羊水細(xì)胞培養(yǎng)用于產(chǎn)前診斷878例分析

摘要：目的 分析孕中期行產(chǎn)前診斷孕婦羊水細(xì)胞染色體核型，探討羊水染色體檢查對(duì)診斷胎兒染色體病的臨床意義。方法 對(duì)878例孕中期具有產(chǎn)前診斷指征的孕婦行羊膜腔穿刺術(shù)抽羊水進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)、G顯帶技術(shù)及染色體核型分析。結(jié)果 成功分析的878例羊水標(biāo)本，檢出異常核型15例（1.71%），其中數(shù)目異常9例，占異常核型的60.00%；結(jié)構(gòu)異常6例，在異常核型中占40.00%；檢出正常變異染色體81例（9.21%）。結(jié)論 產(chǎn)前診斷是防止異常染色體兒出生的有效手段，有利于降低出生缺陷率、提高出生人口素質(zhì)生命質(zhì)量。

關(guān)鍵詞：羊水細(xì)胞；染色體異常；染色體核型分析；產(chǎn)前診斷

降低出生缺陷提高出生人口素質(zhì)是衛(wèi)生部門的長(zhǎng)期工作目標(biāo)，當(dāng)前，羊膜腔穿刺術(shù)仍然是應(yīng)用最廣泛而且準(zhǔn)確的產(chǎn)前診斷方法。收集羊水中的胎兒上皮脫落細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，從而獲得胎兒染色體中期分裂相，進(jìn)行核型分析，是防止染色體病患兒出生的有效手段。

1 資料與方法

1.1一般資料 2013年1月～2014年2月來我院圍產(chǎn)保健科門診及遺傳咨詢門診就診的具有產(chǎn)前診斷指征的孕婦879例，年齡18～44歲，孕齡18～22+6w，其中產(chǎn)前篩查高風(fēng)險(xiǎn)551例，高齡孕婦298例，其余30例（不良孕產(chǎn)史12例，彩超提示胎兒畸形16例，先天愚型孕婦1例），孕婦要求行羊膜腔穿刺術(shù)1例。

1.2方法

1.2.1采樣 在常規(guī)無菌條件下行羊膜腔穿刺術(shù)，B超引導(dǎo)下進(jìn)行穿刺，最初的1～2ml羊水棄去，隨后抽取羊水20ml，注入2支15ml無菌離心管中（每支10ml）離心。

1.2.2接種 羊水標(biāo)本以2100r/min離心后棄上清液，加羊水培養(yǎng)基（AmnioMAX-Ⅱ）5ml于離心管中混勻后移入羊水培養(yǎng)瓶中，后置于5%CO2，37℃培養(yǎng)，按衛(wèi)生部產(chǎn)前診斷行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（WS322《胎兒染色體異常與開放性神經(jīng)管缺陷的產(chǎn)前篩查與診斷技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)》）要求分別采用兩套培養(yǎng)系統(tǒng)進(jìn)行培養(yǎng)與制片。

1.2.3收獲 培養(yǎng)7d后觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，視情況換液，當(dāng)培養(yǎng)瓶中有9～16個(gè)細(xì)胞克隆貼壁生長(zhǎng)，且細(xì)胞克隆中有較多大、園、折光性強(qiáng)的分裂細(xì)胞時(shí)，加秋水仙素后繼續(xù)培養(yǎng)2～4h再進(jìn)行收獲。

1.2.4制片 經(jīng)過低濃度胰酶短時(shí)消化、刮細(xì)胞、離心、低滲、固定等步驟，將獲得的沉淀制成細(xì)胞懸液，濕冰片滴片，每瓶培養(yǎng)物分開制片編號(hào)，經(jīng)過75℃烤片3h、G顯帶。

1.2.5分析 每例標(biāo)本選擇形態(tài)適中、顯帶清楚、帶數(shù)320條以上的核型分析6個(gè)，計(jì)數(shù)20個(gè)核型，如遇有疑問的標(biāo)本則需增加分析和計(jì)數(shù)的分裂相數(shù)。本實(shí)驗(yàn)室從實(shí)驗(yàn)到核型分析均分兩組，由兩人進(jìn)行，兩組分析878例羊水染色體結(jié)果均一致。

2 結(jié)果

2.1共采集標(biāo)本879例，培養(yǎng)成功878例，培養(yǎng)成功率達(dá)99.89%。在成功培養(yǎng)的878例羊水染色體分析中，核型為46，XY451例（51.37%），46，XX427例（48.63%），檢出染色體異常15例，占受檢人數(shù)的1.71%（15/878），染色體數(shù)目異常9例（60%），其中常染色體數(shù)目異常8例，分別為21三體6例，18三體1例，13三體1例；性染色體數(shù)目異常1例，核型為47，XYY；染色體結(jié)構(gòu)異常6例（40%），其中羅伯遜易位3例，其他平衡易位3例；正常變異染色體81例（9.21%），其中inv（9）12例；D、G組染色體的短臂和隨體增加共46例；1、9、16號(hào)染色體異染色質(zhì)區(qū)增加共18例；Y染色體長(zhǎng)臂增加5例。

2.2行羊膜腔穿刺術(shù)的879例孕婦，有1例孕婦術(shù)后1d出現(xiàn)下腹疼痛，因及時(shí)就診，未發(fā)生流產(chǎn)。術(shù)后均未發(fā)生感染、胎盤早剝、陰道流血、胎膜早破、羊水栓塞及胎兒損傷等并發(fā)癥。

3 討論

3.1羊膜腔穿刺術(shù)在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用 在產(chǎn)前及時(shí)、安全、準(zhǔn)確地診斷胎兒遺傳病，有利于醫(yī)務(wù)人員和孕婦共同協(xié)商、選擇恰當(dāng)?shù)奶幚矸桨?。產(chǎn)前診斷的方法很多，包括細(xì)胞遺傳學(xué)、生化遺傳學(xué)以及分子遺傳學(xué)等。其中通過羊膜腔穿刺、培養(yǎng)羊水細(xì)胞、進(jìn)行核型分析的細(xì)胞遺傳學(xué)方法診斷胎兒染色體核型異常，是目前臨床上使用最廣泛的一種方法。羊膜腔穿刺羊水細(xì)胞培養(yǎng)是當(dāng)前細(xì)胞遺傳產(chǎn)前診斷的金標(biāo)準(zhǔn)[1]。

羊膜腔穿刺是一種通過B超引導(dǎo)，經(jīng)腹部穿刺羊膜腔收集羊水的方法。我們?cè)趯?shí)際工作中深刻地體會(huì)到，只要嚴(yán)格遵循操作規(guī)范，積極探索操作方法，運(yùn)用羊膜腔穿刺開展產(chǎn)前診斷具有非常高的臨床價(jià)值。

羊膜腔穿刺作為一種創(chuàng)傷性診斷方法，其對(duì)母親和胎兒的影響是導(dǎo)致孕婦及其家屬焦慮的主要原因。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，孕中期羊膜腔穿刺的流產(chǎn)率在0.5%～1%[2]。為了減輕創(chuàng)傷，我們嚴(yán)格控制操作指征，努力預(yù)防感染，術(shù)后密切隨訪，及時(shí)處理潛在風(fēng)險(xiǎn)。在我們的臨床操作中，并沒有發(fā)生術(shù)后流產(chǎn)的情況。

多數(shù)情況下，在孕中期（18～22+6w）行羊膜腔穿刺效果較好。穿刺過早，雖然有活性的羊水細(xì)胞比例高，但羊水細(xì)胞數(shù)量不足，對(duì)胎兒損傷較大；過晚穿刺，羊水細(xì)胞活力減弱，培養(yǎng)效果欠佳[3]。

3.2羊水細(xì)胞核型分析診斷唐氏綜合征 唐氏綜合征（21三體綜合征）是常見的三體綜合征，是由于患者細(xì)胞內(nèi)多了1條21號(hào)染色體造成的。表現(xiàn)為智力中重度低下、特殊面容及各種先天畸形的綜合征，發(fā)病率為1/600～1/800[4]。在妊娠過程中，患該病的胎兒更容易流產(chǎn)、死產(chǎn)，因此孕中期的檢出率應(yīng)高于新生兒[5]。在我們檢出的孕中期染色體核型異常的胎兒中，40%的為21三體綜合征，并已全部引產(chǎn)。

研究發(fā)現(xiàn)，在某些特定人群中該病的發(fā)生率明顯增高，包括：①篩查陽(yáng)性者；②母親分娩時(shí)年齡35歲以上；③曾生育唐氏綜合征患兒；④父母有一方是累及21號(hào)染色體羅伯遜易位或其他平衡易位攜帶者或21號(hào)染色體鑲嵌體。對(duì)于這部分人群，是非常有必要行孕中期羊膜腔穿刺術(shù)的。在我們發(fā)現(xiàn)的6例唐氏綜合征患者中，3例孕婦為產(chǎn)前篩查高風(fēng)險(xiǎn)，2例孕婦為高齡，1例孕婦本人為唐氏綜合征患者。

3.3其他異常核型的產(chǎn)前診斷 據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，新生兒中染色體異常的發(fā)生率為1/150～1/120。其中，21三體發(fā)生率最高，其次為性染色體異常和結(jié)構(gòu)性染色體異常[6]。篩選的基本原則是一方面盡可能讓所有潛在的患者被檢出，降低漏檢率，另一方面應(yīng)嚴(yán)格控制接受產(chǎn)前診斷的孕婦例數(shù)，以減少診斷過程對(duì)產(chǎn)婦身體和心理的不良影響以及醫(yī)療資源的不當(dāng)耗費(fèi)。本研究中1例18三體和1例13三體，它們是因彩超提示畸形而作羊水穿刺，穿刺后就引產(chǎn)，其表型與染色體結(jié)果相符；1例47，XYY，它是最常見的性染色體疾病之一，小孩已出生，其表型并未見異常。XYY綜合征的產(chǎn)前診斷指征不明，多為零星發(fā)現(xiàn)。

染色體易位是染色體結(jié)構(gòu)異常中最常見的情況。如果易位沒有導(dǎo)致遺傳物質(zhì)的丟失，并不表現(xiàn)出病理特征，即為平衡易位。親代中一方若為平衡易位攜帶者，其子代核型可能出現(xiàn)3種情況：①正常；②表型正常的平衡易位攜帶者；③不平衡易位。出現(xiàn)不平衡易位的胎兒往往流產(chǎn)，如果存活，常表現(xiàn)為不同程度的畸形或發(fā)育缺陷。因此夫婦雙方中一方為平衡易位攜帶者的，也應(yīng)建議接受產(chǎn)前診斷。本研究中，發(fā)生羅伯遜易位和其他平衡易位有6例羊水標(biāo)本，對(duì)其表性正常的父母作外周血染色體檢查，發(fā)現(xiàn)父母與胎兒核型一致的有5例，有1例父母染色體均正常，說明該胎兒易位為新發(fā)生的。對(duì)于6例的隨訪，已正常分娩，新生兒表型均正常。

3.4染色體正常變異的產(chǎn)前診斷 染色體變異屬遺傳多態(tài)性改變，一般不引起臨床癥狀[7]。在878例羊水細(xì)胞染色體核型中，染色體正常變異的異常檢出率為9.21%，inv（9）12例，全部為臂間倒位，D、G組染色體的短臂和隨體增加最多達(dá)46例，1、9、16號(hào)染色體次縊痕增加共18例，Y染色體長(zhǎng)臂增加（大Y）5例。81例染色體正常變異者中有79例做了父母的外周血染色體檢查，結(jié)果均與胎兒一致。胎兒出生后進(jìn)行了隨訪表型均為正常。

對(duì)于染色體病的產(chǎn)前診斷，逐漸受到醫(yī)務(wù)工作者和廣大孕產(chǎn)婦的重視。經(jīng)羊膜腔穿刺、培養(yǎng)羊水細(xì)胞、開展產(chǎn)前診斷的技術(shù)雖然相對(duì)安全、有效，但如何準(zhǔn)確界定適用指征、改良細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，尤其是如何更加精確描述染色體結(jié)構(gòu)異常乃至基因的缺失、突變等，仍待我們進(jìn)一步深入探索。

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編輯/周蕓霏