豬肉中氟哌啶醇?xì)埩魴z測(cè)UPLC—MS/MS法探討

摘 要：本文在參考國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，對(duì)超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定豬肉中的氟哌啶醇?xì)埩暨M(jìn)行了探討。在堿性條件下，經(jīng)過1 h的80 ℃水浴，用無水乙醚兩次提取，吹干提取液后，用1.00 mL 流動(dòng)相（5 mmoL/L乙酸銨+乙腈）復(fù)溶，過膜后上UPLC-MS/MS測(cè)定，建立了豬肉中氟哌啶醇?xì)埩舻某咝б合嗌V串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法。具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r=0.999 65；經(jīng)測(cè)定方法檢出限確定為0.053 μg/kg，可滿足實(shí)際檢測(cè)需要；加標(biāo)回收試驗(yàn)的變異系數(shù)及回收率范圍等結(jié)果滿足GB/T 27404-2008《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測(cè)》的要求。本試驗(yàn)方法前處理過程簡(jiǎn)便、快捷、易操作，UPLC-MS-MS及流動(dòng)相梯度等一系列的條件設(shè)置合理，經(jīng)UPLC-MS-MS打碎后的定性定量離子辨識(shí)度高，有較高的響應(yīng)，測(cè)得檢出限可滿足檢測(cè)需求，驗(yàn)證結(jié)果具有較好的精密度和準(zhǔn)確度，可用于豬肉中氟哌啶醇?xì)埩魴z測(cè)。

關(guān)鍵詞：豬肉，氟哌啶醇；檢測(cè)方法

中圖分類號(hào)：S859.79+6 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1001-0769（2015）08-0040-03

氟哌啶醇，丁酰苯類抗精神病藥的主要代表，作用與氯丙嗪相似，有較強(qiáng)的多巴胺受體拮抗作用?；瘜W(xué)名稱，1-（ 4-氟苯基）-4-〔4-（ 4-氯苯基）-4-羥基-1-哌啶基〕-1-丁酮；分子式，C21H23ClFN02；分子量，375。特點(diǎn)為：抗焦慮癥、抗精神病作用強(qiáng)而久，對(duì)精神分裂癥與其他精神病的躁狂癥狀都有效。鎮(zhèn)吐作用亦較強(qiáng)，但鎮(zhèn)靜作用弱[1]。主要用于：各種急、慢性精神分裂癥，特別適合于急性青春型和伴有敵對(duì)情緒及攻擊行動(dòng)的偏執(zhí)型精神分裂癥[2]，亦可用于對(duì)吩噻嗪類治療無效的其他類型或慢性精神分裂癥[3]。有時(shí)被違法添加到動(dòng)物養(yǎng)殖過程中[4]，由于其鎮(zhèn)靜、催眠作用，會(huì)降低動(dòng)物對(duì)外界刺激的反應(yīng)[5]，過度鎮(zhèn)靜作用會(huì)使動(dòng)物反應(yīng)遲鈍、面部表情呆板等諸多不良反應(yīng)，嚴(yán)重者會(huì)威脅到動(dòng)物或人的生命安全[6]。2011年4月22日，衛(wèi)生部發(fā)布了被濫用食品添加劑及非法添加物名單，其中就包括了豬肉中違法添加鎮(zhèn)靜劑類藥物。因此，動(dòng)物源性組織中氟哌啶醇?xì)埩舻臋z測(cè)則非常重要，而關(guān)于氟哌啶醇檢測(cè)方法的研究卻鮮有報(bào)道。本試驗(yàn)是在堿性條件下，用無水乙醚提取豬肉中的氟哌啶醇?xì)埩粑颷7]，吹干后用流動(dòng)相復(fù)溶，上機(jī)測(cè)定。

1 主要儀器設(shè)備與試劑

所用儀器為：液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀Waters AcQuity UPLC/XoVo TQMS，百位電子天平，離心機(jī)，氮吹儀，水浴搖床。主要試劑：氟哌啶醇標(biāo)準(zhǔn)品（Sigma公司），甲醇（色譜純），乙腈（色譜純），無水乙醚，氫氧化鈉，乙酸，乙酸銨緩沖溶液，濾膜（津騰：0.22 μm，有機(jī)相），二次蒸餾水等。

2 試驗(yàn)方法

稱取樣品2.00 g樣品于50 mL離心管中，加入200 μL 乙腈，渦旋混合60 s，混合后加入400 μL 5 moL/L的氫氧化鈉溶液，再渦旋混合60 s。80 ℃水浴中放置1 h。在此期間，每個(gè)樣品均進(jìn)行兩次渦流混合。1 h后，將樣品從水浴中取出并冷卻至室溫。加入5 mL無水乙醚，渦旋混合30 s，充分振蕩15 min，取出，7 000 r/min離心5 min。移取上層上清液。重復(fù)提取一次，合并上清液。45 ℃水浴氮吹儀氮?dú)獯蹈伞Ｓ?.00 mL 流動(dòng)相（5 mmoL/L乙酸銨+乙腈）溶解定容，充分渦旋混合，過0.22 μm有機(jī)相濾膜，上機(jī)測(cè)定。

3 上機(jī)測(cè)定

液相色譜及質(zhì)譜條件：

色譜柱：ACQUITYUPLC BEH C18（1.7 μm， 3.0 mm X 100 mm）或相當(dāng)者；

柱溫：40 ℃；

流動(dòng)相：5 mmoL/L乙酸銨+乙腈（55+45）；流動(dòng)相梯度條件見表1。

流速：0.300 mL/min；

進(jìn)樣量：5.0 μL；

離子源：電噴霧離子源；

掃描方式：負(fù)離子掃描；

檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）；

電噴霧電壓：-1 750 V；

輔助氣溫度：500 ℃；

定性離子對(duì)、定量離子對(duì)、采集時(shí)間、去簇電壓及碰撞能量見表2。

4結(jié)果與分析

4.1 線性試驗(yàn)

按方法條件設(shè)置儀器參數(shù)，配制一系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液（0.10 ng/mL、0.50 ng/mL、1.00 ng/mL、 2.00 ng/mL、4.00 ng/mL、8.00 ng/mL），待儀器基線穩(wěn)定后，對(duì)系列標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液進(jìn)行測(cè)定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其相關(guān)系數(shù)r=0.999 65（圖1）。

4.2 方法檢出限確定

取空白豬肉樣品，添加濃度為0.50 μg/kg，按照上述方法全過程進(jìn)行預(yù)處理和測(cè)定，平行樣品n=7，根據(jù)各樣品檢測(cè)值（0.410 μg/kg、0.414 μg/kg、 0.421 μg/kg、，0.427 μg/kg、0.434 μg/kg、 0.456 μg/kg，0.427 μg/kg），計(jì)算出平均值X（0.427 μg/kg）及標(biāo)準(zhǔn)偏差Sb（0.015 2），當(dāng)被分析物的回收率在70 %～120 %之間時(shí)，可計(jì)算檢出限為0.053 μg/kg。計(jì)算公式如下：

檢出限（MDL）=（k×Sb×C）/X ，其中k為置信因子，一般取3。

4.3 方法精密度和回收率實(shí)驗(yàn)

以空白豬肉樣品為基質(zhì)，進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，加標(biāo)濃度分別為0.60 μg/kg、1.00 μg/kg、 3.00 μg/kg。將加標(biāo)樣品和空白樣品按方法進(jìn)行前處理，上機(jī)測(cè)試，結(jié)果見表3、表4、表5及圖2。

5 結(jié)論

經(jīng)過多次試驗(yàn)驗(yàn)證，本方法用于豬肉中氟哌啶醇藥物殘留的測(cè)定，一系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液0.10 ng/mL、0.50 ng/mL、1.00 ng/mL、 2.00 ng/mL、4.00 ng/mL、8.00 ng/mL）的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)r=0.999 65；經(jīng)測(cè)定方法檢出限確定為0.053 μg/kg，可滿足檢測(cè)需要；0.60 μg/kg、 1.00 μg/kg和3.00 μg/kg加標(biāo)試驗(yàn)變異系數(shù)分別為 2.92 %、4.83 %和3.20 %，加標(biāo)試驗(yàn)回收率范圍分別為80.00 %～86.70 %、81.00 %～ 93.00 %和86.00 %～92.33 %。方法驗(yàn)證結(jié)果滿足GB/T 27404-2008《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢測(cè)》[8]的要求。

本試驗(yàn)方法前處理過程簡(jiǎn)便、快捷、易操作，UPLC-MS-MS及流動(dòng)相梯度等一系列的條件設(shè)置合理，經(jīng)UPLC-MS-MS打碎后的定性定量離子辨識(shí)度高，有較高的響應(yīng)，測(cè)得檢出限可滿足檢測(cè)需求，驗(yàn)證結(jié)果具有較好的精密度和準(zhǔn)確度，可用于豬肉中氟哌啶醇?xì)埩魴z測(cè)。 □□