蛹蟲草的生物學(xué)特性研究

蛹蟲草的生物學(xué)性質(zhì)為篩選優(yōu)良菌株的一個(gè)依據(jù)，實(shí)驗(yàn)從不同的溫度、PH值、碳氮源、菌絲體形態(tài)、菌絲體液體培養(yǎng)積累量業(yè)研究不同菌株的生物學(xué)特性，確定最佳生長條件，為進(jìn)行菌株的丟棄建立初步的依據(jù)。

1.材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

1.1.1供試菌株

蛹蟲草菌株，由錦州食用菌協(xié)會(huì)實(shí)驗(yàn)室提供。

葡萄糖、蛋白胨、KH2PO4、MGSO4、VB1、酵母粉、瓊脂、蔗糖、乳糖、半乳糖、可溶性淀粉、甘露醇、麥芽糖、大豆蛋白胨、酵母膏、牛肉膏、硝酸銨、硫酸銨、尿素。

1.1.2主要儀器

醫(yī)用型凈化工作臺(tái)、立式自控電勢(shì)壓力蒸汽滅菌器、電勢(shì)恒溫鼓風(fēng)干燥箱、酸度計(jì)。

1.1.3培養(yǎng)基

PDA加富培養(yǎng)基：馬鈴薯20g，葡萄糖20g、蛋白胨2g、KH2PO43g、MGSO41.5G、VB11g，加水至1000ml。

基礎(chǔ)培養(yǎng)基：葡萄糖20g、酵母粉2g、KH2PO42g、MGSO41g、瓊脂20g，加蒸餾水定容至1000ml。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1供試菌株的活化

將供試菌株用滅過菌的接種鏟取1*1cm的菌塊接種到斜面PDA培養(yǎng)基上，25℃下恒溫培養(yǎng)10天。每天菌株做10次重復(fù)。

1.2.2培養(yǎng)方式

將斜面菌種用滅過菌的接種鏟取1*1cm的菌塊接種到直徑9cm的培養(yǎng)皿中心，在25℃下恒溫培養(yǎng)10天，每個(gè)菌種做5次重復(fù)。

用直徑5mm的無菌打扎器取早蟲草菌片接種至PDA平板中央，將平板分別置于培養(yǎng)室自然光照培養(yǎng)，觀察菌落形態(tài)。每個(gè)菌種3次重復(fù)。

1.2.3溫度對(duì)早蟲草生長速度的影響

分成五個(gè)溫度梯度：17℃、20℃、23℃、26℃、29℃。用5MM無菌打扎器打扎接種到PDA培養(yǎng)基中心。每個(gè)菌種做8個(gè)重復(fù)，每個(gè)溫度2個(gè)重復(fù)。每24H用游標(biāo)卡尺測(cè)量菌落直徑，計(jì)算菌絲生長速度，并觀察菌落的變化及其生長狀況。

1.2.4 PH值對(duì)蛹蟲草生長速度的影響

分成五個(gè)PH酸度：PH5.5、PH 6.0、PH 6.5、PH 7.0、PH 7.5。用直徑5mm無菌打扎器打扎接種到不同的PH值培養(yǎng)基中心中，每個(gè)菌種做3個(gè)重復(fù)。在23℃恒溫下培養(yǎng)，每24H用游標(biāo)卡尺測(cè)量菌落直徑，計(jì)算菌絲生長速度，并觀察菌薄的變化及其生長狀況。

1.2.5碳源對(duì)蛹蟲草生長速度的影響

其它培養(yǎng)基配方不變，分別選用葡萄糖、蔗糖、乳糖、半乳糖、可溶性淀粉、甘露醇和麥芽糖作為碳源添加到固體基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，在23℃條件下恒溫培養(yǎng)。每24h用游標(biāo)卡尺測(cè)量菌落直徑，計(jì)算菌絲生長速度，并觀察菌絲長勢(shì)和菌絲體顏色及形態(tài)，篩選出適合蛹蟲草菌絲體生長的碳源。

1.2.6氮源對(duì)蛹蟲草生長速率的影響

其它培養(yǎng)基配方不變，分別選用蛋白胨、大豆蛋白胨、酵母膏、牛肉膏、硝酸銨、硫酸銨和尿素作為氮源添加 到固體基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，CK為基礎(chǔ)培養(yǎng)基不加氮源。在23℃條件下恒溫培養(yǎng)。每24H用游標(biāo)卡尺測(cè)量菌落直徑，計(jì)算菌絲生長速度，并觀察菌絲長勢(shì)和菌絲體顏色及形態(tài)，篩選出適合蛹蟲草菌絲體生長的氮源。

1.2.7液體培養(yǎng)主生物量的測(cè)定

用無菌的打扎器取相同量的菌片置于液體培養(yǎng)基，搖瓶培養(yǎng)7天后，四層紗布過濾，菌絲體60℃，烘干至恒重后，測(cè)定不同菌株的生物量。

2.結(jié)果與分析

2.1溫度對(duì)蛹蟲草生長速度的影響結(jié)果

不同菌株的菌絲體在29度都不再生長，說明蛹蟲草菌株是不耐高溫的。而在17-26度都要不同程度的生長，可以看出菌絲體的生長速度隨著溫度的升高而加快，到23度時(shí)生長最快，而到26度時(shí)有變慢，說明23度是蛹蟲草菌株的生長最適溫度。不同的菌株在相同的溫度條件下生長速度相差不大其中，1號(hào)、2-3號(hào)的生長速度較慢；6號(hào)、2號(hào)、K36的生長速度較快。

2.2 PH值對(duì)蛹蟲草生長速率的測(cè)定

在PH值5.5-7.5之間的菌絲體都有不同程度的生長。在6.0-6.5之間生長的較快，在5.5、7.5生長的較慢，表明蛹蟲草菌株的最適生長PH值在6.0-6.5之間。不同菌株在相同的PH值條件下的生長狀況略有差別，6號(hào)、2號(hào)和K36號(hào)的生長速度較快，并且觀察它們的菌絲體形態(tài)，總體來看，6號(hào)菌絲生長最快，菌落整齊，絨毛狀，橘艾勇，轉(zhuǎn)色比較好；2號(hào)菌絲生長也較快，菌落整齊，放射狀，橘黃色，轉(zhuǎn)色好，其它的菌株都比6號(hào)菌株萌發(fā)遲緩、長勢(shì)差，1號(hào)生長最為愋慢，長勢(shì)最差，氈狀，淡黃色，較色慢。

2.3碳源對(duì)蛹蟲草生長速度的測(cè)定結(jié)果

在沒的碳源條件下，菌絲體都能生長。其中葡萄糖和蔗糖作為碳源的條件下，菌絲體生長速度較快，而在半乳糖和麥芽糖作為碳源時(shí)，菌絲體生長較慢。觀察不同碳源條件下菌絲體的形態(tài)，可以看出，雖然半乳糖作為碳源時(shí)生長速度也較快，但是菌絲稀松，氣生菌絲多，不能形成強(qiáng)壯的菌絲用于生產(chǎn)，葡萄糖作為碳源，菌絲生長快，長勢(shì)茂密且轉(zhuǎn)色好。不同的菌株在相同的碳源條件下投其所好也有差別，6號(hào)、B1、K36的生長速度較快，而1號(hào)、2-3號(hào)的生長速度慢。

2.4液體培養(yǎng)及菌絲體生物量的測(cè)定結(jié)果

搖瓶培養(yǎng)7天后，發(fā)現(xiàn)2號(hào)、6號(hào)、K31菌株的液體培養(yǎng)基透明，其中的菌球大小適當(dāng)，遠(yuǎn)遠(yuǎn)一致、豐富，菌絲球表面形成大量話筒狀的菌刺；1號(hào)、2-3號(hào)、K7菌株的培養(yǎng)基透明，但是菌球量較少。不同菌株的生物量試驗(yàn)結(jié)果：6號(hào)菌株菌絲的累積量最多，達(dá)到1.39G.100ML。說明6號(hào)菌株的液體培養(yǎng)中能累積大量的菌絲體，對(duì)規(guī)模生產(chǎn)有實(shí)際的經(jīng)驗(yàn)價(jià)值。

3.結(jié)論與討論

3.1結(jié)論

試驗(yàn)表明：試驗(yàn)用的8株菌在溫度17-36度下都能生長，隨著溫度的升高而加快，到一定溫度是菌絲停止生長，且在23度下生長速度最快，菌絲形態(tài)最好，在PH值在5.5-7.5之間都有不同程度的生長，在6.0-6.5之間的生長的較快，表明蛹蟲草在中性變酸的環(huán)境中長勢(shì)良好；在不同的碳源和氮源條件下生長明顯存在差異，其中在碳源葡萄糖和蔗糖生長最好，生長速度最快，向瘥在中加入有機(jī)氮源時(shí)，菌株的生長速度明顯大于加入無機(jī)氮源時(shí)的生長速度，加入硝態(tài)氮源時(shí)其生長速度大于加入銨態(tài)氮源時(shí)生長速度，蛋白胨作為氮源時(shí)，生長速度最快，而用無機(jī)氮源硝酸銨、硫酸銨、尿素時(shí)的生長速率明顯慢，說明無機(jī)氮源不容易被吸收利用。

蛹蟲草在固體培養(yǎng)其上生長的環(huán)境條件篩選，最適合蛹蟲草菌絲生長的溫度選23-25度為宜；PH值在6.0-6.5之間能促進(jìn)菌絲的生長，最佳碳源和氮源分別是葡萄糖和蛋白胨；菌絲體的顯微結(jié)構(gòu)基本一致。

8株菌在生物學(xué)發(fā)揮性上的差別可以初步篩選出2號(hào)、6號(hào)、B1在相同的條件下在菌絲生長、菌絲形態(tài)、轉(zhuǎn)色程度和液體培養(yǎng)的生物量積累方面存在優(yōu)異性，是具有優(yōu)良生物學(xué)特性的菌株。

3.2討論

蛹蟲草優(yōu)良菌株的丟棄是今后研究人工培養(yǎng)蛹蟲草的一個(gè)重點(diǎn)，從生物學(xué)特征來研究蛹蟲草，為優(yōu)良菌株的篩選提供了一定的依據(jù)，介理并不能單單通過對(duì)生長速度、轉(zhuǎn)色情況、菌絲特征、菌絲體的積累來篩選。

不同菌株在不同的碳大海撈針和氮源培養(yǎng)基上都有不同程度的生長，說明蛹蟲草對(duì)營養(yǎng)元素的要求不高，在人工培育的過程中，為了得到較高的產(chǎn)量，可以選用利用最佳的碳源和氮源來栽培。

從不同溫度和不同PH值的菌絲體的生長速度，可以選出菌絲體生長強(qiáng)壯的菌株，從液體培養(yǎng)的菌絲體積累量，可以得到生長旺盛的菌株，為以后菌株的人工選育提供依據(jù)。