三種豬瘟抗體檢測方法比較試驗研究

摘 要：為了選擇一種方便、準(zhǔn)確、經(jīng)濟的豬瘟檢測方法，本文通過對豬瘟正向間接血凝法、Dot-ELISA法和免疫金標(biāo)試紙檢測法進行比較試驗，其結(jié)果依次是：陽性率為90 %、86.7 %和80 %，三者試驗結(jié)果基本相同，經(jīng)方差分析，差異不顯著（P>0.05），檢 測 實驗結(jié)果可靠。豬瘟抗體金標(biāo)試紙檢測法具有結(jié)果直觀、操作方便、反映時間短等優(yōu)勢，非常適合我市小型養(yǎng)豬場和散養(yǎng)戶，可以及時檢測豬瘟免疫狀況，制定適合本場（戶）的個性化免疫程序，預(yù)防豬瘟的發(fā)生。

關(guān)鍵詞：豬瘟；抗體；檢測方法

武威市是一個農(nóng)業(yè)城市，近幾年畜牧業(yè)發(fā)展比較迅速，截至到2013年，全市生豬飼養(yǎng)量達230.21萬頭、出欄量達121.19萬頭，但由于傳統(tǒng)養(yǎng)殖方式的影響，我市主要以小型養(yǎng)殖場和散養(yǎng)戶為主。豬瘟的控制主要依靠疫苗免疫預(yù)防，合理的免疫程序應(yīng)建立在正確的免疫檢測基礎(chǔ)上。豬瘟疫苗免疫效果的好壞直接影響到我市養(yǎng)豬業(yè)的經(jīng)濟效益和養(yǎng)豬業(yè)的健康持續(xù)發(fā)展。為了養(yǎng)殖場（戶）隨時掌握豬瘟抗體水平，制定適合本場（戶）的個性化免疫程序，使抗體效價始終保持在有效水平以上，筆者進行了三種豬瘟抗體檢測方法對比試驗，選擇一種經(jīng)濟實用、準(zhǔn)確方便的檢測方法。

1 材料與方法

1.1 試劑

⑴ 豬瘟正向間接血凝抗原試劑盒，包括（豬瘟正向血凝抗原（批號100929）和標(biāo)準(zhǔn)陽、陰性血清，由中國農(nóng)科院蘭州獸醫(yī)研究所提供。

⑵ 豬瘟Dot-ELISA診斷試劑盒，中國農(nóng)科院哈爾濱獸醫(yī)研究所提供。

⑶ 豬瘟抗體免疫會標(biāo)試紙條。廈門市格林沃動物生物技術(shù)開發(fā)有限公司提供（試劑批號：20080618）。

1.2 血清樣品

在武威市某屠宰場隨機選擇10頭育肥豬，耳靜脈采集血清（編號A0-A9）1.5 mL～2 mL/頭；在武威市隨機選擇10頭產(chǎn)前2周母豬，耳靜脈采集血清（編號B0-B9）1.5 mL～2 mL/頭；隨機選擇10頭40日齡左右的仔豬，前腔靜脈采集血清（編號C0-C9）1.5 mL～2 mL/頭。

1.3 方法

1.3.1 正向間接血凝試驗

豬瘟診斷技術(shù)規(guī)程（NY/SY156—2000）規(guī)定進行操作。

1.3.2 Dot-ELISA法和免疫金標(biāo)試紙檢測法

按照試驗說明操作。

1.4 試驗結(jié)果的統(tǒng)計分析

1.4.1 試驗數(shù)據(jù)表達方法

為了數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析方便，規(guī)定文中提到的豬瘟間接血凝滴度用以2為底的對數(shù)log2表示，如豬瘟抗體滴度為l∶64，用log2表示，簡寫為6；Dot-ELISA滴度以1∶80為基數(shù)，設(shè)定為4，即1∶160表示為6；金標(biāo)試紙條陽性用“+”表示。

1.4.2 陽性判定標(biāo)準(zhǔn)

間接血凝滴度≥4、Dot-ELISA滴度≥4、金標(biāo)試紙條出現(xiàn)紅色檢測線，均表示結(jié)果為陽性。

2 結(jié)果

2.1 三種豬瘟抗體檢測方法比較試驗結(jié)果見表1

3 結(jié)果分析

（1）結(jié)果表明，間接血凝法、Dot-ELISA法和金標(biāo)試紙條法的結(jié)果基本相同，其陽性率依次為90 %、86.7 %和80 %。金標(biāo)試紙條法與間接血凝法相比，陽性率比較低，可能是因為金標(biāo)試紙條是新開發(fā)的一種全新豬瘟抗體檢測方法，檢測時所用試劑（試劑批號：20080618）投入市場不久，在質(zhì)量穩(wěn)定性方面可能還存在一些問題。但間接血凝法與Dot-ELISA法相比，結(jié)果不一致的占3.3 %；與金標(biāo)試紙條法相比，結(jié)果不一致占10 %。Dot-ELISA法與金標(biāo)試紙條法相比，結(jié)果不一致的占6.7 %。經(jīng)方差分析，三者之間差異均不顯著。

（2）從操作方面，免疫金標(biāo)試紙條操作最為簡便，不需要儀器設(shè)備，樣品也不必進行預(yù)處理，可直接檢測豬全血或血清，減少了試驗過程中的人為誤差，反應(yīng)時間短，可隨時隨地進行檢測。間接血凝實驗及Dot-ELISA實驗均需專門的試劑及具有一定經(jīng)驗的專業(yè)實驗操作人員，所需時間均在3 h～4 h以上。間接血凝實驗結(jié)果可以到第2天再來觀察（室溫下或37 ℃靜置1.5 h～2 h，這個時間可以延長），實際操作時間可以較為靈活。Dot-ELISA實驗操作最為繁瑣.主要是快診膜不易做記號，易碎，不易剪，而且手不能碰及，否則會影響實驗結(jié)果。

（3）從經(jīng)濟方面，Dot-ELISA試劑盒由于試劑一開瓶就必須全部用完，一盒可檢測50頭份左右，若只檢測10頭份也得全部用完試劑，造成很大浪費。間接血凝實驗可以根據(jù)檢測數(shù)量的多少來使用檢測試劑，較為節(jié)約。金標(biāo)試紙條因為是一份血清用一張試紙條，所以不存在浪費問題。

4 結(jié)論

綜上所述，豬瘟抗體金標(biāo)試紙檢測法具有結(jié)果直觀、操作方便、反映時間短等優(yōu)勢，非常適合我市的小型養(yǎng)豬場和散養(yǎng)戶?？梢噪S時掌握近期豬場抗體水平，制定適合本場的免疫程序，以防豬瘟疫情發(fā)生，為我市畜牧業(yè)健康發(fā)展起到了重要的保障作用。□□

參考文獻：（3篇，略）