虎杖降尿酸作用初步研究

閆云霞，楊中林*，蕭 偉，王振中，黃文哲

(1.中國藥科大學 現(xiàn)代中藥教育部重點實驗室，江蘇 南京 210009；2.江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司，江蘇 連云港 222001)

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虎杖降尿酸作用初步研究

閆云霞1，楊中林1*，蕭 偉2，王振中2，黃文哲2

(1.中國藥科大學 現(xiàn)代中藥教育部重點實驗室，江蘇 南京 210009；2.江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司，江蘇 連云港 222001)

目的：研究虎杖醇提液對高尿酸血癥小鼠的降尿酸作用，并初步探討其作用途徑。方法：灌胃給予小鼠不同劑量虎杖醇提液，7天后采用腹腔注射黃嘌呤和氧嗪酸鉀誘導建立小鼠高尿酸血癥模型，并對小鼠血清尿酸(SUA)、尿液尿酸(UUA)及肝臟中黃嘌呤氧化酶活性(XOD)進行檢測。結果：虎杖醇提液可顯著降低高尿酸血癥小鼠的血清尿酸水平，促進尿酸排泄，并抑制肝臟中XOD活性。結論：虎杖醇提液可通過抑制肝臟XOD活性而促進尿酸排泄，從而發(fā)揮降尿酸作用。

虎杖；降尿酸作用；黃嘌呤氧化酶

痛風是由于嘌呤代謝紊亂和(或)尿酸排泄障礙所致的一種臨床綜合征，以高尿酸血癥為主要特征。目前，對于虎杖為蓼科植物虎杖PolygonumcuspidatumSieb. et Zucc.的干燥根莖和根，味微苦，性微寒，具有利濕退黃、清熱解毒、散瘀止痛、止咳化痰的功效，可用于濕熱黃疸、風濕痹痛等證的治療。侯建平等[1-3]研究發(fā)風的治療以西藥為主，雖有一定效果，但副作用較多。近年來，越來越多的學者致力于天然藥物的開發(fā)，以期從中篩選出降尿酸活性成分。

現(xiàn)虎杖提取物可通過減少痛風性關節(jié)炎大鼠血清中前列腺素(PGE2)含量等途徑改善痛風性關節(jié)炎部位病理變化。也有研究報道[4]稱其水提物可抑制黃嘌呤氧化酶活性。本實驗通過腹腔注射氧嗪酸鉀和黃嘌呤致小鼠高尿酸血癥模型來研究虎杖醇提物的降尿酸作用及其可能的作用途徑，現(xiàn)報道如下。

1 材料與試劑

1.1 儀器

HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋(國華電器有限公司)，RE52CS-1旋轉蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)，epoch型酶標儀(BIOTEK)，80-2型電動離心機(江蘇金壇市金城國勝實驗儀器廠)，BS 124S型萬分之一天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)。

1.2 試藥

虎杖(產(chǎn)地：湖北，批號：131111，購自先聲再康江蘇藥業(yè)有限公司)，氧嗪酸鉀(Sigma，批號：STBD5759V)，黃嘌呤(Sigma，批號：SLBF7120V)，別嘌醇片(世貿(mào)天階制藥有限責任公司，批號：20140606)，痛風定膠囊(四川升和藥業(yè)股份有限公司，批號：1304104)，尿酸試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號：20141013)，XOD試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號：20141015)，考馬斯亮藍試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號：20141013)。

1.3 動物

KM小鼠，雄性，SPF級，18～22g，84只，購自上海杰思捷實驗動物有限公司。

2 實驗樣品溶液制備

2.1 虎杖醇提液制備

2.1.1 高濃度虎杖醇提液制備 稱取虎杖藥材粗粉18.00g，加11倍量70%乙醇浸泡2h后，分別以11倍、10倍、9倍量70%乙醇水浴加熱回流，時間分別為2h、1.5h、1h。合并3次提取液，濾過，減壓回收乙醇至50mL，加入1% CMC-Na溶液定容至100mL，即得濃度為0.18g·mL-1的藥液。

2.1.2 中濃度虎杖醇提液制備 稱取虎杖藥材粗粉9.00g，提取方法同上，得濃度為0.09g·mL-1的藥液。

2.1.3 低濃度虎杖醇提液制備 稱取虎杖藥材粗粉4.50g，提取方法同上，得濃度0.045g·mL-1的藥液。

2.2 陽性藥溶液配制

2.2.1 別嘌醇溶液配制 取別嘌醇片3片，稱重后置于研缽中研碎，精密稱取0.196 2g(約含別嘌醇150mg)，加0.5%CMC-Na溶液定容至100mL，即得別嘌醇濃度為1.5mg·mL-1的藥液。

2.2.2 痛風定溶液配制 精密稱取3.600 7g痛風定粉末，加0.5%CMC-Na溶液定容至100mL，即得痛風定濃度為36.0mg·mL-1的藥液。

2.3 造模劑配制

精密稱取氧嗪酸鉀和黃嘌呤適量，加入0.8%CMC-Na溶液超聲溶解，使二者終濃度分別為10mg·mL-1和5mg·mL-1。

3 方法與結果

3.1 實驗方法

將84只KM小鼠隨機分為七組，分別為空白組、模型組、別嘌醇組、痛風定組、虎杖高劑量組(HH)、虎杖中劑量組(HM)、虎杖低劑量組(HL)。于每天上午灌胃給藥，空白組小鼠給予等體積生理鹽水，模型組小鼠給予等體積0.5%CMC-Na溶液，其他各組小鼠給予相應藥液，體積劑量為20mL·kg-1。別嘌醇組、痛風定組、HH組、HM組、HL組小鼠給藥劑量分別為30.03mg·kg-1、0.72g·kg-1、3.6g·kg-1、1.8g·kg-1、0.9g·kg-1，持續(xù)給藥7天。于第7天采用腹腔注射進行造模，空白組小鼠給予等體積生理鹽水，其余各組小鼠給予造模劑，體積劑量為20mL·kg-1，造模劑量為氧嗪酸鉀200mg·kg-1、黃嘌呤100mg·kg-1。造模1h后灌胃給予小鼠相應藥物。

給藥1h后對小鼠進行眼底靜脈叢取血，約0.5mL，室溫自然凝血1h，離心分取血清(4 000rpm，10min)，按照試劑盒說明書測定各血清樣品中的尿酸濃度。取血后，將小鼠脫頸處死，迅速解剖小鼠，取適量肝臟組織，置于離心管中，加9倍量生理鹽水勻漿(10 000rpm，1min)，離心勻漿液(2 500rpm，10min)，分取上清液。按照試劑盒說明書測定肝臟組織中的XOD活性。收集小鼠造模后1h和給藥后1h的尿液，混合尿液，按照試劑盒說明書測定尿液中尿酸的排泄量。

3.2 統(tǒng)計學方法

3.3 結果

實驗結果顯示，與空白組比較，模型組小鼠血清尿酸水平明顯升高(P<0.01)，表明高尿酸血癥模型造模成功。與模型組比較，別嘌醇組及痛風定組小鼠血清尿酸濃度明顯降低(P<0.05)，肝臟XOD活性亦明顯降低(P<0.05)，表明別嘌醇及痛風定可通過抑制肝臟XOD活性而降低血清尿酸水平；與模型組比較，虎杖醇提液高、中、低劑量組小鼠血清尿酸濃度明顯降低(P<0.05)，尿酸排泄量明顯增大(P<0.01)，肝臟XOD活性明顯降低(P<0.01)，表明虎杖可通過促進尿酸排泄，抑制肝臟XOD活性而降低血清尿酸含量。

各藥物對高尿酸血癥小鼠的血清尿酸、尿酸排泄量及XOD活性影響結果見表1。

表1 各藥物對高尿酸血癥小鼠相應指標的影響 ±s)

注：Δ表示模型組與空白組比較(ΔP<0.05，ΔΔP<0.01)；*表示各給藥組與模型組比較(*P<0.05，**P<0.01)。

4 討論

以往痛風多發(fā)于歐美等發(fā)達國家，近年來，隨著經(jīng)濟的發(fā)展和社會的進步，該病在我國的發(fā)病率也逐年提高[5]。高尿酸血癥是痛風的病理基礎，因此本研究聯(lián)合應用氧嗪酸鉀和黃嘌呤誘導建立小鼠高尿酸血癥模型，其中氧嗪酸鉀為尿酸酶抑制劑，黃嘌呤為尿酸生成的前體物質(zhì)，腹腔注射后其可在增加尿酸生成的同時抑制尿酸被氧化成尿囊酸，從而升高小鼠血清尿酸水平。

本研究結果表明，虎杖高、中、低劑量醇提液均可明顯降低高尿酸血癥小鼠的血清尿酸水平，增加尿酸排泄量，降低黃嘌呤氧化酶活性。黃嘌呤氧化酶既能催化次黃嘌呤生成黃嘌呤，進而生成尿酸，又能直接催化黃嘌呤生成尿酸。而虎杖醇提物可通過抑制尿酸生成、促進尿酸排泄兩條途徑對高尿酸血癥小鼠發(fā)揮降尿酸作用。尿酸排泄過程中涉及腎小管上皮細胞上的多種轉運蛋白[6]，虎杖醇提物對其作用機制還需要進一步深入研究。

[1] 王斌,侯建平,李敏,等.虎杖提取物對模型大鼠滑膜組織黏附分子與核轉錄因子表達的影響[J].中藥新藥與臨床藥理,2008,19(6):434-437.

[2] 王斌,侯建平,李敏,等.虎杖提取物對急性痛風性關節(jié)炎大鼠血清PGE-2水平的影響[J].中國中醫(yī)基礎醫(yī)學雜志, 2008,14(12): 944-945.

[3] 侯建平.虎杖提取物對尿酸鈉致痛風性關節(jié)炎家兔滑膜組織PPAR-γ的影響[J].中藥藥理與臨床, 2010,26(5):76-79.

[4] KONG LD, CAI Y, HUANG WW,et al.Inhibition of xanthine oxidase by some Chinese medicinal plants used to treat gout[J].J Ethnopharmacol,2000,73(1):199-207.

[5] 邵繼紅,徐耀初,莫寶慶,等.痛風與高尿酸血癥的流行病學研究進展[J].疾病控制雜志,2004,8(2): 152-154.

[6] 朱立然,陳光亮.尿酸轉運蛋白研究進展[J].中國臨床藥理學與治療學,2012,17(11):1289-1294.

(責任編輯：尹晨茹)

Study on the Anti-hyperuricemia Effect ofPolygoniCuspidateRhizoma et Radix

Yan Yunxia1,Yang Zhonglin1*,Xiao Wei2,Wang Zhenzhong2,Huang Wenzhe2

(1.Key Laboratory of Modern Chinese Medicines of Ministry of Education, China Pharmaceutical University,Nanjing 210009, China;2.Jiangsu Kanion Parmaceutical Co.Ltd, Lianyungang 222001, China)

Objective:To study the effect of ethanol extract ofPolygoniCuspidateRhizoma et Radix in hyperuricemic mice and investigate its possible mechanism. Methods:Different doses of ethanol extract of Polygoni Cuspidate Rhizoma et Radix were administrated to mice for 7 days, then hyperuricemia was induced by potassium oxonate and xanthine and the serum uric acid (SUA), urinary uric acid (UUA) and the hepatic xanthine oxidase activities (XOD) were detected. Results:Three doses of ethanol extract of Polygoni Cuspidate Rhizoma et Radix can significantly reduce the level of SUA, promote uric acid excretion and inhibit the XOD in hepatic. Conclusion:Ethanol extract ofPolygoniCuspidateRhizoma et Radix can significantly reduce the level of SUA in hyperuricemic mice by promoting uric acid excretion and inhibiting the XOD in hepatic.

PolygoniCuspidateRhizoma et Radix;Anti-trioxypurine; Xanthine Oxidase

2014-12-01

閆云霞(1989-)，女，中國藥科大學碩士研究生，研究方向為抗痛風藥物。E-mail：yanyunxia16@163.com

楊中林(1950-)，女，滿族，中國藥科大學教授，研究方向為中藥新藥研發(fā)。 E-mail：yzl1950@126.com

R285.5

A

1673-2197(2015)08-0007-03

10.11954/ytctyy.201508004