半夏炮制前后高效液相圖譜變化

周華春，周仲霞

(高郵市第三人民醫(yī)院 藥劑科，江蘇 高郵 225631)

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半夏炮制前后高效液相圖譜變化

周華春，周仲霞

(高郵市第三人民醫(yī)院 藥劑科，江蘇 高郵 225631)

目的：采用HPLC法比較半夏炮制前后藥材的化學(xué)成分，為尋找毒性成分提供依據(jù)。方法：采用HPLC法，色譜柱為VP-ODS C18(150mm×4.6mm,5μm)，流動(dòng)相以0.01%磷酸水-乙腈線性梯度(100%～50%)洗脫，流速1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)260nm，進(jìn)樣量10μL，柱溫30℃。結(jié)果：半夏炮制前后高效液相圖譜有明顯區(qū)別。結(jié)論：半夏、法半夏高效液相圖譜存在差異，可為評(píng)價(jià)半夏、法半夏的成分及質(zhì)量控制提供參考依據(jù)。

半夏；法半夏；炮制；高效液相色譜

半夏屬于天南星科半夏屬植物，入藥為塊莖，在我國(guó)長(zhǎng)江流域及東北、華北等地區(qū)分布廣泛[1]。該藥首次出現(xiàn)于《神農(nóng)本草經(jīng)》，迄今為止已有幾千年歷史。該藥物味辛且性溫，小毒，可有效消痰散結(jié)、燥濕化痰及降逆止咳?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，半夏還具有明顯的護(hù)肝、抗生育與腫瘤及促血脂下降等作用[2]，同時(shí)可用于治療冠心病，效果明顯。半夏中含有諸多化學(xué)成分，如半夏淀粉、膽堿、半夏蛋白、腺苷、胡蘿卜苷、膽堿、無機(jī)元素、草酸鈣、葡萄糖及半夏脂蛋白酶等[3-5]。生半夏炮制后會(huì)降低其毒性與刺激性，導(dǎo)致成分結(jié)構(gòu)出現(xiàn)變化，進(jìn)而降低毒性與刺激性成分含量，達(dá)到降低或消除刺激性、毒性作用。目前，臨床尚未明確其具體毒性與刺激性成分。為分析半夏炮制前后高效液相圖譜的變化，現(xiàn)采用HPLC法對(duì)其化學(xué)成分進(jìn)行分析，并為臨床研究其毒性與刺激性成分提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

采用高效液相色譜儀，型號(hào)為Agilent 1200；KQ5200型超聲清洗器；濾膜為微孔(0.54μm)；電子天平。

1.2 試劑

乙腈、甲醇為色譜純，重蒸水。

1.3 材料

生半夏(湖南中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室)；半夏干燥塊莖。

2 方法與結(jié)果

2.1 炮制法半夏

分開大小不一的半夏，浸泡于水中，待其無干心即可，凈半夏100kg。適量甘草(15kg)加水煎煮，2次，將煎液合并，用水對(duì)石灰液(生石灰10kg)予以制作，倒入合并煎液攪拌至均勻；添加半夏浸泡，攪拌(2次/天)，確保浸泡液pH大于12。當(dāng)剖面變?yōu)榫鶆螯S色且嘗后舌微麻時(shí)，取出并充分洗凈，烘干或陰干即可[6]。

2.2 樣品溶液制備

半夏藥材行干燥、粉碎處理后，過60目篩，精密稱量，取1.0g半夏于50mL錐形瓶放置，添加30%甲醇30mL，行超聲提取，持續(xù)時(shí)間30min，待冷卻后彌補(bǔ)失重重量，過濾取濾液5mL，微孔濾膜(0.45μm)過濾；萃取主要使用25mL乙酸乙酯與正丁醇，數(shù)次后濃縮為浸膏，溶解時(shí)主要添加30%甲醇，再次過濾即可。

2.3 色譜條件

色譜柱型號(hào)為VP-ODS C18，參數(shù)為：內(nèi)徑為5μm，規(guī)格為150×4.6mm；0.01%磷酸水：乙腈線性梯度洗脫從100∶0(0min)至50∶50(45min)，流速為1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)260nm，進(jìn)樣量為10μL，柱溫30℃。

2.4 精密度試驗(yàn)

檢測(cè)供試品溶液，進(jìn)樣，連續(xù)5次，測(cè)定HPLC圖譜。結(jié)果表明：該方法精密度優(yōu)良，RSD(相對(duì)保留時(shí)間)小于0.2%，RSD(相對(duì)峰面積)小于2%。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密稱量1.0g半夏粉末，依據(jù)“2.2”項(xiàng)方法制備，進(jìn)樣檢測(cè)，分別于0、4、8、12、24h開展。結(jié)果表明，試驗(yàn)穩(wěn)定性良好，RSD小于0.2%，RSD小于2%。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取5份批號(hào)相同的半夏藥材，制備供試品溶液，經(jīng)檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)該方法重復(fù)性較好，RSD小于0.2%，RSD小于2%。

2.7 測(cè)定不同類型供試品HPLC圖譜

將各供試品分別取出并進(jìn)樣，可得到HPLC譜圖。生半夏炮制后其化學(xué)成分含量與內(nèi)在成分均出現(xiàn)變化，見圖1、圖2、圖3。

圖1 半夏與法半夏30%甲醇總提液HPLC色譜

圖2 生半夏與法半夏正丁醇萃取層HPLC色譜

圖3 法半夏與生半夏乙酸乙酯萃取層HPLC色譜

3 討論

3.1 樣品處理方法考察

本研究，主要考察回流提取、超聲等方法，超聲提取樣品圖譜有較少的雜質(zhì)干擾與分離較好的色譜峰基線，且該方法易于操作，提取時(shí)間少，省時(shí)省力，值得借鑒。

3.2 色譜條件選擇

研究[7-8]認(rèn)為，半夏指紋圖譜檢測(cè)波長(zhǎng)為260nm或254nm。本研究中主要開展雙波長(zhǎng)檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)260nm有較好的色譜峰峰形及較豐富色譜信息，且分離度優(yōu)良。因此，檢測(cè)波長(zhǎng)主要選擇260nm。流動(dòng)相選擇主要對(duì)類型不一的流動(dòng)相梯度洗脫進(jìn)行考察，如0.01%磷酸水-乙腈、甲醇-水及乙腈-水，其中選擇第一種有較好的峰形。

3.3 法半夏與生半夏HPLC圖譜分析

本研究，主要采用HPLC法檢測(cè)半夏炮制前后藥材圖譜，方法重復(fù)性較好且易于操作，有利于分析半夏藥材炮制前后化學(xué)成分的改變情況。炮制在一定程度上影響藥材的成分與質(zhì)量，與中醫(yī)藥理論中半夏炮制的增效和減毒存在聯(lián)系[9]，臨床需深入研究藥材炮制后新型組分化學(xué)結(jié)構(gòu)與功效變化之間存在的關(guān)系。

[1] 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所.中藥志[M]．第2版.北京：人民衛(wèi)生出版社,1993．

[2] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[M].2010版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：110-111.

[3] 汪蕾,張繼振.天南星屬植物研究進(jìn)展[J].延邊大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版,2004,30(1):66-73.

[4] 文燕,張玉琴,屈玲,等.清半夏炮制過程中化學(xué)物質(zhì)及刺激性變化[J].中國(guó)保健營(yíng)養(yǎng):上旬刊,2013,23(3):1435.

[5] 高昌琨，吳瓊，張陸軍．半夏及炮制品對(duì)動(dòng)物黏膜刺激性比[J].安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2001，20(6)：49-50．

[6] 戎其月,伍慶,童紅,等.半夏的HPLC指紋圖譜研究[J].中國(guó)中藥雜志，2008，3(11)：1342-1343.

[7] 文燕,張明,廖志華,等.半夏藥材HPLC指紋圖譜研究[J].中藥材，2008，31(4)：503-506.

[8] 鄒菊英,陳勝璜,雷昌,等.半夏炮制前后HPLC圖譜的比較[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2010,30(9):127-129.

[9] 羅俊萍.半夏炮制解毒的研究[J].臨床合理用藥雜志,2014(29):61.

(責(zé)任編輯：李嵐春)

2014-12-21

周華春(1973-)，江蘇省高郵市第三人民醫(yī)院副主任中藥師，研究方向?yàn)橹兴幩幚砼c中藥炮制臨床應(yīng)用。

R283;R284

A

1673-2197(2015)08-0024-02

10.11954/ytctyy.201508012