膽寧片中蒲公英、金錢(qián)草提取工藝優(yōu)化研究

陳嬌婷，楊范莉

(1.贛南醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院，江西 贛州 341000；2.西北藥學(xué)雜志社，陜西 西安 710061)

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膽寧片中蒲公英、金錢(qián)草提取工藝優(yōu)化研究

陳嬌婷1，楊范莉2

(1.贛南醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院，江西 贛州 341000；2.西北藥學(xué)雜志社，陜西 西安 710061)

目的：優(yōu)選膽寧片中蒲公英、金錢(qián)草的提取工藝。方法：以咖啡酸含量、浸膏得率為指標(biāo)，設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)優(yōu)選提取工藝。結(jié)果：蒲公英、金錢(qián)草浸泡0.5h后加水煎煮2次，第1次加12倍量水，煎煮1.0h，第2次加水10倍量水，煎煮1.0h；咖啡酸含量為50.69%，浸膏得率為25.58%。結(jié)論：該提取工藝穩(wěn)定性高，可節(jié)約能源，適于工業(yè)應(yīng)用。

膽寧片；咖啡酸；浸膏得率；提取工藝

膽寧片收載于部頒標(biāo)準(zhǔn)中藥第十二冊(cè)[1]，由蒲公英、金錢(qián)草、人工牛黃等藥物組成，具有清熱化濕、疏肝利膽的作用，主要用于治療急慢性膽囊炎、膽道感染、膽結(jié)石等疾病。工藝規(guī)定蒲公英、金錢(qián)草為水煎煮提取，本實(shí)驗(yàn)對(duì)浸泡時(shí)間、煎煮時(shí)間、提取次數(shù)、加水量等因素進(jìn)行考察，選取蒲公英中主要抗菌成分咖啡酸[2]為考察指標(biāo)，設(shè)計(jì)正交實(shí)驗(yàn)[3-5]，確定水提工藝參數(shù)并優(yōu)化。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀(美國(guó)Waters2695)；蒲公英對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110753-200413)；蒲公英、金錢(qián)草(購(gòu)于安徽亳州青源藥材站)；甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的確定

根據(jù)2010版《中國(guó)藥典》(一部)蒲公英藥材中咖啡酸的檢測(cè)波長(zhǎng)[2]，選擇本品測(cè)定波長(zhǎng)為323nm。見(jiàn)圖1。

2.2 色譜條件

色譜柱：Hypersil ODS2 C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；

圖1 咖啡酸紫外吸收光譜

流動(dòng)相：甲醇-磷酸鹽緩沖液(20∶80)，取磷酸二氫鈉1.56g，加水1 000mL溶解，再加1%的磷酸溶液調(diào)節(jié)pH為3.8～4.0；檢測(cè)波長(zhǎng)：323nm；柱溫：25℃；流速：0.8mL·min-1。

2.3 對(duì)照品溶液的制備

精密量取110℃干燥至恒重的咖啡酸對(duì)照品3.8mg，置25mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，精密吸取1mL，置10mL棕色容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，即得(咖啡酸濃度為15.2μg/mL)。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖2。

2.4 供試品溶液的制備

水提液加水定容至1 200mL，精密量取10mL，置50mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，封口靜置30min，吸取上清液，微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò)，即得。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖3。

圖2 咖啡酸對(duì)照品HPLC圖譜

圖3 供試品溶液HPLC圖譜

2.5 水提工藝參數(shù)的確定

2.5.1 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果 稱(chēng)取藥材(蒲公英75g、金錢(qián)草100g)各9份，以浸泡時(shí)間、煎煮時(shí)間、提取次數(shù)、加水量為考察因素，按L9(34)正交表設(shè)計(jì)試驗(yàn)。見(jiàn)表1。

表1 因素水平

結(jié)果顯示：以咖啡酸提取量為指標(biāo)，極差分析結(jié)果為C>D>B>A，即影響水提效果的因素順序?yàn)椋杭逯蟠螖?shù)>加水倍量>煎煮時(shí)間>浸泡時(shí)間，最佳組合為A2B1C2D3。以浸膏得率為指標(biāo)，極差分析結(jié)果為C>B>A>D，即影響提取效果的因素順序?yàn)椋杭逯蟠螖?shù)>煎煮時(shí)間>浸泡時(shí)間>加水倍數(shù)，最佳組合為A1B3C3D3。正交試驗(yàn)方案及試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

2.5.2 水提工藝優(yōu)化 將各提取液定容至1 200mL，過(guò)濾，取濾液，按“2.2”項(xiàng)色譜條件測(cè)定提取液中咖啡酸的含量，并測(cè)定其浸膏得率，采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS10.0進(jìn)行極差和方差分析。結(jié)果見(jiàn)表3、表4。

表2 正交試驗(yàn)方案及試驗(yàn)結(jié)果分析

結(jié)果分析：煎煮次數(shù)和加水倍量對(duì)咖啡酸提取量影響差異顯著(P<0.05)；煎煮次數(shù)對(duì)浸膏得率影響差異顯著(P<0.05)。因此，從活性成分含量的重要性和能源方面考慮，煎煮次數(shù)選擇2次，煎煮時(shí)間選擇每次1h。由于浸泡時(shí)間對(duì)該兩項(xiàng)指標(biāo)影響均無(wú)顯著性差異，酌情選擇浸泡0.5h。加水倍量為12倍量，但考慮到生產(chǎn)實(shí)際中藥材在第1次提取時(shí)已充分吸水，第2次提取時(shí)不再吸水。因此，確定最佳工藝為：加水浸泡0.5h，提取2次，加水量分別為12倍、10倍，提取時(shí)間分別為1.0h、1.0h。

表3 咖啡酸含量方差結(jié)果分析

注：F0.05(2，2)=19.00 ；F0.01(2，2)=99.00。

表4 浸膏得率方差結(jié)果分析

注：F0.05(2，2)=19.00 ；F0.01(2，2)=99.00。

2.5.2 驗(yàn)證試驗(yàn) 稱(chēng)取藥材(蒲公英75g、金錢(qián)草100g)3份，按優(yōu)選工藝進(jìn)行驗(yàn)證。實(shí)驗(yàn)方法同上，各組提取液濃縮定容至1 200mL，測(cè)定咖啡酸提取量和浸膏得率。結(jié)果顯示：咖啡酸的平均提取量為52.52 mg；浸膏得率為23.85%。驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果表明，優(yōu)選工藝提取所得咖啡酸和浸膏得率穩(wěn)定可行。

綜上所述，膽寧片劑中兩味主藥的提取工藝為蒲公英、金錢(qián)草浸泡0.5h后加水煎煮2次，第1次加12倍量水，煎煮1.0h；第2次加水10倍量水，煎煮1.0h，合并煎煮液，濾過(guò)。提取液濃縮后與方中其他藥物提取所得浸膏按處方比例混合，其中間體與輔料混勻后符合片劑成型工藝要求。

3 討論

提取溶劑倍量一般比藥材吸收量高3～5倍，本研究對(duì)蒲公英和金錢(qián)草的溶劑吸收量進(jìn)行考察，確定蒲公英吸水量約為原藥材量的3倍，故正交試驗(yàn)加水量定為8～12倍。

《中國(guó)藥典》中咖啡酸含量HPLC測(cè)定方法較為穩(wěn)定，但分離度較差，本實(shí)驗(yàn)對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整，增大水相比例，分離度較好，無(wú)干擾，理論塔板數(shù)達(dá)到要求。

[1] 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局.中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部頒標(biāo)準(zhǔn)[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2005：136.

[2] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S].一部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社, 2010:244-245.

[3] 楊軍宣，黃元紅，陳虹靜，等.不同預(yù)處理方法對(duì)淫羊藿減壓回流提取效果的影響[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013,19(16)：48-50.

[4] 張銳，張旭，劉建群，等.黨參的亞臨界水提取工藝優(yōu)選[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013,19(10)：34-37.

[5] 黃建猷，劉智生，黃瑞松，等．正交試驗(yàn)法優(yōu)選乳康酊滲漉提取工藝研究[J]．中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2007，13(11)：19.

(責(zé)任編輯：李嵐春)

Optimization of Extraction Process of Dandelion in Danning Tablet

Chen Jiaoting1,Yang Fanli2

(1.Gannan Medical University,JiangXi Provice,Ganzhou 341000,China; 2.Pharmaceutical Journal of Northwest , Xi'an 710061,China)

Objective:To optimize the extraction process of Danning tablet.Methods:The optimum extraction process was selected by orthogonal test．The content of caffeic acid and extraction rate as indexes.Results:Extraction process of dandelion and christina loosestrife herb was as follows：soaked 30 min, added 15 times water in the first, 1h per time and 12 times water in the second, 1h per time. The transfer rate of caffeic acid and extraction rate were 50.69% and 25.58%.Conclusion:The optimum extraction technology is resource-saving，stable and practicable．

Danning Tablet;Caffeic Acid;Extraction Rate;Extraction Process

2015-04-14

陳嬌婷 (1980-)，女，江西省贛南醫(yī)學(xué)院講師，研究方向?yàn)樗幬镄聞┬团c新技術(shù)。E-mail:chenjiaoting80119@126.com

R284;TQ461

A

1673-2197(2015)16-0021-03

10.11954/ytctyy.201516010