正交設(shè)計(jì)優(yōu)選小建中片提取工藝

顏曉玲 ，金楊巧 ，戴 娟，熊恩智，季巧遇

(1. 江西中醫(yī)藥大學(xué)，江西 南昌 330006；2.江中藥業(yè)股份有限公司，江西 南昌 330006)

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正交設(shè)計(jì)優(yōu)選小建中片提取工藝

顏曉玲1，金楊巧1，戴 娟1，熊恩智1，季巧遇2*

(1. 江西中醫(yī)藥大學(xué)，江西 南昌 330006；2.江中藥業(yè)股份有限公司，江西 南昌 330006)

目的：優(yōu)化選取小建中片的最佳提取工藝。方法：采用L9(34)正交試驗(yàn)法，以芍藥苷含量、甘草苷含量及干膏得率為考察指標(biāo)，通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析優(yōu)選小建中片的最佳提取工藝。結(jié)果：小建中片的最優(yōu)提取工藝為藥材加8倍量水，提取3次，每次1h。結(jié)論：該提取工藝穩(wěn)定可行，適合工業(yè)化生產(chǎn)，為小建中片的研制提供了科學(xué)依據(jù)。

小建中片；正交試驗(yàn)；提取工藝

小建中片由白芍、桂枝、生姜、大棗和炙甘草五種中藥組成，具有溫中補(bǔ)虛、緩急止痛之功效，常用于脾胃虛寒、脘腹疼痛、喜溫喜按、嘈雜吞酸、食少心悸及腹瀉與便秘交替癥狀的慢性結(jié)腸炎，胃及十二指腸潰瘍見上述癥狀者的治療[1]。本實(shí)驗(yàn)采用L9(34)正交設(shè)計(jì)優(yōu)化提取工藝，以有效成分含量及干膏得率為考察指標(biāo)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，確定最佳提取工藝，為后期小建中片的研制提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器及試藥

101A-2 干燥箱(上海市實(shí)驗(yàn)儀器總廠)；Agilent 1200型高效液相色譜儀(美國(guó)安捷倫科技有限公司)；AB204-N型精密分析天平(METTLER TOLEDO上海衡器有限公司)；芍藥苷對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為：110736-201337)；甘草苷對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為：111610-201106)；實(shí)驗(yàn)藥材均購(gòu)自安徽亳州市中信中藥飲片廠，經(jīng)鑒定合格；含量測(cè)定所用試劑為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 芍藥苷和甘草苷含量測(cè)定[2-3]

2.1.1 色譜條件 色譜柱：AgilentSB-C18(250mm×4.6mm,5μm)；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸溶液=16∶84；檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm；流速為1.0mL/min；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：5μL。

2.1.2 對(duì)照品溶液制備 精密稱取芍藥苷對(duì)照品、甘草苷對(duì)照品適量，加甲醇溶解制成含芍藥苷0.574 4mg/mL和甘草苷0.291 6mg/mL的混合對(duì)照品溶液。

2.1.3 供試品溶液制備 精密量取樣品溶液1mL，加甲醇15mL，超聲提取30min(4 500Hz)，濾過(guò)，濾液加甲醇定容至25mL容量瓶中，即得。

2.1.4 線性關(guān)系考察 精密吸取上述對(duì)照品溶液 5μL，注入液相色譜儀，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件，測(cè)定芍藥苷和甘草苷含量。結(jié)果顯示，芍藥苷和甘草苷的回歸方程分別為：Y芍藥苷=345.48X-331.06，r=0.999 8(n=6)，Y甘草苷=343.71X-321.21，r=0.999 9(n=6)，表明芍藥苷在5.744～287.3μg范圍內(nèi)、甘草苷在2.916～145.8μg范圍內(nèi)與其峰面積積分呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.2 干膏得率測(cè)定

精密量取10mL濃縮液，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中水浴蒸干，置于105℃烘箱中干燥3h，迅速取出，置于干燥器中冷卻30min，稱重，計(jì)算干膏得率。

2.3 考察因素及水平確定[4]

結(jié)合預(yù)實(shí)驗(yàn)情況、工業(yè)化生產(chǎn)條件和文獻(xiàn)報(bào)道，確定考察的因素為加水量、提取時(shí)間、提取次數(shù)，同時(shí)各因素選擇3個(gè)水平。見表1。

表1 小建中片提取工藝考察因素及水平

2.4 正交設(shè)計(jì)小建中片提取

按處方量稱取藥材9份，分別按正交試驗(yàn)表2進(jìn)行水提，藥液濾過(guò)，濾液減壓濃縮，定容至210mL，取樣測(cè)定芍藥苷含量、甘草苷含量和干膏得率。綜合評(píng)分=0.4×芍藥苷含量+0.3×甘草苷含量+0.3×干膏得率。結(jié)果顯示，各因素影響大小依次為C>B>A，其中提取次數(shù)對(duì)實(shí)驗(yàn)有顯著性影響，選擇最優(yōu)水平；加水量和提取時(shí)間無(wú)顯著性影響，結(jié)合工業(yè)化生產(chǎn)條件，選擇次優(yōu)水平。以A2B2C3為最佳，即加8倍量水，提取3次，每次1h。結(jié)果見表2、表3。

2.5 驗(yàn)證試驗(yàn)

按處方量稱取藥材，共3份，按照選取的最優(yōu)工藝條件提取，減壓濃縮至210mL，按“2.1”“2.2”項(xiàng)下操作，測(cè)定藥液中的芍藥苷含量、甘草苷含量和干膏得率。結(jié)果顯示，驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果與正交試驗(yàn)結(jié)果接近，即該工藝穩(wěn)定可行。結(jié)果見表4。

表2 L9(34)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)結(jié)果

表3 綜合評(píng)分方差分析

表4 工藝驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

小建中片中的有效成分為芍藥苷和甘草苷，因此本實(shí)驗(yàn)以有效成分含量和干膏得率為考察指標(biāo)，采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)法優(yōu)選小建中片的最佳提取工藝，得到最優(yōu)的工藝條件為加8倍量水，提取3次，每次1h。經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證所選取的提取工藝穩(wěn)定可行，可操作性高，為后期小建中片各方面的研制工作提供了依據(jù)。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2010:508.

[2] 王巍,黨長(zhǎng)萍.HPLC法測(cè)定小建中顆粒中芍藥苷的含量[J].黑龍江醫(yī)藥,2008,21(4):18-19.

[3] 傅勇,李旭,虞金寶.HPLC法同時(shí)測(cè)定紅花逍遙片芍藥苷及甘草苷含量[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2012,18(24):152-154.

[4] 李曉云,葉小利,牛小花,等.正交設(shè)計(jì)優(yōu)選鉤藤堿的提取工藝[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥,2009,5(1):49-50.

(責(zé)任編輯：尹晨茹)

Optimization of Extraction of Xiaojianzhong Tablets by Orthogonal Test

Yan Xiaoing1,Ji Qiaoyu2*,Dai Juan1,Jing Yangqiao1,Xiong Enzhi1

(1.Jiangxi Universty of Jealitioal Chinese Medicine,Nanchang 33006,China;2.Jiangzong Phaemaceutical Limited by Share Ltd.,Nanchang 33006,China)

Objective:To optimize the optimal extraction process of Xiao jianzhong Tablets. Methods:The orthogonal test of L9(34)was employed to optimize the extraction process of Xiao jianzhong tablets with the content of paeoniflorin and liquiritin, leaves the paste rate as index. Results:The best extraction condition of Xiao jianzhong Tablets was 8 times of quantity water, decoction 3 times, each time for 1 hour. Conclusion:the optimum extraction process is stable, feasible, suitable for industrial production and it can provide the references for Xiao jianzhong Tablets for its further investigation.

Orthogonal Test; Extraction Process; Xiaojianzhong Tablets

2015-01-28

顏曉玲(1989-)，女，江西中醫(yī)藥大學(xué)碩士研究生，研究方向?yàn)樗幬镏苿┭邪l(fā)。

季巧遇(1967-)，女，江中藥業(yè)股份有限公司副教授，研究方向?yàn)橹兴幮轮苿┭邪l(fā)。

R284.2

A

1673-2197(2015)12-0022-02

10.11954/ytctyy.201512009