桂枝茯苓復方中桂枝揮發(fā)油提取及其包合工藝研究

路 麗，關琴笑，趙 路，容悅瑩，梁生旺，王淑美

(廣東藥學院 中藥學院，廣東 廣州 510006)

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桂枝茯苓復方中桂枝揮發(fā)油提取及其包合工藝研究

路 麗，關琴笑，趙 路，容悅瑩，梁生旺，王淑美*

(廣東藥學院 中藥學院，廣東 廣州 510006)

目的：優(yōu)選桂枝茯苓復方中揮發(fā)油提取及其β-環(huán)糊精包合的最佳工藝。方法：采用正交試驗法，以揮發(fā)油提取率為評價指標，加水量、浸泡時間、蒸餾時間為考察因素篩選桂枝茯苓復方中揮發(fā)油最佳提取工藝；以揮發(fā)油包合率為評價指標，揮發(fā)油與β-環(huán)糊精的投料比、包合溫度、包合時間為考察因素優(yōu)選其β-環(huán)糊精最佳包合工藝。結果：桂枝茯苓復方中揮發(fā)油最佳提取工藝為取藥材適量，加8倍量水，浸泡4h，蒸餾提取5h；其最佳包合工藝為：揮發(fā)油與β-環(huán)糊精的投料比為1∶6(mL∶g)，包合溫度為70℃，攪拌包合2h。結論：該實驗優(yōu)選的揮發(fā)油提取及包合工藝穩(wěn)定可行。

桂枝茯苓復方；揮發(fā)油；提??；包合；正交試驗設計

桂枝茯苓復方是由桂枝、茯苓、桃仁、赤芍、牡丹皮五種藥味組成，具有活血、化瘀、消徵之功效[1]。用于婦人瘀血阻絡所致塊、血瘀經(jīng)閉、行經(jīng)腹痛、產(chǎn)后惡露不盡；子宮肌瘤、慢性盆腔炎包塊、子宮內膜異位癥、卵巢囊腫上述證候者。復方中君藥桂枝主要含有揮發(fā)油類成分，臨床及藥理研究表明，揮發(fā)油具有重要的生理活性。因此，本研究采用正交試驗設計對其揮發(fā)油提取工藝進行優(yōu)化。但因揮發(fā)油具有易氧化、易揮發(fā)的特性[2]，故采用β-環(huán)糊精包合揮發(fā)油，正交試驗優(yōu)選出最佳包合工藝，從而增加揮發(fā)油的穩(wěn)定性。

1 儀器與材料

1.1 儀器

揮發(fā)油提取器；BSZZ4S型電子分析天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)；FN202-2型電熱干燥箱(長沙儀器儀表廠)；DK-S26型電熱恒溫水浴鍋(上海精宏試驗設備有限公司)；6202小型高速粉碎機(北京環(huán)亞天元機械技術有限公司)。

1.2 試藥

桂枝藥材購自廣州致信中藥飲片有限公司，經(jīng)廣東藥學院劉基柱教授鑒定為：樟科植物肉桂(CinnamomumcassiaPresl)的干燥嫩枝；β-環(huán)糊精(天津市光復精細化工研究所，純度≥99%)；屈臣氏蒸餾水；其它試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 桂枝揮發(fā)油提取工藝

2.1.1 揮發(fā)油的制備 按處方比例稱取桂枝200g，根據(jù)正交試驗設計表，加入規(guī)定量的水，浸泡一定時間，按《中國藥典》2010版一部附錄XD中的甲法進行揮發(fā)油的提取?；亓魈崛〉揭?guī)定時間，收集揮發(fā)油，精密稱定。

2.1.2 揮發(fā)油提取正交試驗設計[3-4]通過預試驗，本實驗選取揮發(fā)油體積為評價指標，采用L9(34)正交試驗優(yōu)選提取工藝。選擇浸泡時間(A)、蒸餾時間(B)、加水量(C)3個因素，每個因素3個水平的試驗方案。因素水平設計見表1，正交試驗結果見表2，方差分析見表3。

表1 提取工藝的因素水平

表2 提取工藝正交試驗結果

表3 提取工藝的方差分析結果

注：F0.05(2,2)=19.00；F0.01(2,2)=99.00。

以揮發(fā)油體積為評價指標進行直觀分析和方差分析，根據(jù)表3方差分析結果，對揮發(fā)油提取結果進行直觀分析，比較3個因素的極差，Rc>Rb>Ra，故影響因素的大小順序為C>B>A。由上述方差分析結果可知，因素C(加水量)各水平間有顯著性差異，并結合各水平的揮發(fā)油含量以及實際生產(chǎn)，優(yōu)選出最佳揮發(fā)油提取工藝為A2B2C2，即：藥材加8倍量水，浸泡4h，蒸餾提取5h。

2.1.3 驗證試驗 稱取桂枝200g，3份，按最佳提取工藝條件進行3次驗證試驗。提取揮發(fā)油體積分別為1.21mL、1.23mL、1.19mL。結果表明，該提取工藝重復性好且穩(wěn)定可行。

2.2 桂枝揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合工藝

2.2.1 包合物的制備 飽和水溶液法：精密稱取β-環(huán)糊精一定量，置于250mL錐形瓶中，加蒸餾水適量，加熱使溶解，制成飽和水溶液。冷卻至規(guī)定溫度，置磁力攪拌器上恒溫攪拌，精密量取和稱定揮發(fā)油適量，用無水乙醇按1∶3稀釋，緩慢將其滴入含β-CD的飽和水溶液中，恒溫攪拌一定時間，冷卻至室溫，置冰箱4 ℃冷藏24h，抽濾，包合物用少量水沖洗，再用乙醚沖洗3次，每次10mL，40℃減壓干燥5h，即得包合物。

2.2.2 桂枝揮發(fā)油包合工藝正交試驗設計[5-6]通過預實驗，確定揮發(fā)油包合工藝的主要影響因素有：揮發(fā)油∶β-環(huán)糊精(mL∶g)、包合溫度、包合時間，每個因素確定3個水平，采用L9(34)正交試驗表，以包合物得率為評價指標，優(yōu)選其最佳包合工藝。因素水平見表4。

表4 包合工藝因素水平

2.2.3 揮發(fā)油包合物得率測定 按《中國藥典》2010版一部附錄XD揮發(fā)油測定法中的甲法進行提取，將制得的干燥包合物精密稱定，置于500mL圓底燒瓶中，加水200mL，水蒸氣蒸餾5h，待冷卻后，讀取揮發(fā)油體積，精密稱定。按下式計算揮發(fā)油包合物得率，包合物得率(%)=包合物得量(g) /[揮發(fā)油重(g)+β-CD重(g) ]×100%，空白回收率(%)=M收集揮發(fā)油量(mg) /M加入揮發(fā)油量(mg)×100%。見表5。

表5 包合工藝正交試驗結果

方差分析表明，三個因素對包合物得率影響程度由大到小排列順序為：A>B>C，即揮發(fā)油與β-CD的投料比對評價指標的影響最大，包合溫度影響最小。最終確定最佳包合工藝條件為A2B2C2，即：桂枝揮發(fā)油與β-CD的投料比為1∶6(mL∶g)，包合溫度為70℃，攪拌包合2h。

表6 包合工藝的方差分析結果

注：F0.05(2,2)=19.00；F0.01(2,2)=99.00。

2.2.4 驗證試驗 取揮發(fā)油及β-CD適量，按最佳包合工藝條件進行3次驗證試驗。揮發(fā)油包合得率分別為63.18%、61.24%、59.97%。結果表明，該包合工藝重復性好且穩(wěn)定可行。

3 討論

本研究運用正交試驗設計進行揮發(fā)油提取工藝的研究，確定揮發(fā)油最佳提取工藝：加8倍量水，浸泡4h，蒸餾提取5h。試驗結果表明該工藝穩(wěn)定可行，揮發(fā)油得率較高。并進行揮發(fā)油包合試驗，確定了揮發(fā)油最佳包合工藝為：桂枝揮發(fā)油與β-CD的投料比為1∶6 (mL∶g)，包合溫度為70℃的條件下包合2h。

桂枝中的揮發(fā)油為鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、解熱作用的有效成分，但易揮發(fā)且遇光、熱不穩(wěn)定。在傳統(tǒng)工藝中，含揮發(fā)油的固體制劑多是將揮發(fā)油單獨提取后，用易揮發(fā)的溶媒(乙醇)稀釋后，噴灑或兌于浸膏中，其熱穩(wěn)定性差，無法保證制劑在有效期內的質量和臨床療效[7]。通過β-環(huán)糊精包合技術，液態(tài)的桂枝揮發(fā)油成為穩(wěn)定的固態(tài)，增強了其穩(wěn)定性，同時由于β-CD的特性，提高了制劑的生物利用度。

[1] 國家藥典委員會. 中國藥典(一部)[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：984.

[2] 傅亮，饒小勇，黃愷，等. 四逆泡騰片中揮發(fā)油提取及包合工藝[J]. 中國實驗方劑學雜志，2012，18(4)：5-9.

[3] 楊敏，許漢林，潘洪林. 莪術揮發(fā)油的提取及包合工藝研究[J]. 時珍國醫(yī)國藥，2008，19(6)：1404-1405.

[4] 嚴建業(yè)，王元清，喻林華，等. 八角茴香揮發(fā)油的提取與β-環(huán)糊精包合研究[J]. 中成藥，2010，32(2)：316-318.

[5] 李鐘，林秀旎，胡海容. 廣藿香和佩蘭揮發(fā)油提取和包合工藝的研究[J]. 中成藥，2009，31(4)：632-633.

[6] 賈曉斌，高成林，陳彥，等. 小兒腹瀉暖臍散中揮發(fā)油的提取及其β-環(huán)糊精包合物的制備研究[J]. 中成藥，2009，31(12)：1852-1854.

[7] 王銳，劉曉莉，葛斌，等. 消乳增膠囊揮發(fā)油提取及其β-環(huán)糊精包合工藝研究[J]. 中成藥，2013，35(3)：619-621.

(責任編輯：宋勇剛)

Study on the Technological Process of the Extraction and the β-Cyclodextrin Inclusion of the Volatile Oil in Guizhifuling Compound

Lu Li，Guan Qinxiao，Zhao Lu，Rong Yueying，Liang Shengwang，Wang Shumei*

(Guangdong Parmaceutical University, Guangzhou 510006, China)

Objective:To study the extraction and β-cyclodextrin inclusion of volatile oil in Guizhifuling compound.Methods:The extraction technology of volatile oil from Guizhifuling compound was optimized by orthogonal test design with the yield of volatile oil as evaluation index and with the amount of water, soaking time and extraction time as factors. Inclusion process of β-CD was optimized by volatile oil rate as evaluation index and with the ratio of volatile oil to β-CD, inclusion temperature and mixing time as factors. Results:The optimal preparation process for extraction was established as follows: assign 8 times water into mixture of crude drugs, soaking 4h with water and distillating for 5h. The suitable inclusion condition was established as follows: the proportion of volatile oil and β-CD was 1∶6 (mL∶g), the inclusion temperature was 70 ℃ and mixing time was 2h. Conclusion:This method established for the extraction of volatile oil and β-cyclodextrin inclusion process was steady and feasible.

Guizhifuling Compound; Volatile Oil; Extraction; Inclusion; Orthogonal Test Design

2014-08-25

國家自然科學基金項目(81073024)

路麗(1990-)，女，廣東藥學院碩士研究生，研究方向為中藥質量控制。

王淑美(1966-)，女，博士，廣東藥學院教授，碩士生導師，研究方向為中藥質量控制。E-mail：shmwang@sina.com

R284.2

A

1673-2197(2015)01-0020-03

10.11954/ytctyy.201501011