穿心蓮內(nèi)酯對(duì)血管性癡呆大鼠行為學(xué)及海馬區(qū)TrKA及Bcl—2表達(dá)的影響

摘要：目的 研究穿心蓮內(nèi)酯對(duì)血管性癡呆大鼠的行為學(xué)改變及海馬區(qū)TrKA及Bcl-2表達(dá)的影響。方法 選取72只鼠齡為4個(gè)月的健康Wistar大鼠，實(shí)驗(yàn)組大鼠采用雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎方法建立血管性癡呆大鼠模型，并隨機(jī)選擇部分模型大鼠運(yùn)用穿心蓮內(nèi)酯進(jìn)行治療，以Morris水迷宮檢測(cè)各組大鼠行為學(xué)的變化及運(yùn)用免疫組化反復(fù)檢測(cè)大鼠額葉TrKA及Bcl-2的表達(dá)情況。結(jié)果 手術(shù)組與治療組大鼠的認(rèn)知能力明顯低于對(duì)照組（P<0.01），治療組大鼠的認(rèn)知能力較手術(shù)組有顯著提高（P<0.01）。大鼠額葉TrKA及Bcl-2陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目均明顯高于對(duì)照組（P<0.01），且治療組大鼠的TrKA及Bcl-2陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目較手術(shù)組高（P<0.01）。結(jié)論 缺血所致血管性癡呆大鼠的行為認(rèn)知能力明顯下降，穿心蓮內(nèi)酯可以通過(guò)調(diào)節(jié)TrKA及Bcl-2的表達(dá)抑制神經(jīng)元細(xì)胞凋亡，從而對(duì)血管性癡呆大鼠行為能力具有改善作用。

關(guān)鍵詞：穿心蓮內(nèi)酯；血管性癡呆；大鼠；TrKA；Bcl-2

血管性癡呆是因各種原因所指的腦血管疾病的基礎(chǔ)上出現(xiàn)獲得性認(rèn)知功能障礙的一種綜合征[1]。TrKA及Bcl-2的表達(dá)情況可以預(yù)測(cè)損傷程度，對(duì)治療療效的評(píng)價(jià)也有價(jià)值。穿心蓮內(nèi)酯可以拮抗腦缺血所致的血管性癡呆損傷效應(yīng)，從而具有保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞的作用[2]。本研究以血管性癡呆大鼠模型為材料，探討穿心蓮內(nèi)酯對(duì)血管性癡呆大鼠的行為學(xué)改變及海馬區(qū)TrKA及Bcl-2表達(dá)的影響。

1資料與方法

1.1一般資料 選取90只鼠齡為4個(gè)月的健康Wistar大鼠，雌雄一半，體重300g左右。所選取的大鼠首先經(jīng)過(guò)Morris水迷宮測(cè)試已排除具有行為異常的大鼠。將72只大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、手術(shù)組和治療組各24只，每組大鼠的平均體重、雌性只數(shù)等一般情況差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

1.2方法 所有大鼠10%水合氯醛腹腔麻醉后行頸部正中切口，分離頸部雙側(cè)頸總動(dòng)脈，于動(dòng)脈近端和遠(yuǎn)端進(jìn)行結(jié)扎并離斷結(jié)扎中段，以保證完全阻斷頸總動(dòng)脈血流。對(duì)照組大鼠同樣麻醉下頸部正中切口，分離進(jìn)步雙側(cè)頸總動(dòng)脈，但不進(jìn)行結(jié)扎和離斷。治療組大鼠給予穿心蓮內(nèi)酯，劑量200mg/Kg溶于2ml生理鹽水中，行灌胃給藥，1次/d。對(duì)照組和手術(shù)組大鼠1次/d 2ml生理鹽水灌胃。

血管性癡呆模型建立成功并各實(shí)驗(yàn)組準(zhǔn)備好后，3組大鼠分別于6h、1d、2d及7d行Morris水迷宮逃避潛伏期行為學(xué)測(cè)試。于上述各時(shí)間點(diǎn)每組大鼠隨機(jī)選取6只進(jìn)行免疫組化實(shí)驗(yàn)：大鼠常規(guī)麻醉后暴露心臟，左心室插管并打開(kāi)右心房灌注生理鹽水，肝臟發(fā)白后灌注4%多聚甲醛，先快后慢。大鼠僵硬后取大鼠腦并浸置于4%多聚甲醛5h，取大鼠額葉腦組織并做4um切片，然后進(jìn)行免疫組化染色。顯微鏡下觀察TrKA和Bcl-2蛋白陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目。以每個(gè)視野為單位計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目并多個(gè)視野求平均值為最終計(jì)數(shù)個(gè)數(shù)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 將觀察記錄的數(shù)據(jù)錄入統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件SPSS19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)的處理與分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)，以P>0.05為差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.01為差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

通過(guò)水迷宮逃避潛伏期測(cè)試以評(píng)價(jià)各組大鼠認(rèn)知能力，見(jiàn)表1。結(jié)果顯示，對(duì)照組大鼠的6h、1d、2d及7d的逃避潛伏期與手術(shù)組和治療組同期比較均較短，差異均存在顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），表明對(duì)照組大鼠的認(rèn)知能力（記憶能力）較手術(shù)組和治療組都強(qiáng)。各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)額葉Bcl-2免疫組化檢測(cè)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)比較分析見(jiàn)表2。結(jié)果顯示，手術(shù)組與治療組大鼠的腦額葉細(xì)胞中Bcl-2陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目均明顯高于對(duì)照組，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。

各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)額葉TrKA免疫組化檢測(cè)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)比較分析見(jiàn)表3。結(jié)果顯示手術(shù)組與治療組大鼠腦額葉細(xì)胞中TrKA陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目明顯高于對(duì)照組，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。

3討論

腦缺血所導(dǎo)致的腦部功能疾病的具體機(jī)制十分復(fù)發(fā)，可能與腦缺血后神經(jīng)元凋亡，能量代謝異常，興奮性氨基酸毒性，氧自由基損害等一系列因素有關(guān)[3]。結(jié)扎大鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈可使大鼠腦缺血，長(zhǎng)期供血不足情況下通過(guò)氧自由基途徑等可誘導(dǎo)海馬區(qū)神經(jīng)元的凋亡。本研究中采用該方法均全部成功建立大鼠模型。

TrkA激活后能抑制軸突變性， 促使軸突生長(zhǎng)，促進(jìn)神經(jīng)遞質(zhì)合成進(jìn)而改善腦缺血導(dǎo)致的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)損傷。本研究結(jié)果也顯示，手術(shù)組大鼠的認(rèn)知能力顯著低于對(duì)照組（P<0.01），但其TrKA及Bcl-2的表達(dá)均高于對(duì)照組（P<0.01）。穿心蓮內(nèi)酯可以激活eNOS-NO/cyclic GMP信號(hào)傳導(dǎo)途徑，從灌注量方面改善腦部血流，營(yíng)養(yǎng)腦部神經(jīng)而改善腦缺血損傷。此外，穿心蓮內(nèi)酯還可以抑制P13/Akt介導(dǎo)的氧化應(yīng)激反應(yīng)和下調(diào)IL-1β、NO等炎性介質(zhì)而阻止或減輕腦缺血損傷。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果也顯示，治療組大鼠的認(rèn)知能力較手術(shù)組有顯著改善（P<0.01），且可使TrKA及Bcl-2的表達(dá)增強(qiáng)。

參考文獻(xiàn)：

[1]APP17肽對(duì)血管性癡呆大鼠行為學(xué)及額葉Bcl-2，Bax蛋白表達(dá)的影響[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2007，11（2）：174-176.

[2]Chan SJ，Wong WS，Wong PT.Cerebral ischaemia[J].Br J Pharmacol，2010，161（3）：668-679.

[3]楊杰，周芝文，鄭麗君，等.TrKA和Bcl-2在局灶性腦缺血再灌注大鼠大腦皮質(zhì)中的表達(dá)[J].中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志，2010，27（7）：584-588.

編輯/申磊