降脂脈安顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

金同慶，朱華榮(.昆山市中醫(yī)醫(yī)院，江蘇 昆山 25000；2.揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司，江蘇 南京 225000)

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降脂脈安顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

金同慶1，朱華榮2*
(1.昆山市中醫(yī)醫(yī)院，江蘇 昆山 215000；2.揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司，江蘇 南京 225000)

目的：建立和完善降脂脈安顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：以紫外分光光度法測(cè)定降脂脈安顆粒中決明子蒽醌類成分和黃芪總皂苷的含量。結(jié)果：決明子蒽醌類成分在0.0025～0.0200mg/mL濃度范圍內(nèi)線性良好，r=0.9999，平均加樣回收率97.59%，RSD=1.15%；黃芪總皂苷成分在0.016～0.036mg/mL濃度范圍內(nèi)線性良好，r=0.9996，平均加樣回收率97.50%，RSD=1.29%。結(jié)論：此方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、靈敏度高，重現(xiàn)性好，可作為該制劑的質(zhì)量控制方法。

降脂脈安顆粒；紫外分光光度；總蒽醌；總皂苷；質(zhì)量控制

降脂脈安顆粒是昆山市中醫(yī)醫(yī)院的自制制劑，處方是由生黃芪、丹參、決明子、生山楂、麥芽按照一定比例組成，并經(jīng)過(guò)適當(dāng)?shù)姆椒ㄖ瞥傻念w粒制劑。該制劑具有補(bǔ)氣活血，消積祛瘀，治療高脂血癥、脂肪肝等癥。本文對(duì)紫外分光光度法測(cè)定制劑中決明子總蒽醌和黃芪總皂苷的方法進(jìn)行了方法學(xué)考察，包括線性范圍、精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性、加樣回收率5個(gè)方面。獲得了滿意的結(jié)果，進(jìn)一步提高了醫(yī)院自制制劑的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

FA2004N電子天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司)，ZF20C暗箱式紫外線分析儀(上海市顧村電光儀器廠)，SHB-ⅢS循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公

司)，DZF-6050真空干燥箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)，HHS型電熱恒溫水浴鍋(上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠)，RE-52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海申勝生物技術(shù)有限公司)，HS3120超聲儀。

1.2 試藥

1，8-二羥基蒽醌對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)0829-9702)；黃芪甲苷對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)110781-200613)；降脂脈安顆粒(昆山中醫(yī)醫(yī)院自制制劑，批號(hào)為110708、111103、120309)；使用試劑均為分析純。

2 定量分析

2.1 決明子

中醫(yī)認(rèn)為，決明子具有清肝明目、潤(rùn)腸通便的功效[1]。藥理研究表明，決明子能降血脂、降血壓、瀉下、保肝、護(hù)眼[2-7]。決明子含有多種成分，如蒽醌類、萘駢-吡咯酮類、脂肪酸類、氨基酸、無(wú)機(jī)元素等，主要成分為蒽醌類，含量約占1%。文獻(xiàn)報(bào)道了蒽醌類成分具有抗菌、調(diào)節(jié)免疫、降血脂、瀉下、抗氧化等作用[8-11]。目前主要采用醇提取蒽醌苷，酸水解苷成苷元，再用氯仿萃取，醋酸鎂顯色，紫外分光光度法測(cè)定制劑中決明子總蒽醌[12-13]。

2.1.1 對(duì)照品溶液制備 取1，8-二羥基蒽醌對(duì)照品2.50mg，精密稱定，置于50mL量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻即得濃度為0.05mg/mL的對(duì)照品溶液。

2.1.2 供試品溶液制備 取降脂脈安顆粒(批號(hào)120309)1袋，約15g，精密稱重，置圓底燒瓶中，加入200mL乙醇加熱回流2h，濾過(guò)，再加入100mL乙醇回流1h，濾過(guò)，合并濾液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至100mL以下，用25%乙醇定容至100mL備用。精密量取20mL，蒸干，加10%(V/V)鹽酸溶液30mL，置沸水浴中加熱水解1h，立即冷卻。用氯仿強(qiáng)力振搖萃取4次，每次20mL，合并氯仿液并回收至干。殘?jiān)尤?.5%醋酸鎂甲醇液溶解，并稀釋至100mL，搖勻。

2.1.3 陰性對(duì)照品溶液制備 按處方量制成缺決明子的陰性模擬制劑，按“2.1.1”項(xiàng)下制備成陰性對(duì)照品溶液。

2.1.4 最大吸收波長(zhǎng) 精密吸取1，8-二羥基蒽醌對(duì)照品溶液2mL，置于10mL量瓶中，水浴蒸發(fā)氯仿至干，殘?jiān)尤?.5%醋酸鎂甲醇液溶解，并稀釋至刻度，搖勻。于分光光度計(jì)200 ～ 800nm處掃描，由掃描結(jié)果確定最大吸收波長(zhǎng)為507nm。

2.1.5 陰性干擾實(shí)驗(yàn) 分別精密吸取1，8-二羥基蒽醌對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照品溶液各2mL，依照“2.1.4”項(xiàng)下操作。結(jié)果1，8-二羥基蒽醌對(duì)照品溶液在507nm波長(zhǎng)處有最大吸收，供試品溶液在相同的波長(zhǎng)處有較大吸收，陰性對(duì)照品溶液在相同波長(zhǎng)處無(wú)干擾峰。

2.1.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 精密吸取1，8-二羥基蒽醌對(duì)照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0mL，分別置于10mL量瓶中，水浴蒸發(fā)氯仿至干，殘?jiān)尤?.5%醋酸鎂甲醇液溶解，并稀釋至刻度，搖勻。以0.5%醋酸鎂甲醇液為空白，于507nm處，按照紫外可見分光光度法(中國(guó)藥典2010版一部 附錄ⅤA)測(cè)定吸收度Y為縱坐標(biāo)，濃度X(mg·mL-1)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果回歸方程為：Y=49.924X-0.004，r=0.9999，結(jié)果見表1、圖1。

表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線考察結(jié)果

圖1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.1.7 精密度考察 精密量取對(duì)照品溶液，按照“2.1.6”項(xiàng)下方法，自“水浴蒸發(fā)氯仿至干”起，依法連續(xù)測(cè)定6次，結(jié)果見表2，RSD=1.73%，表明此方法精密度良好。

表2 精密度試驗(yàn)

2.1.8 穩(wěn)定性考察 取供試品溶液，在分光光度計(jì)上，于507nm處，以0.5%醋酸鎂甲醇液為空白，每隔10min進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表3，RSD=1.22%，表明70min內(nèi)溶液的穩(wěn)定性良好。

表3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

2.1.9 重復(fù)性試驗(yàn) 按“2.1.2”項(xiàng)下制得同一批次(120309)供試品5份，以0.5%醋酸鎂甲醇液為空白，在分光光度計(jì)上于507nm處，測(cè)定吸收度。結(jié)果總蒽醌平均含量為0.0183%，RSD=1.43%，重復(fù)性良好，見表4。

表4 重復(fù)性試驗(yàn)

2.1.10 回收率考察 精密稱取同一批次(120309)降脂脈安顆粒6份，分別按“2.1.2”項(xiàng)下制得供試品溶液，每份分別量取20mL，加入1，8-二羥基蒽醌對(duì)照品溶液10mL，以0.5%醋酸鎂甲醇液為空白，在分光光度計(jì)上，于507nm處，測(cè)定吸收度。結(jié)果平均回收率為97.59%，RSD=1.15%，見表5。

2.1.11 樣品含量測(cè)定 按“2.1.2”項(xiàng)下制得3個(gè)批次(110708、111103、120309)供試品11份，以0.5%醋酸鎂甲醇液為空白，在分光光度計(jì)上于507nm處測(cè)定吸收度。計(jì)算樣品中總蒽醌的含量，結(jié)果見表6。

表5 回收率試驗(yàn)

表6 三批樣品總蒽醌含量測(cè)定

根據(jù)3批樣品測(cè)定結(jié)果，暫定樣品中每袋含總蒽醌以1，8-二羥基蒽醌計(jì)算，每袋不得少于0.002g。

2.2 黃芪

中醫(yī)認(rèn)為，黃芪具有補(bǔ)氣升陽(yáng)、固表止汗、利水消腫、生津養(yǎng)血、排膿、生機(jī)等功效[14]，藥理研究表明，黃芪具有調(diào)節(jié)免疫、抗炎、鎮(zhèn)痛、利尿、耐缺氧及抗疲勞等功效[15-16]。其主要成分為三萜皂苷、多糖及黃酮類化合物。文獻(xiàn)報(bào)道黃芪皂苷具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、降糖和改善心血管疾病等生物活性[17-20]。目前黃芪皂苷類化合物多先采用醇類溶劑(如乙醇或甲醇等)提取，然后用紫外分光光度法測(cè)定黃芪總皂苷含量[21-22]。

2.2.1 樣品制備 取降脂脈安顆粒一袋(批號(hào)120309)，約15g，精密稱重，置圓底燒瓶中，加入200mL乙醇加熱回流2h，濾過(guò)，再加入100mL乙醇回流1h，濾過(guò)，合并濾液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至100mL以下，用乙醇定容至100mL備用。

2.2.2 陰性對(duì)照品溶液制備 按處方量制成缺黃芪的陰性模擬制劑，同上法制備成陰性對(duì)照品溶液。

2.2.3 對(duì)照品制備 用電子天平準(zhǔn)確稱取黃芪甲苷對(duì)照品6.0mg，用甲醇溶于50mL容量瓶中搖均即得濃度為0.12mg/mL對(duì)照品溶液。

2.2.4 測(cè)定波長(zhǎng) 用移液管準(zhǔn)確吸取1.0mL濃度為0.122mg/mL的黃芪甲苷溶液，加入干燥試管中，于恒溫水浴鍋中揮干甲醇溶液，加入新鮮配制的5%香草醛-冰酷酸溶液0.2mL，再加入0.8mL高氯酸溶液，搖勻，于60℃水浴加熱15min，取出，然后在冰水中冷卻10min，最后準(zhǔn)確移取5mL冰醋酸至顯色后的溶液中，空白為隨行試劑，在400～700nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描．結(jié)果黃芪甲苷對(duì)照品在579nm處有最大吸收，故測(cè)定波長(zhǎng)為579nm。

2.2.5 陰性干擾實(shí)驗(yàn) 分別精密吸取黃芪甲苷對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照品溶液各1mL，依照“2.2.4”項(xiàng)下操作。結(jié)果黃芪甲苷對(duì)照品溶液在579 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，供試品溶液在相同的波長(zhǎng)處有較大吸收，陰性對(duì)照品溶液在相同波長(zhǎng)處無(wú)干擾峰。

2.2.6 線性關(guān)系考察 精確吸取對(duì)照品溶液0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8mL分別加入6個(gè)干燥具塞試管中，在恒溫水浴鍋中揮干甲醇溶液，分別加入新鮮配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.2mL，再加入0.8mL高氯酸溶液，搖勻，于60℃恒溫水浴加熱15min，取出，然后在冰水中冷卻10min，最后準(zhǔn)確移取5mL冰醋酸至顯色后的溶液中，空白為隨行試劑。在579nm下，按照紫外可見分光光度法(中國(guó)藥典2010版一部 附錄ⅤA)分別測(cè)出它們的吸光度，并以吸光度Y為縱坐標(biāo)，黃芪甲苷的含量X為橫坐標(biāo)得回歸方程為：Y=3.325r-0.0085，R=0.9996，見表7、圖2。

表7 標(biāo)準(zhǔn)曲線考察結(jié)果

圖2 黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2.7 精密度試驗(yàn) 精確吸取對(duì)照品溶液0.1mL，按照“2.2.6”項(xiàng)下，自“分別加入新鮮配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.2mL”起操作，依法測(cè)定吸光度，重復(fù)測(cè)定5次，其RSD為0.19%，結(jié)果表明精密度良好，見表8。

表8 精密度試驗(yàn)

2.2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精確吸取樣品溶液0.1mL，轉(zhuǎn)入具

塞試管中揮干乙醇，按照“2.2.6”項(xiàng)下，自“分別加入新鮮配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.2mL”起操作，顯色后放置0、0.5、1.0、1.5、2.0h后測(cè)定吸光度，其RSD為0.26%，結(jié)果表明樣品溶液在2.0h內(nèi)穩(wěn)定，結(jié)果見表9。

表9 穩(wěn)定性試驗(yàn)

2.2.9 重復(fù)性試驗(yàn) 按“2.2.1”項(xiàng)下制得同一批次(120309)樣品溶液5份，每份各量取0.1mL，轉(zhuǎn)入干燥具塞試管中揮干乙醇，按照“2.2.6”項(xiàng)下，自“分別加入新鮮配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.2mL”起操作，顯色后測(cè)定吸光度，其RSD為0.21%，結(jié)果表明其重復(fù)性良好，結(jié)果見表10。

表10 重復(fù)性試驗(yàn)

2.2.10 加樣回收率試驗(yàn) 稱取同一批次(120309)降脂脈安顆粒6份，分別按“2.2.1”項(xiàng)下的方法制得供試品溶液，每份分別量取0.1mL，精密加入一定量的黃芪甲苷對(duì)照品溶液，按照“2.2.6”項(xiàng)下，自“分別加入新鮮配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.2mL”起操作，顯色后測(cè)定吸光度，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為97.5%，RSD=1.29%，見表11。

表11 回收率試驗(yàn)

2.2.11 樣品含量測(cè)定 按“2.2.1”項(xiàng)下方法制得3個(gè)批次(110708、111103、120309)樣品溶液11份，每份各量取0.1mL，轉(zhuǎn)入干燥具塞試管中揮干乙醇，按照“2.2.6”項(xiàng)下，自“分別加入新鮮配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.2mL”起操作，顯色后測(cè)定吸光度，計(jì)算樣品中總皂苷的含量，結(jié)果見表12。

表12 三批樣品總蒽醌含量測(cè)定結(jié)果

根據(jù)3批樣品測(cè)定結(jié)果，暫定樣品中每袋含總皂苷以黃芪甲苷計(jì)算，每袋不得少于0.15g。

3 結(jié)語(yǔ)

本實(shí)驗(yàn)利用紫外分光光度法，測(cè)定醫(yī)院自制制劑中總蒽醌的含量，方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、靈敏度高。利用紫外分光光度法測(cè)定，以黃芪甲苷為對(duì)照品，測(cè)得標(biāo)準(zhǔn)曲線后，再測(cè)定黃芪中總皂苷的含量是非常成熟的方法。測(cè)定結(jié)果具有較高的參考價(jià)值。為昆山市中醫(yī)醫(yī)院的自制制劑降脂脈安顆粒的質(zhì)量控制和標(biāo)準(zhǔn)提升，提供了一定的科學(xué)依據(jù)。

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(責(zé)任編輯：余 婷)

Quality Standards for Particles of Lipid-lowering Clock Security

Jin Tongqin1，Zhu Huarong2*
(1.Traditional Chinese Medicine Hospital of Kunshan,Kunshan 215000,China;2.Yangzi River Pharmacetuical Group,Nanjing 225000,China)

Objective:To establish and improve the quality of the particles of lipid-lowering clock security standards.Methods:UV spectrophotometry cassia seed,anthraquinones and saponins in Radix Astragali.Results:cassia seed anthraquinones.0025～0.0200mg/mL concentration range of linear,r = 0.999 9,the average recoveries of 97.59%,RSD=1.15%; total saponins in astragalus 0.016～0.036mg / mL,good linearity in the range r=0.999 6,average recoveries of 97.5%,RSD=1.29%.Conclusion:The method is simple,accurate,high sensitivity,good reproducibility can be used as a quality control method for the preparation

Lipid-lowering clock security particles; UV spectrophotometry; Total anthraquinone; Total saponins determination of content

2015-01-23

金同慶(1980-)，男，江蘇省昆山市中醫(yī)醫(yī)院主管中藥師，研究方向?yàn)橹兴帉W(xué)。

朱華榮(1981-)，男，碩士，揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司高級(jí)項(xiàng)目管理師，研究方向?yàn)橹兴?、天然藥物開發(fā)。

R284.2

A

1673-2197(2015)15-0042-05

10.11954/ytctyy.201515018