接骨七厘片對骨折愈合過程中血液生化指標作用研究

戴 瑋

(成都體育學院附屬體育醫(yī)院，四川 成都 610041)

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接骨七厘片對骨折愈合過程中血液生化指標作用研究

戴 瑋

(成都體育學院附屬體育醫(yī)院，四川 成都 610041)

目的：探討接骨七厘片對骨折愈合過程中血液生化指標的影響作用。方法：將80只Wistar大鼠均分為對照組和治療組各40例，人工制造左脛骨骨折模型后分籠飼養(yǎng)；采用接骨七厘片濃縮液灌胃治療，于術(shù)后5天、10天、20天、30天采集血液樣本進行生化指標檢測，并進行骨折部位DR攝片檢查。結(jié)果：治療組大鼠血清ALP、血清鈣磷乘積在第10天、20天、30天明顯升高，且均顯著高于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結(jié)論：該試驗表明接骨七厘片能通過提高血清ALP水平和鈣磷濃度乘積等血液生化指標，促進鈣鹽在骨折部位沉積來增強體內(nèi)骨折的愈合，對骨折愈合過程具有明顯的促進作用。

接骨七厘片；Wistar大鼠；血液生化指標；骨折

接骨七厘片是我院骨科臨床最常用的中成藥制劑之一，具有較好的臨床療效，在臨床實踐中證明對骨折病人的愈合具有顯著促進作用[1]。其處方中含有炒乳香、沒藥、當歸、骨碎補(燙)、龍血竭、自然銅(鍛)、大黃(酒)等，傳統(tǒng)中醫(yī)學認為其具有活血化瘀、消腫止痛、接骨續(xù)傷的功效[2]。作為一個傳統(tǒng)的中藥制劑，其對骨傷的愈合機制并沒有通過系統(tǒng)的現(xiàn)代醫(yī)學實驗進行闡明，僅有療效觀察和臨床試驗研究[3-5]。為了進一步探討其促進骨折愈合的機理，我們設(shè)計了該實驗，對骨傷愈合過程中的血液生化方面的重要指標進行研究，以期通過現(xiàn)代醫(yī)學實驗為接骨七厘片促進骨傷愈合的機制提供科學證據(jù)，為臨床運用接骨七厘片提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗動物與試藥

實驗動物：Wistar大鼠80只，雌雄不限，3～4個月齡，體重為290～420g。由四川大學醫(yī)學院實驗動物中心提供。實驗藥物：接骨七厘片(規(guī)格：0.3g/片，湖南金沙藥業(yè)有限責任公司，批號：20121104)，給藥溶液：1片/mL的水溶液。

1.2 試劑與設(shè)備

鈣(Ca)測定試劑盒(上?？迫A生物工程股份有限公司，批號：20130116)；堿性磷酸酶(ALP)試劑盒(上?？迫A生物工程股份有限公司，批號：20130409)；無機磷(IP)測定試劑盒(上?？迫A生物工程股份有限公司，批號：20121005)；日立7170型全自動生化分析儀(日本日立公司)；數(shù)字化X線DR裝置(日本島津公司，型號：CXDI-50G)。

1.3 方法

1.3.1 動物分組及給藥方法 對照組40只(造模成功，不給藥)；治療組40只(造模成功，溶液灌胃給藥3mL/次/日)。分為5天、10天、20天、30天4組，每組10只。

1.3.2 動物模型制作方法 術(shù)前8h大鼠禁食、稱重，1%異戊巴比妥溶液腹腔內(nèi)注射麻醉(約3mg/100g)。麻醉后，將大鼠仰臥，四肢固定于手術(shù)臺上，右大腿內(nèi)側(cè)剪毛，選擇膝關(guān)節(jié)下緣1cm處作1.0～1.5cm的直切口，沿覆蓋關(guān)節(jié)的肌腱下緣切開筋膜，分離肌肉，暴露右脛骨中部，使用外科手術(shù)小鉗夾4mm長度不規(guī)則骨缺損，碎片原位保留，不予剔除。手術(shù)后逐層進行縫合。

1.3.3 血液樣本采集及檢測方法 造模成功后，分別分籠飼養(yǎng)5天、10天、20天、30天后進行手術(shù)，麻醉后經(jīng)腹主動脈取血約10mL置于醫(yī)用抗凝管中保存。分別進行以下血液指標的檢測：①血清鈣離子濃度檢測：采用改良偶氮胂Ⅲ比色法測定；②血清磷濃度檢測：采用紫外光吸收法測定；③血清ALP活性檢測：采用AMP緩沖液法進行測定。

1.3.4 數(shù)字化X線DR攝片及療效評定依據(jù) 給藥后5天、10天、20天、30天大鼠取血前，對大鼠右側(cè)脛骨骨折部位行X線檢查，觀察骨折部位骨痂的愈合情況。X線評價標準[7]如下：優(yōu)：骨折部位斷端邊緣完全消失，骨膜密度與骨影近似，骨痂填滿缺損，與骨皮質(zhì)密度相同且相互連接；良：骨折部位斷端邊緣仍可見，但接近消失，骨膜反應較深，密度增高，骨痂增多，但尚未填滿缺損，邊緣較清晰；差：骨折斷端較清晰，骨膜反應輕度，無骨痂可見。

1.4 統(tǒng)計學方法

2 結(jié)果

本實驗造模過程中麻醉效果較好，并未出現(xiàn)不良反應，故麻醉對實驗過程及結(jié)果無明顯影響；治療組Wistar大鼠給藥過程中并未發(fā)生藥物不良反應以及其他中毒等毒副作用。

2.1 血液生化指標檢測結(jié)果

2.1.1 血清鈣離子檢測結(jié)果 骨折后，對照組和治療組大鼠在第5～30天期間血鈣濃度呈現(xiàn)逐漸降低的趨勢，并且治療組大鼠骨折后血鈣濃度降低的趨勢更加明顯；與對照組相比，治療組大鼠血鈣濃度有明顯的差異(P<0.05)，表明接骨七厘片在骨折愈合過程中具有降低血鈣的療效。見表1。

表1 血清鈣離子濃度比較 (±s,mmol/L)

注：與對照組比較，*P<0.05。

2.1.2 血清磷離子檢測結(jié)果 骨折后，對照組和治療組大鼠第5～30天期間血清磷離子濃度呈現(xiàn)明顯上升的趨勢，并且治療組大鼠骨折后血清磷離子濃度升高的趨勢更加明顯。與對照組相比，治療組大鼠血清磷離子濃度差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，表明接骨七厘片在骨折愈合過程中能夠顯著升高血磷濃度。見表2。

表2 血清磷離子濃度比較 (±s,mmol/L)

注：與對照組比較，*P<0.05。

2.1.3 血清鈣磷離子濃度乘積結(jié)果 骨折后，對照組和治療組大鼠第5～30天期間血清鈣磷離子濃度乘積開始持續(xù)升高，在第20天基本穩(wěn)定。并且治療組骨折后，血清鈣磷離子濃度乘積升高的趨勢更加明顯，與對照組相比，治療組大鼠血清鈣磷離子濃度乘積有明顯的差異(P<0.05)。通過該指標以及前面鈣、磷離子檢測結(jié)果可以看出，接骨七厘片在促進骨折愈合過程中，能夠顯著影響血液中鈣、磷離子的含量，達到促進愈合的目的。見表3。

表3 血清鈣磷離子濃度乘積比較 (±s)

注：與對照組比較，*P<0.05。

2.1.4 血清堿性磷酸酶(ALP)活性檢測結(jié)果 骨折后，對照組和治療組大鼠第5～30天期間血清堿性磷酸酶活性開始持續(xù)升高，在第20天基本達到最高濃度，此后有一定程度的減少。且治療組骨折后，血清堿性磷酸酶(ALP)活性升高的趨勢更加明顯，與對照組相比，治療組大鼠血清堿性磷酸酶活性差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。表明接骨七厘片在促進骨折愈合過程中，能夠顯著提高血清堿性磷酸酶(ALP)的活性，達到促進愈合的目的。見表4。

表4 血清堿性磷酸酶活性檢測結(jié)果 (±s,U/L)

注：與對照組比較，*P<0.05。

2.2 骨折部位外觀及X線評價結(jié)果

骨折后第5天對照組和治療組X線結(jié)果顯示并無明顯骨痂覆蓋，骨折部位骨缺損仍然明顯，X線評價結(jié)果均為差級；骨折后第10天均有骨痂覆蓋，骨折部位骨缺損處稍有密度增高影，且治療組與對照組相比，有一定的差異；骨折后第20天骨影密度均有所增高并有顯著差異，治療組優(yōu)良率85.0%，對照組優(yōu)良率54.5%；骨折后30天，治療組骨缺損處X線下均出現(xiàn)高密度影，并愈合，優(yōu)良率為97.5%，而對照組有75.0%呈現(xiàn)優(yōu)良。結(jié)果表明，接骨七厘片可以有效縮短大鼠脛骨骨折的臨床愈合時間，在術(shù)后10～20天內(nèi)能顯著促進骨折愈合。

3 討論

接骨七厘片為我院骨科常規(guī)應用的一種中成藥，臨床上已經(jīng)驗證其具有良好的促進骨折愈合的療效。但由于骨折愈合的機制非常復雜，涉及大量生長因子和各種外在因素，對于接骨七厘片的療效機制，并沒有血液生化指標方面的研究。

本課題從構(gòu)建大鼠脛骨骨折模型、藥物治療和血液生化指標的檢測三方面開展研究，并通過X線檢查對骨折愈合效果進行觀察和評價，以期能夠?qū)庸瞧呃迤墓钦塾献饔锰峁┲庇^而科學的依據(jù)。試驗結(jié)果顯示，接骨七厘片在10～20天時間內(nèi)，能夠顯著促進大鼠脛骨骨折部位的愈合，X線放射學評價結(jié)果也證明接骨七厘片能縮短大鼠脛骨骨折的臨床愈合時間。

各項血液生化指標檢測結(jié)果表明，接骨七厘片能夠促進鈣磷的沉積。由于血液中的鈣、磷是以離子形式存在的，血液中鈣磷含量的高低直接影響骨的鈣化與溶解，其是相互影響、互相制約的，并受體內(nèi)生長因子的調(diào)節(jié)和控制。血液中的鈣磷相互作用，使鈣磷乘積維持在一定水平，鈣磷乘積的升高，有利于鈣鹽的沉積。試驗中，治療組大鼠鈣磷濃度乘積較對照組顯著升高(P<0.05)，證明接骨七厘片能夠降低血鈣，升高血磷，使鈣磷乘積高峰顯著升高，促進鈣鹽沉積，有利于骨折愈合。同時，接骨七厘片能夠使血清堿性磷酸酶(ALP)的活性顯著升高，這是骨骼重建活躍性的標志，ALP能將體內(nèi)有機磷酸化合物分解，產(chǎn)生足夠的磷酸根離子，使其與鈣離子結(jié)合成磷酸鈣而沉淀于骨組織內(nèi)，可作為一項觀察骨折愈合的指標。試驗中，治療組大鼠血清ALP的活性明顯高于對照組(P<0.05)，故可以認為接骨七厘片能提高骨折愈合中血清ALP的活性，增強體內(nèi)成骨活動，促進骨折愈合，值得臨床推廣應用。

[1] 蔡步林,鄭金鳳,李文莉.接骨七厘散質(zhì)量標準的研究[J].中國藥師,2012,15(8):1092-1094.

[2] 劉興坤,谷福順.單味中藥及其有效成分骨折愈合作用的研究進展[J].中醫(yī)正骨,2012,24(5):75-77.

[3] 朱建林,于躍愛,王玉霞,等.接骨七厘片治療創(chuàng)傷骨折臨床療效觀察[J].中國中醫(yī)骨傷科雜志,2000,8(5):29.

[4] 吳華,陳繼革,陳超,等.接骨七厘片治療骨折的實驗研究[J].華中科技大學學報:醫(yī)學版,2003,32(1):92-94,104.

[5] 陳玲,楊云洲,陳繼革,等.接骨七厘片促進大鼠骨折愈合的實驗研究[J].湖北中醫(yī)雜志,2005,27(1):50-52.

[6] 謝文,馮坤,郭建剛,等.中藥接骨顆粒對家兔腎虛骨折愈合的組織形態(tài)學影響[J].中醫(yī)正骨,2006,18(12):6-7.

[7] 國家中醫(yī)藥管理局.中醫(yī)病證診斷療效標準[M].南京:南京大學出版社,1994:94.

(責任編輯：尹晨茹)

Effects of Jiegu Qili Tablet on Blood Biochemical Indices during Fracture Healing in Wistar Rats

Dai Wei

(Sport Hospital Attached To CDSU, Chengdu 610041,China)

Objective:To discuss the effects of Jiegu Qili Tablet during bone fracture healing on blood biochemical induces.Methods:80 Wistar rats were selected and raised in different cages after bone fracture models established. The rats were divided randomly into two groups: control group and treatment group. Gastric administration of Jiegu Qili Tablet solution was given to the treatment group. The blood biochemical indexes and computed radiography were observed after 5d, 10d, 20d, 30d operation.Results:Serum ALP in the treatment group were significantly increased at 10d, 20d, 30d (P<0.05), compared with control group. Serum calcium and phosphorus ion concentration products of the treatment group were significantly elevated at 5d, 10d, 20d, 30d as compared with that in control group(P<0.05). Conclusion:The promotive effects of Jiegu Qili Tablet may be due to enhancing the activity of serum ALP, increasing calcium and phosphorus product, promoting the calcium deposition, and therefore promoting osteogenic activity.

Jiegu Qili Tablets;Wistar Rat;Blood Biochemical Indices;Fracture

2014-12-17

戴瑋(1984-)，女，四川省成都體育學院附屬體育醫(yī)院醫(yī)師，研究方向為中醫(yī)骨傷。

R285.5;R274.1

A

1673-2197(2015)10-0018-02

10.11954/ytctyy.201510008