生熟五味子對(duì)玉泉丸降糖作用及化學(xué)成分影響研究

高 慧，張 爽，高 雁，佟 鑫

(遼寧中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，遼寧 大連 116600)

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生熟五味子對(duì)玉泉丸降糖作用及化學(xué)成分影響研究

高 慧，張 爽，高 雁，佟 鑫

(遼寧中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，遼寧 大連 116600)

目的：比較生熟五味子對(duì)玉泉丸降血糖作用及化學(xué)成分的影響，為五味子“生熟異用”提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，并分析炮制原理。方法：采用鏈脲佐菌素(STZ)構(gòu)建高血糖SPF級(jí)大鼠模型，于給藥第7天、14天采用血糖儀測(cè)定大鼠血糖值；采用HPLC法檢測(cè)玉泉丸中葛根素、五味子醇甲的含量，比較生熟五味子對(duì)玉泉丸降糖作用及指標(biāo)性成分含量的影響。結(jié)果：兩種方法配制的玉泉丸降血糖作用無(wú)顯著性差異：含生五味子玉泉丸中，五味子醇甲、葛根素的含量分別為0.011 7%、0.032%；含醋五味子玉泉丸中，五味子醇甲、葛根素的含量分別為0.006 1%、0.024%。結(jié)論：玉泉丸原方選用生五味子較為科學(xué)合理。

五味子；醋制；玉泉丸；血糖值；五味子醇甲；葛根素

五味子為木蘭科植物五味子(SchisandraChinensis(Turcz.) Baill.)的干燥成熟果實(shí)，歸肺、心、腎經(jīng)，收斂固澀、益氣生津、補(bǔ)腎寧心[1]。中醫(yī)學(xué)理論[2]認(rèn)為五味子“入補(bǔ)藥熟用，入嗽藥生用”，即五味子“生熟異用”，《中國(guó)藥典》收載的五味子炮制品均為醋五味子，五味子醋制后可增強(qiáng)收斂酸澀的功效[3]。關(guān)于五味子炮制前后藥效學(xué)性能的研究，目前有保肝作用、免疫作用等方面的文獻(xiàn)報(bào)道[4-5]。本課題組前期對(duì)五味子補(bǔ)益、止咳、降血糖等作用進(jìn)行生熟比較研究，從其臨床應(yīng)用角度來(lái)說(shuō)，復(fù)方是中藥臨床應(yīng)用的主要形式，因此將五味子納入復(fù)方，將玉泉丸原方中生五味子換為醋五味子，與原方降糖作用進(jìn)行比較，并選取五味子醇甲、葛根素等成分作為指標(biāo)，分析玉泉丸化學(xué)成分，為五味子“生熟異用”的炮制原理及臨床合理應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 雄性SD大鼠，SPF級(jí)，體重180～220g，購(gòu)于遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)有限公司，SCXK(遼)2010-0001。

1.1.2 試劑 五味子，購(gòu)自遼寧丹東鳳城五味子種植基地；天花粉、地黃、葛根、麥冬、甘草、糯米、大棗等均購(gòu)自大連開(kāi)發(fā)區(qū)保健大藥房，均對(duì)照2010版《中國(guó)藥典》自行鑒定。醋五味子自行炮制[4]。

陽(yáng)性對(duì)照藥(阿卡波糖)，購(gòu)自拜耳醫(yī)藥保健有限公司(BJ09769)。鏈脲佐菌素，購(gòu)自Sigma公司(05758)。血糖試紙，購(gòu)自拜安康有限公司(4991-2008)。五味子醇甲對(duì)照品(110857-200709)、葛根素對(duì)照品(110752-200511)均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。HPLC用水為純水，甲醇為色譜純。

1.1.3 儀器 拜安康血糖儀(拜耳醫(yī)藥保健有限公司，型號(hào)：1816)。高效液相色譜儀(日本島津LC-10AP)。醫(yī)用超聲清洗器(昆山超聲儀器有限公司)，電子天平(Mettler Toledo AG285)。

1.2 降血糖活性比較

1.2.1 玉泉丸(分別含生五味子、醋五味子)水煎液的制備 取天花粉、地黃、葛根、麥冬、糯米各15g，生五味子(或醋五味子)、甘草各5g，加10倍量水，煎煮3次，每次1h，合并煎液，濃縮，分別制成含生五味子或醋品五味子的玉泉丸水煎液(濃度均為0.84g/mL)。

1.2.2 造模 實(shí)驗(yàn)大鼠高脂飼料喂養(yǎng)，同時(shí)灌服脂肪乳，每天1次，使大鼠體重達(dá)350g左右；采用腹腔注射STZ方式造模，劑量35mg/kg，造模72h后測(cè)定大鼠血糖值，將血糖值高于18mmol/L的大鼠隨機(jī)分為模型對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組(阿卡波糖)、玉泉丸生五味子組、玉泉丸醋五味子組，另取未造模大鼠作為空白對(duì)照組，每組10只。空白對(duì)照組、模型對(duì)照組大鼠給予生理鹽水(10mL/kg)灌胃，其他各組大鼠給予相應(yīng)藥液(10mL/kg)灌胃，每天1次，連續(xù)14天。

1.2.3 血糖值測(cè)定 給藥后第7天、14天，大鼠斷尾采血，采用血糖儀與血糖試紙測(cè)大鼠血糖值[6]。

1.3 化學(xué)成分比較

1.3.1 色譜條件 色譜柱：ECOSIL120-5-C18柱(250mm×4.6mm，5μm)；檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm；流動(dòng)相：甲醇(A)-水(B)。梯度洗脫條件：0～20min，65%A；20～30min，75%A。流速：1.0mL·min-1；柱溫：室溫。

1.3.2 對(duì)照品溶液制備 精密稱(chēng)取五味子醇甲、葛根素對(duì)照品，用甲醇溶解，制備混合對(duì)照品溶液，濃度分別為0.586、0.282mg/mL。

1.3.3 供試品溶液制備 取一定體積的玉泉丸(分別含生品、醋品五味子)水煎液，水浴蒸干后加甲醇溶解，過(guò)濾，濾液轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶，加甲醇至刻度，搖勻，過(guò)0.45μm微孔濾膜，即得。

樣品含量測(cè)定：取玉泉丸(分別含生品、醋品五味子)水煎液供試品，按上述色譜條件操作，記錄色譜峰及峰面積，為計(jì)算樣品含量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 降血糖實(shí)驗(yàn)結(jié)果

灌服脂肪乳1個(gè)月后，大鼠體重基本達(dá)到350g以上，腹腔注射STZ后，大鼠均表現(xiàn)出典型糖尿病癥狀，“三多一少”，即多飲、多食、多尿及體重減輕。72h后血糖值表明造模成功，大鼠血糖值明顯升高，且大于18mmol/L。連續(xù)給藥7天后，給藥組大鼠血糖值有所降低，含生五味子組與含醋五味子組大鼠血糖下降明顯，含醋五味子組大鼠改善程度較含生五味子組無(wú)顯著性差異。給藥14天后，含生五味子、醋五味子玉泉丸組大鼠血糖繼續(xù)降低，接近正常血糖值水平，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)果見(jiàn)表1。

組別造模后給藥7天給藥14天玉泉丸(生五味子)20.91±0.997.12±2.46*4.68±0.77*玉泉丸(醋五味子)22.51±1.36.85±0.88*4.03±0.49*空白對(duì)照組4.29±0.70*3.26±0.53*△3.14±0.46*模型對(duì)照組20.60±1.0720.38±2.62△20.00±2.11△阿卡波糖組20.64±0.958.14±2.40*3.04±0.34*

注：與模型組比較，*P<0.05；與阿卡波糖組比較，△P<0.05。

2.2 含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果

玉泉丸樣品HPLC色譜見(jiàn)圖1。

a：五味子醇甲;b:葛根素。

含生五味子玉泉丸中，五味子醇甲、葛根素的含量分別為0.011 7%、0.032%；含醋五味子玉泉丸中，五味子醇甲、葛根素的含量分別為0.006 1%、0.024%。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 玉泉丸中五味子醇甲、葛根素含量測(cè)定結(jié)果 (%)

3 討論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，含生五味子、醋制五味子成分玉泉丸均可降低糖尿病大鼠的血糖值，使大鼠血糖趨于正常值，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。前期五味子生熟飲片降血糖實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，醋制五味子較生五味子降糖作用起效的時(shí)間點(diǎn)不同，但實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)兩者血糖值結(jié)果無(wú)顯著性差異。本實(shí)驗(yàn)將五味子不同炮制品納入復(fù)方進(jìn)行研究，實(shí)驗(yàn)結(jié)果與生熟飲片結(jié)果相近，因五味子在方中非君藥，對(duì)復(fù)方藥效的實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響并不明顯。

含生五味子玉泉丸中五味子醇甲、葛根素含量均遠(yuǎn)高于含醋制五味子玉泉丸。生五味子、醋制五味子中五味子醇甲成分含量分別為0.011 7%、0.006 1%，故含醋制五味子玉泉丸的醇甲含量低于含生五味子玉泉丸并非由醋蒸引起，同時(shí)葛根素含量增加，說(shuō)明生五味子加入復(fù)方有利于煎煮過(guò)程中有效成分(如五味子醇甲、葛根素等)的溶出，其原理有待進(jìn)一步研究。

實(shí)驗(yàn)選擇方中君藥葛根的指標(biāo)性成分葛根素及五味子的指標(biāo)性成分五味子醇甲進(jìn)行研究，其含量的差異可從化學(xué)成分角度解釋五味子“生熟異用”的原因。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S].一部.北京: 中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010: 61-62.

[2] 張浩.仁術(shù)便覽[M].?？冢汉Ｄ蠂?guó)際新聞出版社，1995:320.

[3] 賈天柱.中藥炮制學(xué)[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2010: 266.

[4] 陸兔林，毛春芹，呂高虹，等.五味子不同炮制品補(bǔ)益作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)藥學(xué)雜志，2009,44(15)：1147-1149.

[5] 姚慶，陸兔林，胡芳，等.五味子不同炮制品對(duì)小鼠CYP450的誘導(dǎo)作用[J].華西藥學(xué)雜志，2011，26(3):249-251.

[6] 徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M]．第3版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2002.

(責(zé)任編輯：李嵐春)

2015-04-20

國(guó)家發(fā)改委中醫(yī)藥行業(yè)科研專(zhuān)項(xiàng)項(xiàng)目：19種生熟異用中藥飲片臨床規(guī)范使用研究 (20110700704)

高慧(1974-)，女，遼寧中醫(yī)藥大學(xué)副教授，研究方向?yàn)橹兴幣谥圃怼?/p>

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1673-2197(2015)16-0016-02

10.11954/ytctyy.201516007