酶聯(lián)免疫法篩查丙型肝炎病毒抗體的不確定度判定方式探討

摘要：目的 探討酶聯(lián)免疫法篩查丙型肝炎病毒抗體的不確定度判定方式，降低假陰性或者假陽性結(jié)果判定的風(fēng)險。方法 應(yīng)用丙型肝炎病毒抗體酶聯(lián)免疫吸附法診斷試劑盒，對樣本中的丙型肝炎病毒抗體檢測結(jié)果的不確定性進(jìn)行評定。結(jié)果 1號樣本檢測結(jié)果有83.7%的可能性為陰性，有16.3%的可能性為假陽性，而3號樣本有12.41%的可能性為陽性，有88.59%的可能性為假陰性。結(jié)論 對檢測結(jié)果的完整表述使用含有檢測不確定度的結(jié)果，對假陰性或者假陽性檢測結(jié)果的風(fēng)險大小進(jìn)行測定。

關(guān)鍵詞：酶聯(lián)免疫法；丙型肝炎病毒抗體；測量不確定度；方式

測量不確定度是表征合理的賦予被測量之值的分散性，與測量結(jié)果相聯(lián)系的參數(shù)。目前篩查丙型肝炎病毒抗體的最主要方法是酶聯(lián)免疫法，對酶聯(lián)免疫法檢測丙型肝炎病毒抗體結(jié)果的不確定度需要建立評定程序，并在此之前需要分析和量化典型例子的不確定度，并進(jìn)行完整的評估，可以降低檢測結(jié)果中出現(xiàn)較多的假陰性合假陽性。

1 資料與方法

1.1一般資料 隨機(jī)選取2011年～2015年在我院就診的80例患者作為研究的對象，其中男性患者46例，女性患者34例，年齡在22～75歲。其中有40例患者患者有丙型肝炎病毒抗體，有15例可疑患者（S/CO0.86～1.01），有25例陰性患者（S/CO<0.86）。按照WS213-2001和AASLD的標(biāo)準(zhǔn)診斷對患者進(jìn)行診斷患者，丙型肝炎病毒抗體物質(zhì)液由康徹斯坦生物公司提供。

1.2試劑 酶聯(lián)免疫法檢測丙型肝炎病毒抗體診斷試劑盒由珠海麗珠試劑股份有限公司提供，微粒子酶免疫法丙型肝炎病毒抗體檢測試劑盒和定標(biāo)液由美國雅培公司提供的AxsymTM System免疫分析儀的配套試劑。

1.3儀器 DRW-320自動酶標(biāo)洗板機(jī)，ZW-A微量振蕩器由江蘇金壇市金城國勝實驗儀器廠提供。KHB ST-360自動多功能酶標(biāo)分析儀由上海科華生物工程股份有限公司提供AxsymTM System免疫分析儀由美國雅培公司提供。

1.4方法 檢測丙型肝炎病毒抗體要按照酶聯(lián)免疫法標(biāo)準(zhǔn)化程序操作，把空白孔調(diào)零后，分別在450nm和630nm的雙波長處測定各孔的OD值，最后將檢測的結(jié)果進(jìn)行打印。

2 結(jié)果

2.1 1號樣本檢測結(jié)果有62.3%的可能性為陰性，有37.7%的可能性為假陽性，而3號樣本有85.6%的可能性為陽性，有14.4%的可能性為假陰性。

2.2被測量的數(shù)學(xué)模型 用CA表示結(jié)論判定，用CO表示臨界限值，確定CA=S/CO式，cut off值=NCX+0.2。用OD表示吸光度，用NC表示為陰性質(zhì)控對照OD值，用NC1表示陰性質(zhì)控對照平均OD值，0.2為修正系數(shù)。

2.3結(jié)果判定 陰性質(zhì)控對照OD值≤0.02，用0.02計算，0.02<陰性質(zhì)控對照OD值0.08，用NC1表示。樣本臨界值用NCX+0.12表示，實驗中陰性質(zhì)控對照OD值≤0.08，陽性對照OD≥0.50且CO樣本檢測結(jié)果為陽性，說明這次的檢驗結(jié)果是有效的。陽性判定為樣本OD值S/CO≥1.00，陰性判定為樣本OD值S/CO<1.00。

2.4不確定度來源 不確定度可以將待測樣本的OD值和CO植作為主要來源。

3 討論

丙型肝炎病毒最作為常見的血源性傳播疾病的病原體，一般患者容易轉(zhuǎn)為慢性肝炎。每個分量不確定度的相對貢獻(xiàn)率的得出主要是每個分量的標(biāo)準(zhǔn)不確定度與檢測結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)不確定度的比率，從這個式子中可以得出檢測結(jié)果的不確定度的貢獻(xiàn)與陰性質(zhì)控對照與待測樣本不確定度有很大的關(guān)系，也是在檢測中不能夠被疏忽的。

丙型肝炎病毒抗體檢測結(jié)果顯示：當(dāng)NC1分別為0.018/0.016和0.019時，用0.002計算，所以NCX1=NC1i=0.02，Sncl=0，CO1=0.18，S1=0.079，可以把重復(fù)性影響忽略掉。當(dāng)P=94.60%時，將擴(kuò)展因子K取值為2.0，那么U=2U（CA），所以按照式子U1=2×u（CA1），計算結(jié)果為2×0.0256347=0.047865，按照U2=2×u（CA2）的式子，計算結(jié)果為2×0.046 523=0.132782，U3的計算結(jié)果為2×0.43256=0.94582，U4的計算結(jié)果為2×0.056387=0.145879，U5=的計算結(jié)果為2×0.0235647=0.0467894，因此這5組丙型肝炎病毒抗體樣本的檢查可信區(qū)間在94.6%，1號樣本S/CO比值的波動范圍在0.87564～1.04678之間，因此CAR1（CA1range）=CA1±U1=0.9462357±0.087596。2號樣本的波動范圍在9.45781～11.54786之間，因此CAR1（CA1range）=CA1±U1=10.25746±1.04765.3號樣本的波動范圍在0.957864～1.97854之間，CAR1（CA1range）=CA1±U1=1.07895±0.107854.4號樣本的波動范圍在1.56724～1.87549之間，CAR1（CA1range）=CA1±U1=1.74576±0.17423.5號樣本的波動范圍在0.45741～0.54763之間，CAR1（CA1range）=CA1±U1=0.45271±0.043571.如果CA的值等于或者超過1，那么檢測結(jié)果就判定為陽性反應(yīng)，如果CA的值比1小，那么堅持而結(jié)果就判定為陰性反應(yīng)。美國疾病控制中心曾經(jīng)提出丙型肝炎病毒抗體3.0酶聯(lián)免疫法試劑95%陽性預(yù)測值為S/CO≥3.8，丙型肝炎病毒抗體為陽性需要多次重復(fù)檢測檢測結(jié)果S/CO>3.8。較高的假陽性率出現(xiàn)時S/CO<3.8。因此需要進(jìn)行免疫印跡實驗和核酸檢驗法反復(fù)驗證，避免出現(xiàn)較高的假陽性和假陰性。國產(chǎn)的酶聯(lián)免疫法試劑由于不當(dāng)?shù)陌豢乖?，降低了試劑的純度，增高了酶?biāo)二抗體的濃度，從而使得較高的假陽性率，而S/CO值波動的范圍變得十分的大。在本次的研究中1號樣本檢測結(jié)果有83.7%的可能性為陰性，有16.3%的可能性為假陽性，而3號樣本有12.41%的可能性為陽性，有88.59%的可能性為假陰性。4號樣樣本88.57%的可能性為陰性，5號樣本的檢測結(jié)果為陰性。

丙型肝炎病毒抗體使用酶聯(lián)免疫法檢測的結(jié)果的不確定度分量和相對貢獻(xiàn)率的評估。在對本次的80例患者進(jìn)行檢測時，通過檢測結(jié)果可以看出COi對加成呢結(jié)果的不確定度的分量在0.00122±0.000590，相對貢獻(xiàn)率為（3.1025±2.6787）%。酶標(biāo)儀準(zhǔn)確性（Ri）檢測出的結(jié)果不確定度分量在（0.005574±0.007958），相對貢獻(xiàn)率為（4.2657±0.689）%。

綜上所述，測定丙型肝炎病毒抗體使用酶聯(lián)免疫法的不確定度以及相對貢獻(xiàn)率是影響該方法過程能力分析和控制的重要質(zhì)量因素的影響依據(jù)。

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編輯/周蕓霏