標(biāo)本久置對(duì)ELISA法檢測(cè)乙型肝炎表面抗原結(jié)果的影響分析

摘要：目的 探討標(biāo)本久置對(duì)ELISA法檢測(cè)乙型肝炎表面抗原的影響。方法 篩選強(qiáng)陽(yáng)性、弱陽(yáng)性及陰性標(biāo)本若干份，用ELISA法對(duì)同一標(biāo)本進(jìn)行當(dāng)天和隔日檢測(cè)。 結(jié)果 強(qiáng)陽(yáng)性及陰性標(biāo)本放置前后，乙型肝炎表面抗原檢測(cè)結(jié)果相同，無明顯差異，而弱陽(yáng)性標(biāo)本放置后，出現(xiàn)假陰性。 結(jié)論 標(biāo)本久置會(huì)使乙型肝炎表面抗原的免疫活性減弱，從而遺漏乙型肝炎表面抗原弱陽(yáng)性者。

關(guān)鍵詞：標(biāo)本久置；ELISA；乙型肝炎表面抗原

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）是20世紀(jì)70年代發(fā)展起來的一種酶免疫測(cè)定技術(shù)。因其敏感、特異、操作簡(jiǎn)便、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，已在疾病診斷、科研等醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中得到廣泛的應(yīng)用。目前，各實(shí)驗(yàn)室多采用ELISA法檢測(cè)乙型肝炎表面抗原（HBsAg），其測(cè)定過程中受影響的因素較多[1]，主要有標(biāo)本、試劑及操作等因素，本文旨在探討標(biāo)本久置對(duì)ELISA法檢測(cè)乙型肝炎表面抗原（HBsAg）結(jié)果的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 乙型肝炎表面抗原（HBsAg）強(qiáng)陽(yáng)性血清標(biāo)本45例，乙型肝炎表面抗原（HBsAg）弱陽(yáng)性血清標(biāo)本45例，均來自當(dāng)天門診及住院患者，30例健康者血清來自大學(xué)生自愿者。將每份已分離的血清均分成兩份，一份當(dāng)日測(cè)定，一份置于冰箱4℃保存，第2d取出平衡至室溫待測(cè)。

1.2 試劑及儀器 ELISA法測(cè)定HBsAg試劑盒購(gòu)自珠海麗珠試劑有限公司；ELM-3000酶標(biāo)儀。

1.3 方法 參照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》ELISA雙抗體夾心法，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，用酶標(biāo)儀單波長(zhǎng)（450nm），空白孔校零后，測(cè)定各標(biāo)本OD值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件分析，運(yùn)用配對(duì)設(shè)計(jì)t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

30例乙型肝炎表面抗原（HBsAg）陰性標(biāo)本和45例乙型肝炎表面抗原（HBsAg）強(qiáng)陽(yáng)性標(biāo)本，當(dāng)天和隔日血清檢測(cè)結(jié)果（陰性或陽(yáng)性）全部一致；45例乙型肝炎表面抗原（HBsAg）弱陽(yáng)性標(biāo)本，隔日檢測(cè)出現(xiàn)2例假陰性（見表1）。

30例乙型肝炎表面抗原（HBsAg）陰性標(biāo)本和45例乙型肝炎表面抗原（HBsAg）強(qiáng)陽(yáng)性標(biāo)本，當(dāng)天和隔日血清OD值比較，差異無顯著性（P>0.05）。

45例乙型肝炎表面抗原（HBsAg）弱陽(yáng)性標(biāo)本，當(dāng)天和隔日血清OD值比較，差異有顯著性（P<0.05）。

3 討論

本組實(shí)驗(yàn)顯示30例乙型肝炎表面抗原（HBsAg）陰性標(biāo)本和45例乙型肝炎表面抗原（HBsAg）強(qiáng)陽(yáng)性標(biāo)本，當(dāng)天和隔日血清檢測(cè)結(jié)果（陰性或陽(yáng)性）全部一致，當(dāng)天和隔日血清的乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的OD值差異無顯著性；45例乙型肝炎表面抗原（HBsAg）弱陽(yáng)性標(biāo)本，隔日血清檢測(cè)出現(xiàn)假陰性率為4.4%（2/45），當(dāng)天和隔日血清的乙型肝炎表面抗原（HBsAg）OD值差異有顯著性。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明標(biāo)本在冰箱中放置時(shí)間過長(zhǎng)（如1d以上），有可能造成抗原免疫活性減弱，致使OD值明顯降低，從而導(dǎo)致乙型肝炎表面抗原（HBsAg）假陰性出現(xiàn)。

乙型肝炎表面抗原（HBsAg）是診斷和治療乙型病毒性肝炎的一個(gè)重要的指標(biāo)，在臨床實(shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)影響ELISA試驗(yàn)的因素很多[2]，由于標(biāo)本放置過久而造成乙型肝炎表面抗原（HBsAg）假陰性，若不能及時(shí)對(duì)該病做出早期診斷，從而延誤了治療時(shí)間，就會(huì)給患者帶來不必要的痛苦。故在ELISA檢測(cè)時(shí)，應(yīng)克服標(biāo)本久置等干擾因素，標(biāo)本要做到及時(shí)檢測(cè)，盡可能當(dāng)天檢測(cè)，并且每一步操作都要嚴(yán)格按照說明書，嚴(yán)格控制影響因素，保證測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，為臨床出具一份有價(jià)值的檢驗(yàn)報(bào)告單。

參考文獻(xiàn)：

[1]王葉芳，密輝，王霞.ELISA法檢測(cè)乙型肝炎表面抗原影響因素的探討[J].淮海醫(yī)藥，2000，18（4）：290.

[2]李俊峰.造成HBsAg假陽(yáng)性結(jié)果分析[J].山西預(yù)防醫(yī)學(xué)，2002，11（11）：318.

[3]王葉芳，密輝，王霞.ELISA法檢測(cè)乙型肝炎表面抗原影響因素的探討[J].淮海醫(yī)藥，2000，18（4）：290.

編輯/成森