000

3 討論

培美曲塞是一種新的、多靶位葉酸拮抗劑，原理是通過細(xì)胞內(nèi)葉酸依賴性的正常代謝過程，抑制細(xì)胞復(fù)制的代謝過程，從而抑制腫瘤的生長。多西他賽為紫杉醇類抗腫瘤藥物，通過干擾細(xì)胞有絲分裂和分裂間期細(xì)胞功能所必須的微管網(wǎng)絡(luò)而起抗腫瘤作用。Hanna等［1］應(yīng)用培美曲塞VS多西他賽二線治療NSCLC的Ⅲ期臨床研究實(shí)驗(yàn)中證實(shí)在肺腺癌治療中培美曲塞優(yōu)于多西他賽，血液學(xué)毒性低于多西他賽，因此培美曲塞已經(jīng)越來越多應(yīng)用于治療晚期肺腺癌。

T細(xì)胞在調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)中起重要作用［2］。CD3是CD4與CD8總和，CD4+T細(xì)胞包括調(diào)節(jié)T細(xì)胞，它在免疫反應(yīng)中有免疫抑制和免疫調(diào)控作用［3］CD8+T細(xì)胞主要通過細(xì)胞毒作用殺傷腫瘤細(xì)胞，又稱細(xì)胞毒性細(xì)胞。CD4/CD8可作為NSCLC患者免疫紊亂指標(biāo)［4］。在本研究中，通過多西他賽聯(lián)合順鉑化療后CD3、CD4、CD8、CD4/CD8比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明多西他賽化療后期免疫功能無明顯下降;培美曲塞聯(lián)合順鉑治療后患者CD3、CD4、CD4/CD8值明顯升高，CD8值明顯降低，提示患者化療后機(jī)體免疫得到優(yōu)化，與國內(nèi)一些學(xué)者所報(bào)道一致［5-6］其原因可能是化療可能導(dǎo)致體內(nèi)淋巴細(xì)胞總數(shù)降低，體內(nèi)免疫自穩(wěn)機(jī)制打破原有免疫耐受，各淋巴細(xì)胞亞群向正常過程重建，化療使腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡同時(shí)激活免疫應(yīng)答，從而降低體內(nèi)腫瘤負(fù)荷，重建T細(xì)胞免疫功能［7］。本研究中，使用培美曲塞的肺腺癌患者免疫增強(qiáng)原因可能是培美曲塞的療效好于多西他賽，血液學(xué)毒性低，更有利于T細(xì)胞免疫功能重建，最終需進(jìn)一步臨床研究證實(shí)。

NK細(xì)胞可通過抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用(ADCC)發(fā)揮殺傷性腫瘤細(xì)胞功能，還可通過分泌細(xì)胞因子、通過死亡受體介導(dǎo)靶細(xì)胞凋亡和釋放穿孔素顆粒酶誘導(dǎo)凋亡等途徑而殺傷腫瘤細(xì)胞［8］?；熕幬锒酁榧?xì)胞毒性藥物，在殺滅腫瘤細(xì)胞同時(shí)也殺傷機(jī)體正常增殖和分化細(xì)胞，尤其是殺傷增殖分化的免疫細(xì)胞。一般認(rèn)為，NK細(xì)胞發(fā)揮效應(yīng)多為中、早期腫瘤，對于晚期腫瘤，NK細(xì)胞難以發(fā)揮作用。本研究中，培美曲塞組化療后NK細(xì)胞數(shù)增多，因?yàn)榛熀笸砥诜蜗侔┠[瘤退縮較快，從而導(dǎo)致NK細(xì)胞增殖，使患者免疫功能增強(qiáng)。

綜上所述，晚期肺腺癌免疫力低下，通過研究患者化療前后免疫功能指標(biāo)變化情況，可為針對性使用化療用藥提供理論基礎(chǔ)，并進(jìn)行針對性的免疫治療。

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