增液潤燥湯對干燥綜合征模型鼠IL—23表達(dá)的影響

摘要：目的 研究增液潤燥湯對SS模型鼠頜下腺IL-23的影響，探究本方治療SS的機制。方法 60只BALb/c小鼠，隨機法均分為：正常組，模型組，本方低、中、高組，西藥組；免疫誘導(dǎo)法制備SS模型；ELISA法檢測IL-23水平。結(jié)果 模型組IL-23比正常組顯著升高；各治療組IL-23比模型組降低，差別均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 本方能降低SS模型鼠頜下腺IL-23水平，通過降低IL-23水平，抑制病灶炎癥反應(yīng)，減輕唾液分泌腺損傷。

關(guān)鍵詞：SS；增液潤燥湯；頜下腺； IL-23

干燥綜合征（Sjogren's syndrome， SS）是一種主要侵犯唾液腺等外分泌腺的自身免疫性疾病，嚴(yán)重影響著人民的生活質(zhì)量和身心健康。文獻(xiàn)研究表明，IL-23在SS發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用，故選用IL-23作為檢測指標(biāo)初步探究增液潤燥湯治療SS的作用機制。

1 材料及設(shè)備

1.1 實驗動物 SPF級BALb/c雌性小鼠60只，體重18～20g，購自河南省實驗動物中心，許可證號：SCXK（豫）2010-0002。

1.2 藥品 增液潤燥湯：北沙參15g、天冬15g、炙紫菀10g、知母10g、烏梅10g、桔梗15g、桃仁10g、制附子6g、炙甘草6g，購于河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院門診顆粒藥房（四川新綠色藥業(yè)有限公司）；白芍總苷膠囊，寧波立華制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字H200550058；百白破疫苗，武漢生物制品研究所有限責(zé)任公司，國藥準(zhǔn)字S19980016。

1.3 主要儀器 5722分光光度計：北京普析新通用儀器有限責(zé)任公司，型號：TU-1901；冷凍離心機：美國Kendro實驗室產(chǎn)品公司。

2 方法及步驟

2.1 制備抗原溶液 取同種鼠頜下腺， 剔除淋巴結(jié)，切碎，加入RIPA裂解液 、PMSF，充分勻漿，10000～14000g轉(zhuǎn)速、4℃條件下勻速離心5min，取上清液，以考馬斯亮藍(lán)比色法測定抗原含量。用滅菌PBS將上清液稀釋成800μg/ml，加等量CFA，得到400μg/ml的抗原溶液。

2.2 造模及檢測指標(biāo) 第0、14d，除正常組外的小鼠每側(cè)腹股溝消毒后皮下注射0.05ml抗原。在第2、7d，以上各組小鼠各腹腔注射0.05ml白百破聯(lián)合疫苗，加強免疫。以頜下腺病理炎性浸潤為檢測指標(biāo)。

2.3 步驟 60只BALb/c小鼠，隨機法平均分組如下：

2.4 IL-23測定 無菌操作臺上取兩側(cè)頜下腺，稱重并記錄，冰浴中電動勻漿約1min，4℃、3000rpm下離心20min，取上清液，按照ELISA試劑盒說明書進(jìn)行檢測，以標(biāo)準(zhǔn)物濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)得標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算實際樣品濃度。

2.5 統(tǒng)計學(xué)分析 以SPSS19.0進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料均采用（x±s）表示，所得數(shù)據(jù)均符合正態(tài)分布及方差齊性檢驗，組間多重比較采用單因素方差分析和LSD檢驗，以P≤0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié)果

與正常組比較，模型組IL-23顯著升高，差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；各治療組IL-23比模型組降低，差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；與白芍組比較，本方中、高劑量組IL-23水平較低，差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。

4 結(jié)論及討論

文獻(xiàn)研究表明，IL-23能夠誘導(dǎo)Th1細(xì)胞分化和IFN-γ的產(chǎn)生，是促進(jìn)Th17細(xì)胞增殖分化的重要細(xì)胞因子[1]。而Th1、Th17細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子IL-17、IFN-γ在SS發(fā)生發(fā)展及唾液腺損傷過程中起重要作用。

目前認(rèn)為隨著SS患者唾液腺浸潤情況加重，Th1樣細(xì)胞因子逐漸占據(jù)主導(dǎo)地位。而IL-17作為Th17的主要炎性因子，參與唾液腺局部炎癥反應(yīng)，并與其它相關(guān)炎性因子如IL-6協(xié)同作用，形成炎癥反應(yīng)正反饋，加重腺體損傷。如朱建東、王笑顏[2，3]等對比發(fā)現(xiàn)伴腮腺腫痛的SS患者IL-17水平明顯高于無腮腺腫痛者（P<0.05），且IL-17水平與IgG、ESR呈明顯的正相關(guān)（r=0.651， P<0.05； r=0.714，P<0.05）；Nguyen CQ等[4]通過動物實驗發(fā)現(xiàn)IL-17隨SS病程進(jìn)展進(jìn)一步增高。IFN-γ是與SS相關(guān)研究最為廣泛的細(xì)胞因子之一，多數(shù)研究表明，SS的發(fā)生發(fā)展與IFN-γ高表達(dá)相關(guān)。曹建平、Kulkarni等研究表明IFN-γ可進(jìn)一步加劇SS的病理過程[5]。

本實驗結(jié)果顯示增液潤燥湯能降低IL-23的表達(dá)，中、高劑量組較低劑量組明顯。通過降低IL-23的表達(dá)，影響Th1、Th17細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子IL-17、IFN-γ等的表達(dá)，抑制唾液腺炎癥反應(yīng)，可能是增液潤燥湯治療SS的機制之一。

干燥綜合征屬中醫(yī)\"燥證\"范疇，周全教授認(rèn)為，其主要發(fā)病機制為津液的生成不足和輸布失常，當(dāng)責(zé)之于脾胃、肺及經(jīng)絡(luò)。津液來源于水谷，故津液的生成離不開胃；水液入胃，必經(jīng)脾的運化才化為津液，通過脾的升清才輸于肺；肺氣宣發(fā)，才能使津液輸布于肌表；肺氣肅降，才能使津液輸布于內(nèi)臟；經(jīng)絡(luò)是津液輸布全身的通道，同時津液又是血液的重要組成部分，津枯則血燥，致使血脈瘀阻，津液輸布異常。故周全教授創(chuàng)制增液潤燥湯時選用北沙參、桔梗等養(yǎng)陰潤肺、開肺布津，烏梅、知母等清熱生津，桃仁等祛瘀通絡(luò)，白術(shù)等健脾化濕、益氣升津。長期臨床實踐證明本方能有效改善SS患者外分泌腺損傷而致的臨床干燥癥狀，為進(jìn)一步明確本方治療SS的機制，可在本研究基礎(chǔ)上進(jìn)行相關(guān)細(xì)胞因子的研究。

參考文獻(xiàn)：

[1]吳琛.原發(fā)性干燥綜合征Th17細(xì)胞研究[D].北京：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院，2011.

[2]朱建東，王忠全，張品南.干燥綜合征患者IL-17與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞免疫失衡的觀察[J].放射免疫學(xué)雜志，2012，25（3）：301-303.

[3]王笑顏，鄒偉華，吳泉，等.原發(fā)性干燥綜合征患者IL-17測定及臨床意義[J].中華全科醫(yī)學(xué)，2014，12（4）：620-621.

[4]李成蔭，汪悅，孫麗霞，等.IFN-γ與干燥綜合征發(fā)病機制相關(guān)性研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代免疫學(xué)，2012，32（5）：438-440.

編輯/成森