Caspase—3 在大鼠心肌缺血后12h的表達(dá)

摘要：目的 探討Caspase-3 在大鼠心肌缺血后12h的表達(dá)，以探討其在急性心血管病方面的診斷意義。方法 采用結(jié)扎冠脈左前降支的方法復(fù)制大鼠心肌缺血模型，觀察心肌梗死情況，檢測(cè)Caspase-3 的表達(dá)。結(jié)果 大鼠心肌缺血后12h出現(xiàn)梗死灶，Caspase-3 明顯表達(dá)。結(jié)論 Ccaspase-3 與大鼠心肌缺血情況密切相關(guān)，早期檢測(cè)可以為心肌缺血早期病情變化提供有用的信息。

關(guān)鍵詞：Caspase-3 ；心肌缺血；早期檢測(cè)

心肌梗死病情進(jìn)展迅速，能否及早準(zhǔn)確判定疾病發(fā)展趨勢(shì)， 對(duì)能否及時(shí)有效的治療至關(guān)重要。近年來的研究表明，其中主要的發(fā)病機(jī)制之一是細(xì)胞凋亡[1]。細(xì)胞凋亡是由基因控制的細(xì)胞主動(dòng)死亡過程，Caspase-3作為細(xì)胞凋亡的指標(biāo)在其心肌缺血細(xì)胞凋亡過程起重要作用。為了探討Caspase-3早期檢測(cè)是否可以為心肌缺血早期病情變化提供有用的信息，我們觀察了大鼠心肌缺血2h后再灌注12h的Caspase-3表達(dá)情況。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇成年健康雄性SD大鼠45只，體重250～280 g。由上海市西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心有限公司提供，許可證號(hào)：SCXK（滬）2008-0016。從45只大鼠中隨機(jī)選出30只分為正常組、假手術(shù)組、模型組三組，每組各10只。

1.2 主要試劑 氯化2，3，5-三苯四氮唑（TTC）（2，3，5一Triphenyltetrazolium Chloride，TTC），美國Sigma公司，用雙蒸水配成2%濃度；水合氯醛，北京鼎國生物公司產(chǎn)品，用雙蒸水配成10%濃度。

1.3 方法 血清hS-CRP，Caspase-3 采用化學(xué)發(fā)光免疫法，心肌缺血12h后腹主動(dòng)脈取血檢測(cè)。

1.4 動(dòng)物模型制作 模型組用10%的水合氯醛（360mg/kg）腹腔注射麻醉后，采用李儀奎方法，左胸常規(guī)消毒后，于左第3～4 肋間開胸，剪開心包膜，擠出心臟，在左心耳和肺動(dòng)脈圓錐之間距左冠狀動(dòng)脈根部2～3mm處，用6-0手術(shù)線結(jié)扎冠脈左前降支（假手術(shù)組僅穿線不結(jié)扎），迅速將心臟送回胸腔，閉胸，以結(jié)扎部位以下心肌變白，搏動(dòng)減弱作為造模成功標(biāo)志。死亡及不符合標(biāo)準(zhǔn)的動(dòng)物剔除并隨機(jī)補(bǔ)充，保證每組10只成功模型。

1.5 TTC標(biāo)本取材及染色 正常組、假手術(shù)組和模型組三組大鼠在術(shù)后12h用10%水合氯醛（360mg/kg）腹腔麻醉，腹主動(dòng)脈取血后取材，剖取心臟，用冰生理鹽水洗凈殘血，濾紙吸干，稱重，去除心房及脂肪組織，將左心室橫切成1～2mm厚的薄片，置于2% TTC溶液，37℃避光孵育30min。梗死區(qū)為白色，正常心臟組織被染成玫瑰紅色。至梗死區(qū)界限清晰時(shí)取出，分離心肌梗死區(qū)，用濾紙吸干，稱質(zhì)量，計(jì)算心肌梗死率。心肌梗死率=心肌梗死區(qū)質(zhì)量（g）/全心質(zhì)量（g）×100%.

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所獲數(shù)據(jù)均為正態(tài)分布，采用x±s表示，SPSS18.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析和t 檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

3 討論

Caspase 家族是細(xì)胞凋亡過程中重要的蛋白酶；Caspase-3 是半胱天冬酶家族成員之一，參加細(xì)胞凋亡信號(hào)，它是各種細(xì)胞凋亡蛋白酶級(jí)聯(lián)反應(yīng)的必經(jīng)之路，是凋亡的關(guān)鍵酶和執(zhí)行者，故又稱之為\"死亡蛋白\"[2]；在各種程序啟動(dòng)的凋亡程序中起最后樞紐的作用，促使細(xì)胞凋亡。有學(xué)者認(rèn)為，Caspase-3 是心肌缺血預(yù)后的一個(gè)較有價(jià)值的指標(biāo)， 可以獨(dú)立預(yù)測(cè)心肌梗死的死亡率及其心腦血管病變的發(fā)生率[3]。

本實(shí)驗(yàn)顯示模型組較正常對(duì)照組和假手術(shù)組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。提示心肌梗死存在炎性反應(yīng)，導(dǎo)致血清Caspase-3水平升高。作為較可靠和靈敏的急性時(shí)相反應(yīng)指標(biāo)，血清Caspase-3水平與心血管病密切相關(guān)。

綜上所述， 心肌梗死的恢復(fù)轉(zhuǎn)歸同治療時(shí)機(jī)密切相關(guān)，及時(shí)了解心肌梗死發(fā)病趨勢(shì)，早期診斷采取有效治療是心肌梗死病情控制的前提，血清Caspase-3水平將對(duì)缺血性梗死的診治更有指導(dǎo)意義。心肌缺血大鼠測(cè)定血清Caspase-3濃度的意義在于為評(píng)價(jià)心血管病病情的早期診斷提供有意義的參考指標(biāo)，為臨床研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

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編輯/成森