高效液相色譜法測定人參不同部位人參皂苷Rg1、Re及Rb1的含量

付 聰(武漢市中醫(yī)醫(yī)院，湖北 武漢430014)

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高效液相色譜法測定人參不同部位人參皂苷Rg1、Re及Rb1的含量

付 聰
(武漢市中醫(yī)醫(yī)院，湖北 武漢430014)

目的：探討人參皂苷Rg1、Re、Rb1在人參藥材中主根、蘆頭、參須的富集情況，以確保人參中以上3種人參皂苷資源被充分利用，為開發(fā)人參各部位的臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。方法：采用高效液相色譜法測定產(chǎn)自于吉林通化的生曬參各部位中人參皂苷Rg1、Re和Rb1的含量。色譜條件為：安捷倫1200 系列高效液相色譜儀；安捷倫ZORBAX Eclipse XDB-C18色譜柱(4.6mm×150mm，5μm)；柱溫25℃；檢測波長為203nm；流速為0.7mL· min-1，乙腈-水梯度洗脫。結(jié)果：人參參須含有較高的人參皂苷Re(0.745 1%)、Rb1(0.859 6%)；而人參蘆頭含有較高的人參皂苷Rg1(0.415 8%)。結(jié)論：針對性地提取人參參須、蘆頭中的人參皂苷Rg1、Re和Rb1單體，應(yīng)能提高單體化合物的提取效率，更好地服務(wù)于創(chuàng)新藥物的開發(fā)。

人參；主根；參須；蘆頭；人參皂苷；高效液相色譜法

人參藥材為五加科植物人參(PanaxginsengC.A. Mey.)的干燥根和根莖，主要生長于東北亞寒冷地區(qū)，具有大補元氣、復(fù)脈固脫、補脾益肺、生津養(yǎng)血、安神益智的功效[1]。人參藥材中主要含有人參皂苷和人參多糖，還含有揮發(fā)性成分、有機酸及其酯、蛋白質(zhì)、酶類、甾醇及其苷類、多肽類、含氮化合物、木質(zhì)素、黃酮類、維生素、無機元素等[2]。本研究采用高效液相法測定采自吉林通化人參根、參須、蘆頭中3種單體皂苷Rg1、Re和Rb1的含量,以期為合理利用人參各部位人參皂苷提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

安捷倫1200系列高效液相色譜儀；系統(tǒng)：安捷倫 ChemStation化學(xué)工作站；色譜柱：安捷倫ZORBAX Eclipse XDB-C18色譜柱(4.6mm×150mm，5μm)。

1.2 藥品與試劑

標(biāo)準(zhǔn)品：人參皂苷Rg1(批號：110703-201128，含量以93.4%計)、人參皂苷Re(批號：110754-201324，含量以92.7%計)、人參皂苷Rb1(批號：110704-201223，含量以95.9%計)，均由中國食品藥品檢定研究院提供。供試品：人參(批號：130101，產(chǎn)地：通化，吉林康美藥業(yè))，經(jīng)湖北中醫(yī)藥大學(xué)吳和珍教授鑒定為五加科植物人參(PanaxginsengC.A. Mey.)，且符合《中華人民共和國藥典》2010版規(guī)定[1]。試劑：美國TEDIA牌色譜級乙腈，水為雙蒸水，其余試劑均為分析純。

2 方法

2.1 色譜條件

流動相為乙腈-水二元洗脫系統(tǒng)，采用梯度洗脫方式[1]，安捷倫 ZORBAX Eclipse XDB-C18色譜柱(4.6mm×150mm，5μm)，柱溫25℃，檢測波長為203mm，流速為0.7mL·min-1。洗脫程序見表1[3]。在上述色譜條件下，人參皂苷Rg1和人參皂苷Re的分離度大于1.5；理論塔板數(shù)按人參皂苷Rg1峰計算不低于6 000[1]。

表1 流動相洗脫程序

2.2 對照品溶液的制備

取人參皂苷Rg1、Re和Rb1標(biāo)準(zhǔn)品適量，置于5mL容量瓶中，精密稱定，加甲醇溶液溶解并稀釋至刻度線，制成濃度分別為0.311、0.381和0.451mg·mL-1的混合溶液，作為標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

將人參主根、蘆頭和參須分離，分別粉碎，過四號篩，得到粉末，各取約1g，精密稱定，用濾紙包好，置于索氏提取器中， 適量CHCl3加熱回流3min，棄去CHCl3部分，藥渣揮干，連同濾紙包轉(zhuǎn)移至100mL具塞錐形瓶中，精密加入水飽和n-Butanol溶液 50mL，密塞，放置過夜，超聲處理(功率250W，頻率50kHz)30min，濾過，棄去初濾液，用移液管移取續(xù)濾液25mL，置蒸發(fā)皿中蒸干，殘渣加甲醇溶解，并轉(zhuǎn)移至5mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得[1]。

2.4 線性關(guān)系考察

精密吸取“2.2”項下對照品溶液0.8、0.6、0.4、0.2、0.1mL，均稀釋至1mL，和原液分別注入10μL至液相色譜儀中，按照表1中色譜條件測定峰面積，取3次平均值。

以對照品進樣量(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積(mAu·min)為縱坐標(biāo)，進行線性回歸，標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1、圖2、圖3，得回歸方程為人參皂苷Rg1 :Y=477.1X+31.537，r=0.999 8；人參皂苷Re:Y=411.22X+32.236，r=0.9998；人參皂苷Rb1:Y=350.53X+41.183，r=0.999 8。

結(jié)果表明：人參皂苷Rg1進樣量在0.311 ～3.11μg、人參皂苷Re進樣量在0.381～3.81μg、人參皂苷Rb1進樣量在0.451～4.51μg范圍內(nèi)與其峰面積(mAu·min)均呈良好的線性關(guān)系。

圖1 人參皂苷Rg1對照品標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖2 人參皂苷Re對照品標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖3 人參皂苷Rb1對照品標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.5 人參皂苷Rg1、Re和Rb1的含量測定

分別取不同部位下的人參粉末(過四號篩)1g，精密稱定，按“2.3”項下制成供試品溶液，各進樣10μL，計算含量，結(jié)果詳見表2。

表2 人參不同部位中人參皂苷含量比較

3 討論

本實驗研究了傳統(tǒng)使用人參藥材中不同部位3種人參皂苷的含量，結(jié)果表明：人參參須含有較高的人參皂苷Re(0.7451%)、Rb1(0.8596%)，是由于其皮部所占比例較大[4]；而人參蘆頭亦含有較高的人參皂苷Rg1(0.4158%)。人參皂苷Rg1、Re和Rb1均具有益智、抗衰老和抗疲勞功效，人參皂苷Rg1、Re還具有防治心腦血管疾病的作用。如果能針對性地提取人參參須、蘆頭中的人參皂苷Rg1、Re和Rb1單體，應(yīng)能提高單體化合物的提取效率，更好地服務(wù)于老年病創(chuàng)新藥物的開發(fā)[5-6]。

在傳統(tǒng)中醫(yī)治療中，人參作為大補元氣、安神益智藥，可調(diào)節(jié)人體免疫力和中樞神經(jīng)系統(tǒng)；現(xiàn)代臨床應(yīng)用也很廣泛，在改善心肌缺血、缺氧和抗疲勞方面均具有確切的醫(yī)療價值[7-9]?，F(xiàn)代研究也表明，補氣藥的藥效成分與皂苷類和多糖類物質(zhì)相關(guān)[10]。此外，近期也有研究報道，人參皂苷具有預(yù)防和抗腫瘤的功效，可見，人參皂苷開發(fā)前期廣闊，本研究為進一步開發(fā)人參各部位的臨床應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)。

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(責(zé)任編輯：宋勇剛)

HPLC Determination of the Amount of Ginsenosides in Different Part ofPanaxginseng

Fu Cong
(Wuhan Hospital of Traditional Chinese Medicine, Wuhan 430014, China)

Objective:In the interest of discussing different enrichments of ginsenoside Rg1, Re and Rb1 in root, rhizoma and fibrous roots of ginseng, to insure resource of ginsenosides utilized sufficiently and offer scientific basis for expanding clinical application with various parts of ginseng. Methods:Contents of three different ginsenosides were determined by HPLC. Agilent 1200 Serious HPLC instrument with the condition of Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)chromatographic column with water-acetonitrile as mobile phase of grades; 25℃ as temperature; 203 nm as detection wavelength; 0.7 mL·min-1as velocity of flow. Results:Content of ginsenoside Re and Rb1 are upper in fibrous roots (Re 0.745 1% and Rb1 0.859 6%) of ginseng; Content of Ginsenoside Rg1 is upper in rhizoma (Rg1 0.415 8%). Conclusion:Extracting Ginsenoside Rg1, Re and Rb1 in fibrous roots and rhizoma respectively should be able to improve the extraction efficiency and provide better service to development of the innovative medicines.

PanaxginsengC.A. Mey.; Root; Fibrous Roots; Rhizoma; Ginsenoside; HPLC

2015-01-20

付聰(1988-)，男，湖北省武漢市中醫(yī)醫(yī)院藥師，研究方向為中藥質(zhì)量控制。

R284.2

A

1673-2197(2015)11-0032-02

10.11954/ytctyy.201511013