溫腎方對乙肝攜帶者血清、精子HBV-DNA的影響

余 顏，俞旭君，王永磊，李俊君，白松林

(成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院，四川 成都 611137)

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溫腎方對乙肝攜帶者血清、精子HBV-DNA的影響

余 顏，俞旭君，王永磊，李俊君，白松林*

(成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院，四川 成都 611137)

目的：觀察溫腎方對脾腎陽虛型慢性乙型肝炎病毒(HBV)攜帶者血液和精子HBV-DNA的影響，探討中醫(yī)藥阻斷慢性HBV攜帶者父嬰垂直傳播的方法。方法：采用隨機對照雙盲試驗將106例精子HBV-DNA為陽性的慢性HBV攜帶者隨機分為治療組和對照組各53例，治療組患者給予溫腎方治療；對照組患者予以安慰劑。治療6個月，觀察比較兩組患者中醫(yī)證候積分、血液和精子HBV-DNA陰轉(zhuǎn)率等指標。結(jié)果：治療后，脫落患者11例，其中治療組患者血清HBV-DNA轉(zhuǎn)陰率為6.2%(3/48)，低于對照組的4.2%(2/47),比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；治療組患者精子HBV-DNA轉(zhuǎn)陰率為37.5%(18/48)，高于對照組的4.2%(2/47)，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論：溫腎方可改善患者中醫(yī)證候情況,提高患者精子HBV-DNA轉(zhuǎn)陰率，但對患者血清HBV-DNA轉(zhuǎn)陰率無明顯影響。

慢性HBV攜帶者；脾腎陽虛證；溫腎方；血液；精子

受乙肝病毒感染的精子與正常卵細胞受精，可能會在胎兒體內(nèi)某些組織形成病毒顆粒，使其一出生就成為病毒攜帶者，因此有必要把血清和精液HBV-DNA同時作為臨床主要檢測指標，研究臨床治療方案。

目前，臨床對于慢性HBV攜帶者建議暫不給予西藥抗病毒治療，有必要探索中藥對慢性乙肝攜帶者父系精子HBV-DNA的影響。本研究采用溫腎方治療陽虛證慢性HBV攜帶者，觀察其對患者血清、精子HBV-DNA載量的影響，具體報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2011年3月—2013年3月我院收治的106例脾腎陽虛型慢性乙型肝炎病毒(HBV)攜帶者作為研究對象，以DPS v8.01軟件，按隨機對照雙盲試驗分為治療組和對照組各53例，患者年齡為25～35歲，平均年齡28歲。

1.2 病例選擇

1.2.1 西醫(yī)診斷標準 西醫(yī)診斷符合《慢性乙型肝炎防治指南》(2010版)相關(guān)標準，確診為慢性CHB攜帶者。

1.2.2 中醫(yī)診斷標準 參照《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則(試行)》(2002版)制定。

1.3 納入標準

符合西醫(yī)慢性CHB攜帶者診斷標準，且血清105copies/mL≤HBVDNA≤109copies/mL；精子HBV-DNA陽性者；舌脈辨證符合CHB脾腎陽虛證辨證標準；年齡25～35歲；依從性好，知情同意，并簽署知情同意書。

1.4 排除標準

近6個月接受抗病毒或免疫抑制治療；合并嚴重原發(fā)性疾病、精神病者；排除精液異常者，參數(shù)按第五版WHO對人類精子的分級標準；正在使用影響精子生成及活力藥物者；先天性生殖系統(tǒng)畸形或睪丸、附睪、輸精管存在器質(zhì)性病變者。

1.5 剔除標準

納入后發(fā)現(xiàn)不符合納入標準；試驗中因各種原因破盲者；受試者依從性差(試驗用藥依從性<80%或>120%)，中途停藥或換藥、加藥者。

1.6 脫落標準

未按規(guī)定用藥無法判斷療效；雙盲試驗中由于嚴重不良事件需被破盲者；發(fā)生嚴重不良反應(yīng)，不宜接受繼續(xù)治療；發(fā)生不良反應(yīng)者,記入不良反應(yīng)統(tǒng)計。

病例完成情況:本試驗共有11例病例退出，總脫落率為10.3%。其中試驗組5例，對照組6 例，共有95例完成實驗。兩組脫落率比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。治療前兩組患者疾病資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。見表1。

表1 兩組患者一般資料比較 (±s)

1.7 方法

1.7.1 治療組 給予患者溫腎方(藥物組成：制附片6g、巴戟天30g、菟絲子15g、淫羊霍15g、黃芪20g、熟地黃15g、桑寄生15g、黃芩30g、青蒿9g、炙甘草5g)治療。統(tǒng)一煎煮，每劑藥物煎煮為2袋(每袋100mL)，分早晚2 次服用,連用6個月。

1.7.2 對照組 將原煎藥作20倍稀釋后加入淀粉，作為安慰劑使用，服用方法同治療組，均由成都中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院中藥房提供。

1.7.3 精子HBV-DNA檢測方法 采用熒光定量PCR技術(shù),精液液化后，將精子與精漿分離，精子以PBS洗3～5次，末次洗液PCR檢測HBV-DNA陰性，以PBS稀釋精子，調(diào)節(jié)精子濃度30×106個/mL，將精子保存?zhèn)溆?。將上述制備精?00μL移入0.5 mL小試管，加入100μL提取液，按照說明書操作，提取HBV-DNA，進行實時熒光PCR擴增試驗，對HBV-DNA檢測定量。HBVDNA檢測下限為5.0×102copies/mL，以標本檢測數(shù)值>1.0×103copies/mL判為陽性。采用Bio-rad icycler熒光定量PCR檢測儀(美國BIO-RAD公司)，HBV熒光定量PCR檢測試劑購自深圳凱杰公司。

1.8 觀察指標

分別于治療時、治療后第6個月檢測精液常規(guī)2次，取其中精液質(zhì)量最接近正常值作為實驗結(jié)果；精子及血清HBV-DNA各檢測2次，以最接近正常值為實驗結(jié)果；肝功能、腎功、血尿常規(guī)、心電圖各檢測1次。記錄不良反應(yīng)發(fā)生情況。

1.9 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組患者治療前后血清、精子HBV-DNA陰轉(zhuǎn)率比較

治療6個月后，治療組患者血清HBV-DNA轉(zhuǎn)陰率為6.2%(3/48)，低于對照組的4.2%(2/47),比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；治療組患者精子HBV-DNA轉(zhuǎn)陰率為37.5%(18/48)，高于對照組的4.2%(2/47)，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 兩組患者治療前后血清、精子HBV-DNA陰轉(zhuǎn)率比較 (n)

注：與對照組比較，*P<0.05。

2.2 不良反應(yīng)

治療過程中兩組患者未發(fā)生嚴重不良反應(yīng), 常見不良反應(yīng)為疲乏、腹瀉等, 均未用相關(guān)藥物干預(yù)能夠自行緩解。

3 討論

研究表明精子為乙肝病毒父嬰垂直傳播的載體，部分乙肝病毒攜帶者精子中攜帶乙肝病毒DNA, 在受精過程中以精子作載體，將病毒基因帶到胚胎，進而使子代感染HBV。研究[1]認為，針對父嬰傳播的阻斷方法為孕前對丈夫進行抗病毒治療，最大限度降低父親的血清HBV-DNA 水平。研究[2]表明：血清HBV-DNA陽性者其新生兒發(fā)生HBV父嬰垂直傳播的危險性為HBV-DNA 陰性者的2.1倍，精液陽性者其新生兒發(fā)生HBV父嬰垂直傳播的危險性為陰性者的34.3倍，而精子內(nèi)部HBV-DNA陽性檢出率遠遠低于精漿內(nèi)[3]；精子已被HBV感染，在受精過程中整合HBV-DNA精子不會受到選擇性淘汰，能順利完成受精過程，其父嬰垂直傳播的風(fēng)險遠大于血清。因此，縮短精子攜帶HBV-DNA時間及減少精子攜帶HBV-DNA載量可能阻斷乙肝父嬰垂直傳播。藥理學(xué)研究證明，溫腎方中巴戟天、桑寄生、黃芪等均有較好的免疫調(diào)節(jié)作用、抑制HBV病毒的功能。溫腎法可明顯降低部分免疫耐受期CHB患者外周血中CD4+、CD25+、Tregs/CD4+ T細胞的比例和FoxP3的基因表達水平,明顯改善患者外周血DC共刺激分子CD86、CD80、CD40、CD11c表達,從而有助于HBV的清除。精子攜帶乙肝病毒受多種因素影響，對于中藥干預(yù)后患者精子攜帶乙肝病毒減少或消失的作用機制尚未見報道，需設(shè)計更加嚴謹?shù)脑囼灱右则炞C。

本研究結(jié)果顯示，溫腎方可改善中醫(yī)證候療效, 提高患者精子HBV-DNA轉(zhuǎn)陰率，但對患者血清HBV-DNA轉(zhuǎn)陰率無明顯影響。對于精子HBV-DNA陽性的HBV攜帶者生育前進行中醫(yī)辨證治療,可提高精子HBV-DNA轉(zhuǎn)陰率，降低父嬰傳播的風(fēng)險。

[1] 盧銀平，曹偉，洪梅，等.父親HBV攜帶與嬰兒HBV感染的關(guān)系[J].中國婦幼保健,2011，26(2):221.

[2] 陳起燕，張榮蓮，黃欣欣，等. 乙肝父嬰垂直傳播的臨床觀察[J]. 中國婦幼保健,2013，28(11):1747.

[3] 楊勤德，張玉芳. HBV 感染者精液HBV-DNA 載量的相關(guān)影響因素研究[J].中國當(dāng)代醫(yī)藥，2013，20(3)：7.

(責(zé)任編輯：李嵐春)

2014-12-04

余顏(1979-)，男，成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院醫(yī)師，研究方向為泌尿男科。

白松林(1973-)，成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院醫(yī)師，研究方向為中西醫(yī)結(jié)合臨床。E-mail：smg-7327@163.com

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1673-2197(2015)10-0082-02

10.11954/ytctyy.201510036