枳術(shù)丸對(duì)慢傳輸型便秘大鼠的影響

賀梅娟 楊晉翔 趙晨 劉婷

慢傳輸型便秘(slow transit constipation，STC)是指結(jié)腸的傳輸功能障礙，腸內(nèi)容物傳輸緩慢所引起的頑固性便秘。其發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，目前尚缺乏深入的認(rèn)識(shí)。枳術(shù)丸是治療脾胃病的傳統(tǒng)經(jīng)方，現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)其具有促進(jìn)腸平滑肌運(yùn)動(dòng)的作用［1］，因此探討枳術(shù)丸揮發(fā)油對(duì)慢傳輸型便秘(STC)大鼠的治療作用及可能的作用機(jī)理，為臨床治療便秘提供一種新的方法。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象

8 周齡SPF 級(jí)SD 大鼠40 只，雌雄各半，體質(zhì)量190 ～210 g，由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心提供，合格證號(hào):SCXK(陜)2006-001。

1.2 主要儀器和試劑

超臨界流體萃取裝置(南通市華安超臨界萃取有限公司HA220-50-06)。特種導(dǎo)線(上海百銀線纜有限公司，醫(yī)用AF-250A/110V(AC)/7* 0.05 mm線纜)。BL-410 生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)(成都泰盟科技有限公司)。吐溫80(汕頭市西隴化工廠，批號(hào)20040708)。印度墨水(中山生物科技公司)。

1.3 實(shí)驗(yàn)藥物

枳術(shù)丸揮發(fā)油:由生白術(shù)、枳實(shí)、荷葉三味藥組成，飲片購(gòu)自同仁堂藥店，將三者按20∶10∶3混勻成枳術(shù)丸，并加工成米粒大小的顆粒，應(yīng)用超臨界CO2萃取獲得揮發(fā)油，放4℃冰箱中保存，灌胃前加1%的吐溫80 充分震蕩，混勻后加雙蒸水配置成所需濃度枳實(shí)揮發(fā)油的混懸液。枳術(shù)丸揮發(fā)油萃取條件:萃取II 壓力25 mp，溫度35℃;分離I 壓力6 mp，溫度35℃;分離II 壓力6 mp，溫度35℃。鹽酸嗎啡(10 mg/支，生產(chǎn)批號(hào):020316，沈陽(yáng)第一制藥廠)，應(yīng)用前用生理鹽水配置成濃度為1 mg/ml 的溶液。西沙必利片(5 mg/片，生產(chǎn)批號(hào):041127101，西安楊森制藥有限公司)，灌胃前將西沙必利片放入研缽中細(xì)研后配置成所需濃度的混懸液。

1.4 造模與分組

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物購(gòu)回后進(jìn)行一周適應(yīng)性喂養(yǎng)，應(yīng)用鹽酸嗎啡造模。根據(jù)完全隨機(jī)設(shè)計(jì)原理將大鼠分為四個(gè)組:每組10 只，雌雄各半，分籠飼養(yǎng)。除健康對(duì)照組外，其余3 組大鼠皮下注射鹽酸嗎啡3.5 mg/kg·d，健康對(duì)照組大鼠皮下注射等量等次生理鹽水。各組均持續(xù)45 天，建立STC 大鼠模型［2-3］。

造模成功后，除健康對(duì)照組外，將其余3 組大鼠用拉丁表法再次隨機(jī)分為3 組，枳術(shù)丸揮發(fā)油組、西沙必利組、模型對(duì)照組，枳術(shù)丸揮發(fā)油組及西沙必利組均以成人1 天用藥量按大鼠體表面積折算公式換算出大鼠每日給藥量，按體重最大的大鼠給藥3 ml確定藥液濃度，即枳術(shù)丸揮發(fā)油組予1.8 g/(kg·d)枳術(shù)丸揮發(fā)油混懸液灌胃;西沙必利組予2.9 mg/(kg·d)西沙必利混懸液灌胃;模型對(duì)照組及健康對(duì)照組均予等量等次蒸餾水灌胃，各組均持續(xù)30 天。

1.5 腸道傳輸功能測(cè)定

采用活性炭懸液推進(jìn)法測(cè)定大鼠腸道傳輸功能。用藥結(jié)束后，各組大鼠禁食24 小時(shí)，3%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉(40 mg/kg)，而后仰臥固定于手術(shù)臺(tái)上，剪去腹毛，常規(guī)消毒后縱行切開(kāi)腹部正中約2 cm，用醫(yī)用1 mL 一次性注射器經(jīng)回盲部推入印度墨水0.5 mL，測(cè)量被墨汁染色的結(jié)腸長(zhǎng)度。1小時(shí)后取出回盲部至直腸末端的全部腸道，在無(wú)張力狀態(tài)下測(cè)量腸道全長(zhǎng)及被墨汁染色的腸道長(zhǎng)度，繼而計(jì)算腸道推進(jìn)率［4-5］。

1.6 在體結(jié)腸肌電測(cè)定

參考相關(guān)文獻(xiàn)，進(jìn)行電極的制作、埋植及結(jié)腸肌電的記錄，最后將枳術(shù)丸揮發(fā)油組、模型對(duì)照組及健康對(duì)照組大鼠結(jié)腸肌電活動(dòng)的記錄結(jié)果3 分鐘作為1 個(gè)時(shí)間段，分別記錄每只大鼠每一時(shí)間段結(jié)腸肌電頻率和振幅的均值、標(biāo)準(zhǔn)差及變異系數(shù)，再取均值、標(biāo)準(zhǔn)差及變異系數(shù)進(jìn)行組間比較［6-8］。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠腸道推進(jìn)率比較

健康對(duì)照組、模型對(duì)照組、西沙必利組、枳術(shù)丸揮發(fā)油組大鼠腸道推進(jìn)率經(jīng)正態(tài)檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布(P=0.75＞0.05)，因此組間比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD 法。四組大鼠腸道推進(jìn)率比較總體不同或不完全相同(F = 12.37，P = 0.032 ＜0.05)。與健康對(duì)照組比較，模型對(duì)照組大鼠腸道推進(jìn)率減弱，兩者差異有顯著性(P ＜0.05);與模型對(duì)照組比較，枳術(shù)丸揮發(fā)油組、西沙必利組大鼠腸道推進(jìn)率增強(qiáng)，均有顯著性差異(P ＜0.05);枳術(shù)丸揮發(fā)油組與西沙必利組比較，大鼠腸道推進(jìn)率無(wú)明顯差異，見(jiàn)表1。

表1 健康對(duì)照組、模型對(duì)照組、西沙必利組、枳術(shù)丸揮發(fā)油組大鼠腸道推進(jìn)率比較(±s)

表1 健康對(duì)照組、模型對(duì)照組、西沙必利組、枳術(shù)丸揮發(fā)油組大鼠腸道推進(jìn)率比較(±s)

注:與健康對(duì)照組比較aP ＜0.05;與模型對(duì)照組比較bP ＜0.05。

組別 n 腸道推進(jìn)率(%)10 24.77 ±5.17%模型對(duì)照組 10 19.74 ±3.94% a西沙必利組 10 24.66 ±4.20% b枳術(shù)丸揮發(fā)油組 10 28.15 ±5.03%健康對(duì)照組b

2.2 各組大鼠結(jié)腸慢波頻率及振幅比較

健康對(duì)照組大鼠結(jié)腸慢波表現(xiàn)為不規(guī)則的近似正弦波樣曲線，少數(shù)有切跡，呈雙峰型，頻率為11.5 ～16.0 次/分，平均頻率最大相差1 次/分以上，振幅較整齊，平均振幅0.16 ±0.01 mv;慢波頻率變異系數(shù)為7.83±1.41%，振幅變異系數(shù)為8.08±1.25%。

與健康對(duì)照組相比，模型對(duì)照組中9 只大鼠慢波頻率明顯減慢(P ＜0.05)，平均頻率為6.02±1.10 次/分，振幅增加(P ＜0.05)，平均振幅0.43±0.05 mv，波形仍表現(xiàn)為不規(guī)則的近似正弦波樣曲線，頻率變異系數(shù)為(23.43±3.02)%，振幅變異系數(shù)為(12.27±1.51)%，與健康對(duì)照組相比均有顯著性差異(P ＜0.05)。

枳術(shù)丸揮發(fā)油組7 只大鼠結(jié)腸慢波頻率較模型對(duì)照組加快，平均頻率為9.02 ±1.15 次/分，振幅減小，平均振幅0.31 ±0.01 mv，波形仍表現(xiàn)為不規(guī)則的近似正弦波樣曲線，頻率變異系數(shù)為(15.96 ±2.95)%，振幅變異系數(shù)為(10.79 ±0.91)%，3 只大鼠結(jié)腸慢波頻率減慢，振幅強(qiáng)弱不等，波形較不穩(wěn)定，且出現(xiàn)基線位移，因樣本量小，未作分析?？觳ǖ母蓴_較大，未作分析。

模型組中另外1 只大鼠結(jié)腸慢波波形較不穩(wěn)定，且出現(xiàn)基線位移，因樣本量小，未作分析。快波的干擾較大，未作分析，見(jiàn)表2。

表2 健康對(duì)照組、模型對(duì)照組、枳術(shù)丸揮發(fā)油組大鼠結(jié)腸慢波頻率比較(±s)

表2 健康對(duì)照組、模型對(duì)照組、枳術(shù)丸揮發(fā)油組大鼠結(jié)腸慢波頻率比較(±s)

注:與健康對(duì)照組比較aP ＜0.05;與模型對(duì)照組比較bP ＜0.05。

組別 n 頻率(次/min) 頻率變異系數(shù)(%) 振幅(mv) 振幅變異系數(shù)(%)10 12.90 ±1.07 7.83 ±1.41 0.16 ±0.01 8.08 ±1.25模型對(duì)照組 9 6.02 ±1.10a 23.43 ±3.02a 0.43 ±0.05a 12.27 ±1.51a枳術(shù)丸揮發(fā)油組 7 9.02 ±1.15b 15.96 ±2.95b 0.31 ±0.01b 10.79 ±0.91健康對(duì)照組b

3 討論

枳術(shù)丸源于《金匱要略》枳術(shù)湯，張?jiān)貙㈣讓?shí)、白術(shù)的用量比改為2∶1，并將湯劑改為丸劑。方中白術(shù)補(bǔ)脾益氣，給腸腑化物傳導(dǎo)以動(dòng)力;枳實(shí)行氣寬中通腑;荷葉可以生發(fā)脾胃清陽(yáng)之氣，諸藥合用，清者升，壅濁可降可排，清升濁降相輔相承，腸腑傳導(dǎo)復(fù)常，糟粕難以為積，自然陳恙日愈?，F(xiàn)代臨床廣泛應(yīng)用于慢性胃炎［9］、消化不良［10］、糖尿病胃輕癱［11］、便秘［12］等的治療?，F(xiàn)代藥理研究也認(rèn)為枳術(shù)丸能夠促進(jìn)腸平滑肌的推進(jìn)性蠕動(dòng)［1］;此外，健脾理氣類(lèi)中藥能明顯增強(qiáng)腸平滑肌蠕動(dòng)［13］，而白術(shù)、枳實(shí)均能加強(qiáng)動(dòng)物腸平滑肌收縮，促進(jìn)腸蠕動(dòng)，具有通便作用。

近年來(lái)從臨床有效的中藥中尋找新的活性成分，探索新藥是一個(gè)大的趨勢(shì)。揮發(fā)油是白術(shù)的主要化學(xué)成分，也是枳實(shí)的主要有效成分之一，有研究表明枳實(shí)中揮發(fā)油是理氣﹑行滯的重要成分［14］，也有研究表明枳實(shí)中所含的揮發(fā)油有明顯的促進(jìn)在體小鼠胃腸推進(jìn)、增加推進(jìn)率的作用［15］。課題組據(jù)此來(lái)探討枳術(shù)丸揮發(fā)油對(duì)STC 的治療作用及可能的作用機(jī)理，為尋找治療STC 的新策略及新藥提供有價(jià)值的靶標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，STC 大鼠結(jié)腸慢波頻率、振幅及變異系數(shù)出現(xiàn)異常，這可能是導(dǎo)致結(jié)腸傳輸減慢的重要因素，而枳術(shù)丸揮發(fā)油可在一定程度上糾正STC 大鼠異常的結(jié)腸慢波，這可能是其治療STC 的機(jī)制之一，這為其用于STC 的治療提供了實(shí)驗(yàn)學(xué)的參考，希望本研究能夠拋磚引玉，使理論及臨床工作者重視枳術(shù)丸揮發(fā)油對(duì)STC 的治療作用。

［1］吳慧，趙文龍，單國(guó)順，等.生、熟白術(shù)之枳術(shù)丸對(duì)脾虛食積模型鼠作用的比較研究［J］.中成藥，2013，35(10):2093-2097.

［2］林琳，姜柳琴，張紅杰，等.結(jié)腸慢傳輸運(yùn)動(dòng)小鼠模型建立的初步探討［J］.診斷學(xué)理論與實(shí)踐，2006，5(1):31-34.

［3］許海塵，林琳，張紅杰，等.慢傳輸型便秘模型的建立及其機(jī)制探討［J］.醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào)，2004，17(6):502-506.

［4］鄭晨果，葉樂(lè)馳，金純，等.丹參枳術(shù)飲治療大鼠結(jié)腸慢傳輸型便秘的療效研究［J］.江西中醫(yī)藥，2010，41(6):76-77.

［5］范一宏，徐國(guó)萍，馮雯，等.枳術(shù)通便湯對(duì)慢傳輸型便秘大鼠結(jié)腸墨汁推進(jìn)率、GDNF 及NOS mRNA 表達(dá)的影響［J］.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2012，32(4):486-489.

［6］柴寧莉，董蕾，杜克莘，等.改進(jìn)并應(yīng)用雙電極埋植技術(shù)記錄大鼠胃腸肌電活動(dòng)［J］.西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2003，24(1):79-81.

［7］何俊堂，劉海峰，汪興偉，等.慢傳輸型便秘大鼠結(jié)腸肌電生理變化及其意義［J］.解放軍醫(yī)學(xué)雜志，2004，29(10):857-858.

［8］孫建華，郭慧，陳璐，等.電針天樞穴對(duì)慢傳輸型便秘大鼠結(jié)腸肌電的影響［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2011，26(9):2077-2079.

［9］韓長(zhǎng)月.枳術(shù)丸丹參飲并用治療慢性胃炎56 例觀察［J］.實(shí)用中醫(yī)內(nèi)科雜志，2007，21(4):47-48.

［10］路青.枳術(shù)丸聯(lián)合莫沙比利膠囊治療功能性消化不良餐后不適綜合征隨機(jī)平行對(duì)照研究［J］.實(shí)用中醫(yī)內(nèi)科雜志，2013，27(12):46-47.

［11］魏玉玲，李豫川.枳術(shù)丸治療糖尿病胃輕癱［J］.中國(guó)實(shí)用神經(jīng)疾病雜志，2009，12(17):92-93.

［12］鄭璐玉，楊玲玲，王琦.王琦教授應(yīng)用枳術(shù)丸治療功能型便秘的經(jīng)驗(yàn)探討［J］.中醫(yī)藥通報(bào)，2012，11(4):17-18.

［13］李葉，尚文璠，羅云堅(jiān)，等.調(diào)腸理氣片治療功能性便秘96 例［J］.新中醫(yī)，2005，37(3):68-68.

［14］羅小泉，楊武亮，周至明，等.中藥枳殼藥材的研究概況［J］.江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2006，18(2):45-47.

［15］李貴海，李成韶.枳殼揮發(fā)油含量對(duì)小鼠胃腸推進(jìn)的影響［J］.中藥飲片，1993，21(1):20-21.