四川省不同種質(zhì)金銀花綠原酸含量的比較

羅明華　謝天資　張盧水　等

摘要：為了為四川省引進(jìn)和培育金銀花品種提供依據(jù)，采用高效液相色譜法，比較不同品種金銀花的綠原酸含量。結(jié)果表明，從山東省引進(jìn)的九豐一號(hào)、大毛花和從河南省引進(jìn)的豫封一號(hào)的綠原酸含量分別為3.72%、3.15%、327%，從重慶市引種至四川省江油市、南江縣的渝蕾一號(hào)的綠原酸含量分別為7.12%、6.94% 它們與原產(chǎn)地沒(méi)有明顯的差異；四川省的細(xì)氈毛忍冬中的綠原酸含量高達(dá)6.83%。由此可知，九豐一號(hào)、大毛花、豫封一號(hào)、渝蕾一號(hào)為優(yōu)良的金銀花品種，適合引至四川省栽培；作為鄉(xiāng)土品種，細(xì)氈毛忍冬有很好的培育價(jià)值。

關(guān)鍵詞：四川??；金銀花；種質(zhì)；綠原酸

中圖分類號(hào)： S567.7+90.1文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號(hào)：1002-1302（2015）01-0311-02

收稿日期：2014-08-06

基金項(xiàng)目：國(guó)家大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃（編號(hào)：201310639001）；四川省科技廳應(yīng)用基礎(chǔ)研究計(jì)劃（編號(hào)：2013JY0078）；四川省生態(tài)安全與保護(hù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放基金（編號(hào)：ZDS 1008）。

作者簡(jiǎn)介：羅明華（1964—），男，四川眉山人，博士，教授，主要從事藥用植物與中藥資源的開發(fā)利用研究。E-mail：969826049@qq.com。金銀花（Flos Lonicerae）為忍冬科植物忍冬（Lonicera japonica Thunb.）的干燥花蕾，具有清熱解毒、涼散風(fēng)熱之功效，用于治療外感風(fēng)熱或溫病初起、熱毒下痢、肺熱咳嗽等[1]。在我國(guó)，作為中藥金銀花流通及使用的品種非常復(fù)雜[2-3]。四川省地處中國(guó)西南地區(qū)，為我國(guó)金銀花的主要產(chǎn)區(qū)之一，四川省南江縣的金銀花曾經(jīng)聞名全國(guó)，但經(jīng)鑒定為細(xì)氈毛忍冬[4]。2005年版和2010年版《中華人民共和國(guó)藥典》（以下簡(jiǎn)稱《藥典》）中將金銀花和山銀花作為2個(gè)品種[1，5]分別收載后，對(duì)四川省金銀花的栽培影響很大。由于主要栽培品種不是《藥典》收載品種，四川省金銀花的市場(chǎng)銷售情況并不好，導(dǎo)致價(jià)格低，栽培面積減少，于是四川省的金銀花種植企業(yè)和農(nóng)戶開始從外省引進(jìn)金銀花品種，根據(jù)筆者近2年的調(diào)查和文獻(xiàn)記載[6]可知，目前四川省既有引進(jìn)的山東省、河南省和重慶市的栽培品種，又有四川省當(dāng)?shù)伛Z化栽培的品種。近年來(lái)的化學(xué)和藥理研究結(jié)果證實(shí)，綠原酸是金銀花的主要活性成分之一[7]，因此金銀花的綠原酸含量，是判斷其質(zhì)量的重要標(biāo)志。筆者對(duì)四川省栽培的不同種質(zhì)金銀花的綠原酸含量進(jìn)行測(cè)定比較，以期為篩選出適合四川省栽培的品種提供科學(xué)依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

分別于2013年5月中下旬在山東省平邑縣、河南省封丘縣、重慶市秀山縣和四川省北川縣、江油市、南江縣等地的金銀花種植公司、金銀花專業(yè)合作社的種植基地或農(nóng)戶種植田間共收集19份栽培的種質(zhì)材料，詳見(jiàn)表1。每個(gè)種質(zhì)材料均采樣30份以上，全部采集頭茬花蕾快速烘干備用。同時(shí)采集標(biāo)本，并將所有標(biāo)本送交綿陽(yáng)師范學(xué)院羅明華教授鑒定。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1試驗(yàn)儀器與色譜條件試驗(yàn)儀器為美國(guó)Agilent 1100型高效液相色譜儀 （包括Agilent化學(xué)工作站）、十萬(wàn)分位電子天平（型號(hào)：XS205mettlerToledo）、萬(wàn)分位電子天平（型號(hào) BSA224S-CW）。色譜柱為Phenomenex C18柱（250 mm×46 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈-0.4%磷酸（體積比為13 ∶87），柱溫為25 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為327 nm。臨用前以0.45 μm 微孔濾膜過(guò)濾并經(jīng)超聲脫氣處理，流速為 1.0 mL/min，進(jìn)樣量20 μL，理論塔板數(shù)（以綠原酸計(jì)）不低于1 500。

1.2.2對(duì)照品溶液的制備精確稱取8.55 mg綠原酸對(duì)照品 （批號(hào)為110753—201314，純度以96.6%計(jì)算），以2010年版《藥典》中規(guī)定的中間濃度為依據(jù)，將綠原酸對(duì)照品在 40 mL 的容量瓶中定容，配制成0.206 5 mg/mL的綠原酸對(duì)照品溶液。

1.2.3供試品溶液的制備將每個(gè)種質(zhì)材料樣品充分混勻，取約0.5 g樣品粉末（過(guò)4號(hào)篩）置于50 mL容量瓶中，加 50 mL 50%甲醇，超聲40 min，放冷后定容、搖勻。用濾紙過(guò)濾后，取5 mL濾液，置于20 mL容量瓶中定容，用0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾。

1.2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制以中間量為20 mL的進(jìn)樣量為基準(zhǔn)，按不同進(jìn)樣量的梯度，分別設(shè)計(jì)以下幾個(gè)進(jìn)樣量：5、10、20、40、50、60 μL。以峰面積對(duì)進(jìn)樣量進(jìn)行線性回歸，回歸方程為：y=39.425x+2.354 6，其中r2=1.00，說(shuō)明綠原酸進(jìn)樣量在1.032 5～12.390 0 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

1.2.5穩(wěn)定性試驗(yàn)取配制好的綠原酸對(duì)照品溶液，每4 h進(jìn)樣1次，共進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣10 μL，RSD=1.14%（n=6）。表明本試驗(yàn)條件穩(wěn)定，綠原酸含量在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

1.2.6精密度試驗(yàn)精確吸取綠原酸對(duì)照品溶液，每次 10 μL，連續(xù)進(jìn)樣5次測(cè)定峰面積值，算得綠原酸含量的RSD為0.57%（n=5）。表明本試驗(yàn)方法精密度良好。

1.2.7加樣回收試驗(yàn)精確稱取5份已知綠原酸含量 （80250 mg/g） 的樣品，分別置于25 mL具塞錐形瓶中，準(zhǔn)確表119份金銀花種質(zhì)材料概況

樣品編號(hào)品種名采集地采集時(shí)間

加入一定量的綠原酸對(duì)照品溶液 （合0.62 mg綠原酸 ），按供試液制備方法制樣并測(cè)定、進(jìn)樣分析。

1.2.8樣品綠原酸含量的測(cè)定按上述色譜條件，精確吸取各供試樣品20 μL，依次分別進(jìn)樣（n=3），測(cè)定樣品中綠原酸的含量。

2結(jié)果與分析

2.1加樣回收測(cè)定結(jié)果

表2為加樣回收試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果。分析表明，平均回收率98.06%，RSD=1.02%。endprint

表2加樣回收試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果（n=5）

稱樣量

（g）樣品量

（mg）加入量

（mg）測(cè)得量

（mg）回收率

（%）9.230.7410.6201.34998.29.690.7880.6201.39197.48.690.7370.6201.34197.58.870.7380.6201.32697.49.500.8010.6201.38099.8

2.2樣品綠原酸含量

本試驗(yàn)比較了5個(gè)金銀花品種在原產(chǎn)地和四川省栽培后的含量，由表3可以看出，山東省的大毛花、九豐一號(hào)，河南省的豫封一號(hào)引種栽培在四川省的質(zhì)量表現(xiàn)較好，高出《藥典》規(guī)定的100%以上；沂蒙四號(hào)和雞爪花在原產(chǎn)地含量高，引種含量明顯降低，但能達(dá)到《藥典》要求（2010年版《藥典》規(guī)定金銀花中綠原酸含量不低于1.5%）。

灰氈毛忍冬是山銀花的來(lái)源品種之一，本試驗(yàn)還比較了灰氈毛忍冬及其培育的品種渝蕾一號(hào)的綠原酸含量。由表3可知，四川省栽培的灰氈毛忍冬品種，綠原酸含量明顯高出《藥典》規(guī)定；渝蕾一號(hào)是由灰氈毛忍冬培育出的品種，它們的含量高于灰氈毛忍冬；渝蕾一號(hào)引種到四川省江油市后，含量高于原產(chǎn)地；引種到四川省南江縣后，質(zhì)量表現(xiàn)較好，與原

表3各樣品綠原酸含量（n=3）

樣品編號(hào)含量

（%）RSD

（%）13.152.2423.092.8931.651.1543.142.1353.721.9763.812.1573.271.7483.311.4697.121.78107.012.28116.940.19122.720.83131.512.08146.832.03153.282.76160.832.77170.782.99183.820.87193.022.81

產(chǎn)地沒(méi)有明顯的區(qū)別。

研究還發(fā)現(xiàn)，細(xì)氈毛忍冬、灰細(xì)氈毛忍冬、淡紅忍冬、紅腺忍冬、峨眉忍冬、異毛忍冬為四川省馴化栽培的品種。其中產(chǎn)于四川省南江縣的細(xì)氈毛忍冬綠原酸含量高，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于《藥典》規(guī)定的山銀花和金銀花的標(biāo)準(zhǔn)，這與茍占平等報(bào)道的結(jié)果[4]一致；紅腺忍冬、峨眉忍冬符合《藥典》要求，而淡紅忍冬、異毛忍冬中綠原酸含量低，達(dá)不到《藥典》的規(guī)定。

3結(jié)論

四川省是我國(guó)金銀花的主要產(chǎn)區(qū)之一，四川省產(chǎn)的金銀

花習(xí)稱川銀花。四川省要發(fā)展金銀花產(chǎn)業(yè)，就要采取引進(jìn)優(yōu)良品種和培育本地品種相結(jié)合的方法。引種以選擇山東省的九豐一號(hào)、大毛花和河南省的豫封一號(hào)為宜，其優(yōu)點(diǎn)是產(chǎn)量高、有效成分含量穩(wěn)定；如果要以提取綠原酸為目的，適宜選擇渝蕾一號(hào)。此外，2010 年版《藥典》將忍冬規(guī)定為金銀花唯一的來(lái)源，將灰氈毛忍冬等置于山銀花項(xiàng)下，而未對(duì)細(xì)氈毛忍冬作任何收載。就性狀而言，灰氈毛忍冬和細(xì)氈毛忍冬很相似，特別是藥用部位的成熟花蕾很難區(qū)別，而且其綠原酸含量高，為傳統(tǒng)的川產(chǎn)金銀花的主流品種[4]，也許將其納入山銀花范圍更加合理。

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