正交設(shè)計(jì)優(yōu)化金銀花綠原酸煎提工藝

徐殿紅，范慶龍，高曉艷，陳永杰，蘇 光

(江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司，江蘇 連云港 222047)

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正交設(shè)計(jì)優(yōu)化金銀花綠原酸煎提工藝

徐殿紅，范慶龍，高曉艷，陳永杰，蘇 光

(江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司，江蘇 連云港 222047)

目的：篩選金銀花中綠原酸的最佳提取工藝。方法：采用混合正交試驗(yàn)法，以浸膏得率和綠原酸轉(zhuǎn)移率為指標(biāo)，考察純化水pH值、煎煮時(shí)間、加水量、煎煮次數(shù)對(duì)提取工藝的影響。結(jié)果：最佳提取工藝為以藥材12倍量pH值為2的純化水煎煮提取2次，每次2h。結(jié)論：在最佳提取條件下，綠原酸轉(zhuǎn)移率最高，該優(yōu)化工藝重復(fù)性好，操作簡(jiǎn)便，適合工業(yè)化生產(chǎn)。

金銀花；綠原酸；混合正交設(shè)計(jì)；提取工藝

金銀花為忍冬科植物忍冬(LonicerajaponicaThunb.)的干燥花蕾或初開花，具有清熱解毒、涼散風(fēng)熱的功效，臨床上用于治療風(fēng)熱感冒、熱毒瘡癰、咽喉腫痛等證[1]。通常認(rèn)為河南所產(chǎn)的“密銀華”和山東所產(chǎn)的“濟(jì)銀花”質(zhì)量最好，為道地藥材。金銀花治療溫?zé)岵≡谛l(wèi)可散，在氣可清，在營(yíng)可透，熱病后期可用于清除余熱，具有保肝護(hù)肝[2]和清熱解毒[3]等功效，被稱為中藥之瑰寶，尤其在預(yù)防非典的中藥處方中，金銀花的應(yīng)用頻率最高[4]。

現(xiàn)代研究表明，金銀花的主要活性成分為綠原酸，因此常以綠原酸含量的高低來(lái)評(píng)價(jià)其質(zhì)量?jī)?yōu)劣[5]。綠原酸是含有羧基和鄰二酚羥基的有機(jī)酸，易溶于水、乙醇和丙酮等溶劑。目前，從金銀花中提取綠原酸多采用水煎法、水提醇沉法、稀醇回流法、動(dòng)態(tài)浸提法、超聲波法和滲漉法等，工業(yè)生產(chǎn)一般采用廉價(jià)的水煎煮法進(jìn)行提取。現(xiàn)有文獻(xiàn)中多探討提取過(guò)程中煎煮時(shí)間、加水量、煎煮次數(shù)等因素對(duì)綠原酸轉(zhuǎn)移率的影響，卻極少將所用純化水的pH值作為考察指標(biāo)進(jìn)行研究。本文將在常規(guī)指標(biāo)的基礎(chǔ)上額外考察純化水pH值對(duì)綠原酸轉(zhuǎn)移率與浸膏收率的影響，采用SPSS Statistics 19.0設(shè)計(jì)正交實(shí)驗(yàn)，并進(jìn)行方差分析，以確定金銀花中綠原酸的最優(yōu)提取工藝。

1 儀器、試劑與試藥

1.1 儀器

Agilent 1200高效液相色譜儀，由Agilent公司生產(chǎn)，配有自動(dòng)脫氣機(jī)、四元梯度泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、紫外檢測(cè)器。

1.2 試劑

綠原酸對(duì)照品(批號(hào)110753-200413，中國(guó)食品藥品檢定研究院)，甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

1.3 藥材

金銀花(產(chǎn)地山東平邑) 經(jīng)公司質(zhì)量控制部檢驗(yàn)鑒定符合藥典標(biāo)準(zhǔn)。

2 方法與結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)因素及水平[6-7]

根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[7]及實(shí)際工業(yè)生產(chǎn)情況，影響金銀花中綠原酸提取的因素主要包括煎煮時(shí)間(A)、加水量(B)、煎煮次數(shù)(C)，本研究將同時(shí)對(duì)純化水pH值(D)進(jìn)行考察。A、B、C三個(gè)因素分別選取3個(gè)水平進(jìn)行考察，D因素則選擇未調(diào)節(jié)以及酸性條件下的3個(gè)水平(pH值為2、4、6)進(jìn)行考察。采用SPSS Statistics 19.0軟件設(shè)計(jì)混合水平正交L16(4×33)表格，并以浸膏收率、綠原酸轉(zhuǎn)移率為評(píng)價(jià)指標(biāo)。具體考察因素及其水平見表1。

表1 綠原酸提取工藝因素水平

2.2 總浸膏得率測(cè)定[8]

稱取蒸發(fā)皿凈重，將金銀花煎煮液置于蒸發(fā)皿中，水浴蒸至近干后連同蒸發(fā)皿一同轉(zhuǎn)移至真空干燥箱中，用油泵減壓低溫干燥至恒重，準(zhǔn)確稱取蒸發(fā)皿增重質(zhì)量?？偨嗟寐?(浸膏質(zhì)量/藥材量)×100%。

2.3 綠原酸含量檢測(cè)

2.3.1 色譜條件 色譜柱為Kromasil C18(4.6mm×250mm,5μm)，流動(dòng)相為1%醋酸水溶液-甲醇(80∶20)，檢測(cè)波長(zhǎng)為327nm，進(jìn)樣量為10μL。

2.3.2 對(duì)照品溶液制備 精密稱取綠原酸對(duì)照品6.012mg，置于100mL容量瓶中，加1%醋酸水溶液-甲醇(1∶1)溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3.3 供試品溶液制備 精密稱取金銀花提取液0.1g，置于100mL容量瓶中，加1%醋酸水溶液-甲醇(1∶1)適量，超聲使其溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4 正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)方法

煎煮時(shí)間(A)、加水量(B)、煎煮次數(shù)(C)各取3個(gè)水平，純化水pH值(D)取4個(gè)水平，正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)見表2。取16份100g金銀花按照正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)測(cè)定浸膏得率和綠原酸轉(zhuǎn)移率，每種組合重復(fù)進(jìn)行3次試驗(yàn)。結(jié)果見表2。

表2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

2.5 方差分析

本研究設(shè)計(jì)的正交試驗(yàn)表格中無(wú)空白列作為對(duì)照，因此在進(jìn)行方差分析過(guò)程中選取離差平方和最小的近似值作為誤差估計(jì)，同時(shí)使用P=0.05進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，采用SPSS 19.0軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，方差分析結(jié)果表3。

表3 方差分析結(jié)果

由表3數(shù)據(jù)可以看出影響浸膏得率、綠原酸轉(zhuǎn)移率的因素順序以及最優(yōu)方案分別如表4所示。

表4 因素主次順序與最優(yōu)方案

本實(shí)驗(yàn)以綠原酸轉(zhuǎn)移率為主要考察指標(biāo)，浸膏得率為輔助考察指標(biāo)，結(jié)合兩者選取最優(yōu)方案。根據(jù)表4可知極差值對(duì)綠原酸轉(zhuǎn)移率影響大小順序?yàn)镈>C>A>B，結(jié)合表3中的誤差來(lái)源分析可知各指標(biāo)均對(duì)其具有顯著性影響(P<0.05)。因此以浸膏得率為指標(biāo)的最優(yōu)方案為C3D2B1A2，以綠原酸轉(zhuǎn)移率為指標(biāo)的最優(yōu)方案為D1C2A3B3。由表4數(shù)據(jù)可以看出，在影響綠原酸轉(zhuǎn)移率的因素中，提取用純化水pH值的影響最為顯著。為進(jìn)一步探討純化水pH值對(duì)于綠原酸提取率的影響趨勢(shì)，在最優(yōu)方案(D1C2A3B3)的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步將D因素增加為6水平而A、B、C因素均不變，再進(jìn)行5次試驗(yàn)，結(jié)果表明綠原酸轉(zhuǎn)移率隨著純化水酸性的增強(qiáng)而逐漸增加，浸膏得率隨酸性的增強(qiáng)變化不明顯。結(jié)果見表5。

表5 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3 討論

金銀花又名銀花、雙花、忍冬花、鷺鷥花、二寶花，為忍冬科多年生半常綠纏繞性木質(zhì)藤本植物忍冬的花蕾和初開花。其味甘性寒，具有清熱解毒、疏散風(fēng)熱的功效。金銀花的主要活性成分為綠原酸，因此常以綠原酸含量的高低來(lái)評(píng)價(jià)其質(zhì)量?jī)?yōu)劣。本研究采用混合正交試驗(yàn)法，以浸膏得率和綠原酸轉(zhuǎn)移率為指標(biāo)，創(chuàng)新性考察純化水pH值、煎煮時(shí)間、加水量、煎煮次數(shù)對(duì)金銀花提取工藝的影響，篩選出最佳提取工藝為以藥材12倍量pH值為2的純化水提取2次，每次2h。在最佳提取條件下，綠原酸轉(zhuǎn)移率最高，該優(yōu)化工藝重復(fù)性好，操作簡(jiǎn)便，適合工業(yè)化生產(chǎn)。

[1] 李菁,侯飛燕,李榮東,等.金銀花中總黃酮微波輔助提取工藝優(yōu)化及其含量動(dòng)態(tài)變化[J].中南藥學(xué),2014,12(1):32-36.

[2] 包信通,郭承軍,王鋒.金銀花對(duì)流感小鼠肺損傷保護(hù)作用初探[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2013,24(3):583-584.

[3] 雷玲,李興平,白筱璐,等.金銀花抗內(nèi)毒素、解熱、抗炎作用研究[J].中藥藥理與臨床,2012,28(1):115-117.

[4] 劉鋼,張平,夏泉.正交試驗(yàn)法優(yōu)選金銀花的提取工藝研究[J].海峽藥學(xué),2012,24(8):17-18.

[5] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[M].第一部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2000：177.

[6] 何健,韓正洲,張躍飛.正交試驗(yàn)法優(yōu)選苦參配方顆粒的提取工藝[J].海峽藥學(xué),2011,23(5):25-26.

[7] 陸錦銳,楊建宇.金銀花的研究回顧[J].中國(guó)中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育,2012,10(18):112-115.

[8] 李榮,胡成穆,鐘明媚,等.正交設(shè)計(jì)研究金銀花綠原酸煎提工藝[J].安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2006,25(1):39-40.

(責(zé)任編輯：尹晨茹)

2014-11-02

徐殿紅(1979-)，女，江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司工程師，研究方向?yàn)橹兴幪崛∨c制劑研究。

R284.2

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1673-2197(2015)04-0028-02

10.11954/ytctyy.201504013