HPLC法測(cè)定舒肝平胃丸中蒼術(shù)素含量

劉加寶

(牡丹江大學(xué) 生物制藥與食品工程學(xué)院，黑龍江 牡丹江 157000)

?

HPLC法測(cè)定舒肝平胃丸中蒼術(shù)素含量

劉加寶

(牡丹江大學(xué) 生物制藥與食品工程學(xué)院，黑龍江 牡丹江 157000)

目的：建立高效液相色譜法測(cè)定舒肝平胃丸中蒼術(shù)素含量的方法。方法：采用C18色譜柱，流動(dòng)相為甲醇-水(79∶21)，流速1.0mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)340nm。結(jié)果：線性回歸方程為Y=0.094 2X+0.046 9，r=0.999 8，線性關(guān)系良好；平均回收率(n=5)為100.2%，RSD為0.41%。結(jié)論：該方法準(zhǔn)確可靠，重現(xiàn)性良好，簡(jiǎn)單易行，適用于舒肝平胃丸中蒼術(shù)素含量的測(cè)定。

HPLC法；舒肝平胃丸；蒼術(shù)素；含量

“舒肝平胃丸”為《中國(guó)藥典》2010版新增品種，由姜厚樸、陳皮、麩炒枳殼、法半夏、蒼術(shù)、炙甘草和焦檳榔等七味中藥組成，具有舒肝和胃、化濕導(dǎo)滯的作用。其中蒼術(shù)為菊科植物茅蒼術(shù)(Atractylodeslancea(Thunb.)DC.)或北蒼術(shù)(Atractylodeschinensis(DC.) Koidz.)的干燥根莖，具有促進(jìn)胃腸道運(yùn)動(dòng)、抗?jié)?、抗心肌梗塞、抑制子宮平滑肌、止痛、保肝、抑菌等作用[1]。蒼術(shù)主要成分為揮發(fā)油，其中主要活性成分為倍半萜類和聚乙烯炔類成分，蒼術(shù)素屬聚乙烯炔類成分[2]。舒肝平胃丸收載于《中國(guó)藥典》2010版，其中記載厚樸中厚樸酚與和厚樸酚的含量測(cè)定，難以控制藥品的質(zhì)量，因此建立其他中藥含量的測(cè)定方法，具有十分重要的意義。蒼術(shù)中蒼術(shù)素的含量測(cè)定方法報(bào)道較多[3-11]，本文在文獻(xiàn)報(bào)道及法定標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，建立HPLC法測(cè)定舒肝平胃丸中蒼術(shù)素含量的方法。結(jié)果表明，該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、靈敏、穩(wěn)定，可用于制劑的質(zhì)量控制，現(xiàn)具體報(bào)道如下。

1 材料

1.1 儀器

浙江福立FL2200I高效液相色譜儀(二元高壓泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、紫外檢測(cè)器)，N2200工作站；電子天平；超聲波儀。

1.2 試藥

蒼術(shù)素(批號(hào)111924-201303)，購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；甲醇為色譜純，水為重蒸水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：C18色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動(dòng)相：甲醇-水(79∶21)；檢測(cè)波長(zhǎng)340nm，柱溫30℃。進(jìn)樣量：10μL；流速：1.0mL·min-1；理論塔板數(shù)按蒼術(shù)素峰計(jì)算不低于3 000。

2.2 供試品溶液制備

取舒肝平胃丸適量，研細(xì)，取約1.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理(功率350W，頻率35kHz)1h，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)充減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，即得。

2.3 對(duì)照品溶液制備

取蒼術(shù)素對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成25μg·mL-1溶液，即得。

2.4 陰性對(duì)照溶液制備

取不含蒼術(shù)的陰性對(duì)照樣品(以舒肝平胃丸制法制備)，按供試品溶液制備方法制得陰性對(duì)照溶液。

2.5 線性關(guān)系考察

分別精密吸取對(duì)照品溶液，進(jìn)樣，進(jìn)樣量分別為2、5、10、15、20μL，記錄色譜圖，以峰面積(A)對(duì)進(jìn)樣量進(jìn)行回歸，線性方程為：Y=0.094 2X+0.046 9，r=0.999 8，線性關(guān)系良好，線性范圍為0.050 6～0.506 0μg。

2.6 干擾性試驗(yàn)

取不含蒼術(shù)的陰性樣品，按供試品溶液制備方法處理，進(jìn)樣，陰性樣品對(duì)蒼術(shù)素?zé)o干擾。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取舒肝平胃丸，按“2.2”項(xiàng)方法制備6份，按“2.1”項(xiàng)色譜條件測(cè)定，以含量為指標(biāo)計(jì)算RSD，考察方法重復(fù)性。結(jié)果顯示：蒼術(shù)素含量平均值為0.530mg/g，RSD為0.90%，表明該方法重復(fù)性良好。見(jiàn)表1。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取“2.2”項(xiàng)制備的供試品溶液，分別于0、2、4、8、12、16h按“2.1”項(xiàng)色譜條件測(cè)定。以峰面積為指標(biāo)計(jì)算RSD，考察供試品溶液的穩(wěn)定性。結(jié)果顯示：蒼術(shù)素在6個(gè)時(shí)間點(diǎn)所測(cè)各色譜峰峰面積的RSD為1.19%，表明供試品溶液在16h內(nèi)穩(wěn)定。見(jiàn)表2。

表1 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果 (mg/g)

表2 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果 (mg/g)

圖1 舒肝平胃丸及對(duì)照品HPLC色譜

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

取已知蒼術(shù)素含量的供試品5份，分別加入定量蒼術(shù)素對(duì)照品，按擬定含量測(cè)定方法提取測(cè)定蒼術(shù)素含量。結(jié)果顯示：平均回收率為100.2%，RSD為0.41%。見(jiàn)表3。

2.10 三批樣品測(cè)定

按擬定含量測(cè)定方法測(cè)定3批樣品中蒼術(shù)素含量，不同批號(hào)的蒼術(shù)素含量穩(wěn)定，可作為本品質(zhì)量控制指標(biāo)。結(jié)果見(jiàn)表4。

表3 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果 (%)

表4 樣品測(cè)定結(jié)果 (mg/g)

3 討論

本文色譜條件的線性關(guān)系、重復(fù)性、穩(wěn)定性、加樣回收率均良好，方法可行。舒肝平胃丸中蒼術(shù)素分離度好，完全分離，為控制該品質(zhì)量提供較好的方法。該方法樣品處理簡(jiǎn)單易行，能提高藥品檢驗(yàn)效率。

3.1 色譜條件的選擇

流動(dòng)相分別選擇甲醇-水(79∶21)、甲醇-水(77∶23)和甲醇-水(80∶20)進(jìn)行試驗(yàn)，其中甲醇-水(77∶23)組出峰時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，達(dá)到23min；甲醇-水(80∶20)組出峰時(shí)間較短，7min左右，但分離度不好，與其他成分未能完全分離。甲醇-水(79∶21)組較為合適，出峰時(shí)間為11～12min，分離度好，與其他成分完全分離。

3.2 樣品處理

對(duì)樣品分別進(jìn)行加熱回流處理和超聲波處理，經(jīng)比較加熱回流方法提取較完全，但操作不方便，時(shí)間比較長(zhǎng)；超聲波法提取較加熱回流法不完全，但操作簡(jiǎn)便，故選擇超聲波法。分別對(duì)超聲時(shí)間0.5、1.0、1.5h進(jìn)行試驗(yàn)，其中1h組提取較完全，且省時(shí)，故超聲波處理時(shí)間選擇1h。

[1] 付梅紅,朱東海,方婧,等. 蒼術(shù)的化學(xué)、分子生藥學(xué)和藥理學(xué)研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)中藥雜志,2009(20):2669-2672.

[2] 陳炎明,陳靜,侴桂新. 蒼術(shù)化學(xué)成分和藥理活性研究進(jìn)展[J]. 上海中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2006(4):95-98.

[3] 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[S]. 一部. 北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.

[4] 張磊，歐陽(yáng)臻，趙明，等. 茅蒼術(shù)中蒼術(shù)酮、茅術(shù)醇、β-按葉醇和蒼術(shù)素的同時(shí)含量測(cè)定及其聚類分析[J]. 中國(guó)中藥雜志，2010(6):725-728.

[5] 南洋，賈凌云，李倩，等. RP-HPLC法同時(shí)測(cè)定蒼術(shù)中蒼術(shù)素和白術(shù)內(nèi)酯II的含量[J]. 藥物分析雜志，2010(1):17-20.

[6] 張曉蘭，李錦，李遇伯，等. 高效液相色譜法測(cè)定茅蒼術(shù)藥材中β-按葉醇與蒼術(shù)素的含量[J]. 藥物分析雜志，2009(12):2051-2054.

[7] 翟衛(wèi)峰，尉小慧，張淑霞，等. HPLC法同時(shí)測(cè)定越鞠丸提取物YJ-XCC1Z3中藁本內(nèi)酯、α-香附酮、蒼術(shù)素的含量[J]. 藥物分析雜志,2009(5):693-696.

[8] 王琰. HPLC測(cè)定二妙丸中蒼術(shù)素[J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011(24):65-66.

[9] 周軍，趙晨，王杰. 藿香正氣不同制劑中蒼術(shù)素的含量測(cè)定[J]. 藥物分析雜志，2012(8):1476-1478.

[10] 陳佳，解小霞，劉合剛. 幾個(gè)道地產(chǎn)區(qū)茅蒼術(shù)指紋圖譜及蒼術(shù)素含量測(cè)定研究[J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013(10):125-127.

[11] 李松賓，王偉麗，朱明偉，等. HPLC測(cè)定枳術(shù)解郁膠囊中蒼術(shù)素的含量[J]. 中國(guó)現(xiàn)代中藥，2013(8):695-697.

(責(zé)任編輯：李嵐春)

2014-11-20

劉加寶(1977-)，男，碩士，牡丹江大學(xué)副教授，研究方向?yàn)樯镏扑?。E-mail：baobao6927903@163.com

R284

A

1673-2197(2015)04-0040-02

10.11954/ytctyy.201504017