豬口腔液在疫病監(jiān)測(cè)上的應(yīng)用進(jìn)展

摘 要：口腔液具有廣泛的生物學(xué)功能，可替代血清樣品用于抗原或抗體的檢測(cè)，為豬群傳染病監(jiān)測(cè)提供了有效的技術(shù)手段，目前已經(jīng)成功應(yīng)用至豬藍(lán)耳病、豬圓環(huán)病毒病、豬流感等疫病的監(jiān)測(cè)。本文對(duì)豬口腔液在部分豬傳染病上的應(yīng)用進(jìn)展、豬口腔液采集方法及其注意事項(xiàng)等進(jìn)行了綜述，以期對(duì)豬口腔液的推廣應(yīng)用提供技術(shù)幫助。

關(guān)鍵詞：豬；口腔液；疫病監(jiān)測(cè)；應(yīng)用進(jìn)展

中圖分類號(hào)：S852.5+3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1001-0769（2015）06-0037-02

所謂口腔液，即是指豬口腔中的唾液和血清滲出液的混合液體，血清滲出液是通過(guò)口腔黏膜和口腔黏膜上的齒齦溝和毛細(xì)血管進(jìn)入口腔。業(yè)已證實(shí)，口腔液具有廣泛的生物學(xué)功能，口腔液樣品既可用作抗體檢測(cè)，又可用于PCR檢測(cè)抗原，可替代血清樣品，為豬群傳染病監(jiān)測(cè)提供有效的技術(shù)手段，口蹄疫病毒、非洲豬瘟病毒、經(jīng)典豬瘟病毒、流感病毒、藍(lán)耳病病毒、圓環(huán)病毒2型、細(xì)環(huán)病毒1型和2型、丹毒絲菌屬、胞內(nèi)勞森氏菌、胸膜肺炎放線桿菌、大腸桿菌、豬鼻支原體、豬滑液支原體、豬肺炎支原體以及還有其他的一些病原體都可以采用口腔液進(jìn)行檢測(cè)。雖然口腔液樣品主要采自于斷奶豬和生長(zhǎng)育肥豬，但也適用于后備種豬、生產(chǎn)母豬和生產(chǎn)公豬?？谇灰翰杉椒ê?jiǎn)便，易學(xué)易用，速度快，應(yīng)急小，費(fèi)用低，不需要專門器材和特殊的技巧訓(xùn)練，并可減少應(yīng)激，改善動(dòng)物福利，有助于豬群生長(zhǎng)性能的提高，確是評(píng)估豬群實(shí)時(shí)健康動(dòng)態(tài)的良好工具。

1 豬口腔液在部分豬傳染病上的應(yīng)用

1.1 豬流感

Detmer SE等[1]采集人工感染A型豬流感H1N1亞型毒株后3 d、4 d、5 d和6 d的試驗(yàn)豬唾液樣品，并采集感染后3 d和7 d的豬鼻拭樣品。經(jīng)熒光PCR檢測(cè)和病毒分離，所有樣品病毒分離均為陰性，但口腔液樣品的PCR陽(yáng)性檢出率達(dá)94 %（15+/16），豬鼻拭樣品的陽(yáng)性檢出率則為67 %（32+/48）。于2009年8月和2010年1月又進(jìn)行了擴(kuò)大應(yīng)用試驗(yàn)，經(jīng)熒光PCR檢測(cè)，結(jié)果從910份豬口腔液樣品中檢出382份陽(yáng)性，陽(yáng)性率為42 %。由此可見(jiàn)，口腔液能為熒光PCR之類的快速檢測(cè)方法提供簡(jiǎn)易、有效和安全的樣品采集方法。

1.2 藍(lán)耳病

Prickett J等[2]分別對(duì)4、8和12周齡的受試豬接種美洲型PRRSV，于接種后63 d同步采集血樣和口腔液，采用熒光PCR檢測(cè)PRRSV抗原。結(jié)果發(fā)現(xiàn)血樣于接種后5周檢出病毒，而口腔液則于接種后4周檢出病毒，且豬接種日齡不影響口腔液中PRRSV滴度或持續(xù)時(shí)間，表明口腔液樣品具有不亞于血樣的檢測(cè)靈敏度。業(yè)已證實(shí)采集和檢測(cè)斷奶前仔豬口腔液樣品中的PRRSV，可監(jiān)控生產(chǎn)母豬群體中PRRSV感染動(dòng)態(tài)，如陽(yáng)性則表明持續(xù)感染的母豬將病毒傳播給了斷奶前仔豬。Kittawornrat A等[3]于2014年同步采集斷奶前1 d仔豬的口腔液和血樣，以熒光PCR檢測(cè)PRRSV。結(jié)果600份血樣中未檢出PRRSV陽(yáng)性，而600份口腔液樣品中檢出9頭陽(yáng)性，陽(yáng)性率為1.5 %。經(jīng)PRRSV ORF5基因測(cè)序，表明其中2頭陽(yáng)性樣品的基因序列與豬場(chǎng)野毒株高度同源。在第23屆世界豬病大會(huì)上，美國(guó)學(xué)者報(bào)道可采集屠宰場(chǎng)上市育肥豬口腔液以評(píng)估PRRSV感染動(dòng)態(tài)，使用ELISA方法檢測(cè)抗體，92份樣品中18份為抗體陽(yáng)性，平均s/p值=3.63，74份為抗體陰性，平均s/p值=0.195。而對(duì)于PCR測(cè)毒，感染豬口腔液中病毒的檢測(cè)持續(xù)期可達(dá)3～8周。

1.3 圓環(huán)病毒病

Prickett JR等[4]設(shè)計(jì)了3個(gè)人工感染PCV2a、2b毒株試驗(yàn)組，另設(shè)對(duì)照組，每組6頭豬。從接種后2 d～14 d每2 d采集一次豬口腔液，從接種后15 d～98 d每周采集一次豬口腔液。以定量PCR方法檢測(cè)PCV2抗原，以ELISA方法檢測(cè)PCV2抗體。結(jié)果豬人工感染后14 d～98 d可檢出針對(duì)PCV2的IgG、IgA抗體，而從人工感染后2 d可檢出PCV2抗原，直至接種后98 d仍維持陽(yáng)性。實(shí)驗(yàn)表明，豬口腔液可作為監(jiān)測(cè)PCV2抗原和抗體實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)的有效樣品。

1.4 豬丹毒

Giménez-Lirola LG等[5]對(duì)7個(gè)圈舍的112頭豬人工感染豬丹毒絲菌，32頭豬作為陰性對(duì)照。經(jīng)熒光PCR檢測(cè)豬口腔液樣品，接種后1 d受試豬陽(yáng)性檢出率達(dá)100 %（7+/7），細(xì)菌分離成功率為28.6 %（2+/7），從而證明口腔液檢測(cè)可為豬丹毒疫情的及時(shí)預(yù)警提供幫助。

1.5 豬流行性腹瀉

在第23屆世界豬病大會(huì)上，墨西哥學(xué)者對(duì)感染PEDV豬只的口腔液樣品進(jìn)行PCR檢測(cè)，取得了和腸道組織一致的效果。因此，可用口腔液作為檢測(cè)PEDV在豬群中存在或循環(huán)的標(biāo)志性樣品。

2 豬口腔液采集方法

將100 %純棉繩懸掛于豬欄的干凈區(qū)域，直徑1.3 cm的繩子用于保育豬口腔液采集，直徑1.6 cm的繩子則用于生長(zhǎng)育肥豬和生產(chǎn)公母豬。繩子上端打結(jié)，并做好固定。懸掛處應(yīng)遠(yuǎn)離飼槽和豬排便區(qū)，懸掛高度應(yīng)高于豬身但保證豬能接近和啃咬，任豬咀嚼，30 min后收取棉繩，刮取和擠壓上面的口腔液至塑料板或玻璃皿中，再將口腔液吸取至試管中備用，理論上至少能收集到4 mL的采樣量，但一般認(rèn)為≥1 mL為有效采集量。如果口腔液樣品比較干凈，則無(wú)需再作處理；如果樣品混有其它顆粒物，則低速離心10 min即可。

3 口腔液檢測(cè)的注意事項(xiàng)

（1） 口腔液檢測(cè)并非疫病診斷或檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)中的程序，僅用于豬群中循環(huán)抗體或抗原的檢測(cè)和評(píng)估。

（2） 口腔液樣品不要混樣。

（3） 棉繩吸收性最好，合成纖維繩則效果稍差。

（4） 有的豬群第一次可能不太情愿啃咬繩子，可先將繩子供其玩弄，或在繩子上噴灑糖溶液，一旦習(xí)慣養(yǎng)成，而后再采集就方便了。

（5） 豬上午活動(dòng)敏捷，因此宜于在該時(shí)間段采樣，午后則可能花費(fèi)時(shí)間較長(zhǎng)。

（6） 繩子的懸掛高度應(yīng)與豬肩胛部平。

（7） 豬有喜新厭舊的心理，已經(jīng)使用的繩子不宜再用。

4 結(jié)語(yǔ)

人醫(yī)早在1909年就有從人口腔液中檢出疫病抗體的文獻(xiàn)報(bào)道，目前已經(jīng)廣泛使用口腔液作為麻疹、腮腺炎、肝炎等疾病初步診斷分析的樣品。雖然獸醫(yī)學(xué)上使用口腔液作為疫病監(jiān)測(cè)的時(shí)間不算長(zhǎng)，但已經(jīng)邁出了可喜的步伐，目前在許多動(dòng)物疫病的診斷和監(jiān)測(cè)上已經(jīng)得到了研究和應(yīng)用，也勢(shì)必將日益獲得重視和推廣，從而為豬群健康評(píng)估提供良好的采樣工具。

參考文獻(xiàn)：（5篇，略）