miR-26a-5p調(diào)控MCL-1在孕產(chǎn)婦子癇前期中表達(dá)的臨床意義*

楊 瑩， 茍文麗， 谷 寅， 程 黎， 賴彩琴， 鞠葉蘭， 王晨虹△

(1廣州醫(yī)科大學(xué)深圳市婦幼保健院，廣東 深圳 518000； 2西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，陜西 西安 710000)

?

miR-26a-5p調(diào)控MCL-1在孕產(chǎn)婦子癇前期中表達(dá)的臨床意義*

楊 瑩1， 茍文麗2， 谷 寅1， 程 黎1， 賴彩琴1， 鞠葉蘭1， 王晨虹1△

(1廣州醫(yī)科大學(xué)深圳市婦幼保健院，廣東 深圳 518000；2西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，陜西 西安 710000)

目的： 探討microRNA-26a-5p(miR-26a-5p)調(diào)控髓細(xì)胞白血病因子1(myeloid cell leukemia -1，MCL-1)表達(dá)在孕產(chǎn)婦子癇前期發(fā)生發(fā)展中的臨床意義。方法: 收集正常妊娠21例、妊娠期高血壓孕產(chǎn)婦13例、輕度子癇前期15例和重度子癇前期26例共4組孕產(chǎn)婦血漿及胎盤組織，用real-time PCR分析其血漿及胎盤組織中miR-26a-5p及胎盤組織中MCL-1 mRNA的表達(dá)，Western blotting分析胎盤組織中MCL-1蛋白的表達(dá)，并分析其表達(dá)的臨床意義。結(jié)果: 隨著病情進(jìn)展，miR-26a-5p在孕產(chǎn)婦血漿和胎盤中表達(dá)逐步增高(P<0.01)，而其胎盤組織中MCL-1 mRNA的表達(dá)明顯降低(P<0.01)，二者呈明顯負(fù)相關(guān)(P<0.01)；胎盤組織中miR-26a-5p與MCL-1蛋白表達(dá)呈明顯負(fù)相關(guān)(P<0.01)。孕產(chǎn)婦血漿及胎盤組織中miR-26a-5p表達(dá)上調(diào)與孕齡、孕婦血漿白蛋白水平及胎兒體重呈明顯負(fù)相關(guān)，而與孕產(chǎn)婦血壓和尿蛋白水平呈明顯正相關(guān)(P<0.01)，胎盤組織中MCL-1表達(dá)下調(diào)與此相反。結(jié)論: miR-26a-5p高表達(dá)通過(guò)下調(diào)MCL-1的表達(dá)參與子癇前期的發(fā)生與發(fā)展。

子癇前期; 微小RNA-26a-5p; 髓細(xì)胞白血病因子1

子癇前期(preeclampsia, PE)于妊娠20周后出現(xiàn)，以新發(fā)高血壓和蛋白尿?yàn)樘卣鳎?dǎo)致全身多系統(tǒng)損害，是導(dǎo)致孕產(chǎn)婦及新生兒死亡的主要原因之一。在全世界范圍內(nèi)，PE發(fā)病率大約為5～8%[1]，發(fā)病機(jī)制至今未明。但可以確定的是，胎盤功能異常在子癇前期的發(fā)生與發(fā)展中起重要作用[2]。研究發(fā)現(xiàn)，子癇前期孕產(chǎn)婦胎盤組織中存在特異性表達(dá)的microRNA，與胎盤組織細(xì)胞的凋亡和轉(zhuǎn)錄調(diào)控有關(guān)，相關(guān)microRNA在血液中表達(dá)穩(wěn)定，易于檢測(cè)[3-5]。Mayor等[6]比較了子癇前期與正常妊娠胎盤組織中差異表達(dá)的microRNA與其差異表達(dá)的靶基因，結(jié)果顯示microRNA及其靶基因表達(dá)的變化均參與了子癇前期的發(fā)生。研究顯示miR-26a在重度子癇前期孕婦胎盤及血清中表達(dá)明顯上調(diào)[7-8]，提示其可能參與了子癇前期的發(fā)生發(fā)展，而髓細(xì)胞白血病因子1(myeloid cell leukemia-1,MCL-1)可能是miR-26a所調(diào)控的靶基因[9-10]。然而，miR-26a與其靶基因在子癇前期發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制研究報(bào)道甚少。本研究擬通過(guò)分析子癇前期孕產(chǎn)婦血清和胎盤中miR-26a-5p與其靶基因MCL-1的表達(dá)及相關(guān)性，為探索其在子癇前期發(fā)生發(fā)展中的作用提供理論依據(jù)。

材 料 和 方 法

1 患者資料、病理標(biāo)本收集

收集深圳市婦幼保健院入院分娩的正常(normal)孕產(chǎn)婦21例，平均年齡(31.8±4.4)歲；妊娠期高血壓(gestational hypertention，GH)孕產(chǎn)婦13例，平均年齡(30.4±3.6)歲;輕度子癇前期(mild preeclampsia，MPE)孕產(chǎn)婦15例，平均年齡(31.7±4.2)歲;重度子癇前期(severe preeclampsia，SPE)患者26例，平均年齡(30.8±4.0)歲。GH、MPE和SPE定義參考《婦產(chǎn)科學(xué)》第8版教材[11]。孕產(chǎn)婦患有原發(fā)性高血壓病、心臟疾患、慢性腎臟病、肝炎、糖尿病、妊娠期感染性疾病或其它妊娠期并發(fā)癥等不納入本試驗(yàn)。留取入院時(shí)孕產(chǎn)婦血漿2 mL和分娩時(shí)胎盤組織30～50 g以備檢測(cè)。統(tǒng)計(jì)其入院時(shí)孕婦年齡、孕齡、血壓、24 h尿蛋白(正常組除外)、孕產(chǎn)次、血肌酐、白蛋白、血小板數(shù)量、孕婦體重、孕婦水腫狀態(tài)、胎兒娩出時(shí)體重、多胎妊娠與否、胎兒性別等，分析各組上述指標(biāo)的差異(表 1)，并統(tǒng)計(jì)血清及胎盤組織中miR-26a-5p和MCL-1表達(dá)的相關(guān)性及與各臨床指標(biāo)的關(guān)系。

表1 4組孕產(chǎn)婦臨床病理特征及分析

2 MicroRNA及mRNA提取及real-time PCR檢測(cè)

血漿和胎盤組織總RNA提取采用TRIzol法(Invitrogen)，參考試劑說(shuō)明書進(jìn)行操作。取1 μg總RNA，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒Revert Aid First Strand cDNA Synthesis Kit(mRNA, Thermo Scientific)、Reverse Transcriptase M-MLV (RNase H)(microRNA, TaKaRa)合成cDNA，-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆?。miR-26a-5p的上游引物為5’-ATGGTTCGTGGGTTCAAGTAATCCAGGATAGGC-3’, 下游引物為5’-GCAGGGTCCGAGGTATTCG-3’；內(nèi)參照U6的上游引物為:5’-CTCGCTTCGGCAGCACA-3’，下游引物為5’-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3’；MCL-1的上游引物為5’-GCATCAGGAATGTGCTGCTGG-3’，下游引物為5’-GGTGGTGGTGGTGGTTGGTT-3’；內(nèi)參照人18S rRNA 的上游引物為5’-CCTGGATACCGCAGCTAGGA-3’，下游引物為5’-GCGGCGCAATACGAATGCCCC-3’。用ABI-ViiA 7 Detection System熒光定量PCR儀行定量分析，對(duì)miR-26a-5p循環(huán)參數(shù)設(shè)為95 ℃ 30 s；95 ℃ 3 s，60 ℃ 34 s，共44個(gè)循環(huán)。對(duì)MCL-1循環(huán)參數(shù)為95 ℃ 30 s；95℃ 3 s，60 ℃ 34 s，共45個(gè)循環(huán)。以7500 Software 2.0.6進(jìn)行擴(kuò)增和熔解曲線分析。MCL-1及miR-26a-5p相對(duì)表達(dá)量分析參考文獻(xiàn)使用2-ΔΔCt法計(jì)算[12]。

3 Western blotting 檢測(cè)

MCL-1兔抗人多克隆抗體及兔抗人GAPDH抗體購(gòu)自Cell Signaling。正常妊娠、妊娠高血壓、輕度子癇前期、重度子癇前期孕產(chǎn)婦胎盤組織總蛋白提取參考KeyGene蛋白提取試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。12%的SDS-PAGE分離蛋白，并轉(zhuǎn)印至PVDF膜(Millipore)。5%的脫脂牛奶封閉后，用兔抗- MCL-1抗體(1∶200)和兔抗-GAPDH抗體(1∶1 000)4 °C冰箱孵育過(guò)夜，次日用含0.1% 吐溫-20的PBS(PBST)室溫洗膜3～5次，每次5～10 min，然后用HRP交聯(lián)的鼠抗兔II抗(1∶3 000)室溫孵育1 h。再次以PBST洗膜3次后以ECL發(fā)光顯色液顯色，膠片夾內(nèi)曝光顯影，清洗膠片保存以備分析。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

以SPSS 16.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，miR-26a-5p、MCL-1的表達(dá)及臨床資料在不同組間比較采用單因素方差分析,率的比較采用卡方檢驗(yàn)，兩組間相關(guān)性比較采用Spearman秩相關(guān)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 孕產(chǎn)婦血漿及胎盤中miR-26a-5p的表達(dá)變化及胎盤組織中MCL-1的表達(dá)

妊娠期高血壓、輕度子癇前期和重度子癇前期是妊娠期高血壓疾病病情進(jìn)展的不同階段。通過(guò)比較SPE、MPE及GH孕產(chǎn)婦及正常孕產(chǎn)婦血漿及胎盤組織中miR-26a-5p表達(dá)變化發(fā)現(xiàn)，在SPE孕產(chǎn)婦血漿及胎盤組織中miR-26a-5p表達(dá)較MPE、GH及正常組明顯升高，且隨著病情進(jìn)展，miR-26a-5p表達(dá)無(wú)論在血漿或胎盤中表達(dá)均呈明顯上升趨勢(shì)。而MCL-1 mRNA表達(dá)在SPE孕產(chǎn)婦胎盤組織中表達(dá)較MPE、GH及正常組明顯下降，提示隨著病情加重，胎盤組織中MCL-1 mRNA表達(dá)明顯下降，見圖1。

Figure 1.The miR-26a-5p expression in plasma/placentas and mRNA expression of MCL-1 in placentas of normal, GH, MPE and SPE pregnant women.

圖1 miR-26a-5p在正常、妊娠高血壓疾病、輕度子癇、重度子癇前期孕產(chǎn)婦血漿及胎盤組織中表達(dá)及MCL-1 mRNA在4組孕產(chǎn)婦胎盤組織中的表達(dá)

2 血漿及胎盤組織中miR-26a-5p表達(dá)變化及其與胎盤組織中MCL-1 mRNA表達(dá)變化的相關(guān)性分析

通過(guò)對(duì)比正常妊娠、GH、MPE和SPE 4組孕產(chǎn)婦血漿及胎盤組織中miR-26a-5p表達(dá)變化與胎盤組織中MCL-1 mRNA表達(dá)變化的相關(guān)性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著miR-26a-5p表達(dá)的增加，MCL-1 mRNA表達(dá)呈明顯下降趨勢(shì)，血漿中miR-26a-5p與胎盤組織中MCL-1 mRNA、胎盤組織中miR-26a-5p與MCL-1 mRNA表達(dá)呈明顯負(fù)相關(guān)(P<0.01)，提示隨著血漿或胎盤組織中miR-26a-5p表達(dá)的增加，胎盤組織中MCL-1 mRNA的表達(dá)逐漸下降，表明在妊娠高血壓疾病中，miR-26a-5p至少部分是通過(guò)影響MCL-1基因表達(dá)進(jìn)而在妊娠高血壓疾病的發(fā)生發(fā)展中起作用。而分析血漿及胎盤組織中miR-26a-5p表達(dá)變化結(jié)果顯示兩者呈明顯正相關(guān)(P<0.01)，提示檢測(cè)血漿中miR-26a-5p表達(dá)的變化可以很好反映胎盤組織中miR-26a-5p表達(dá)量，見圖2。

Figure 2.The correlation analysis between miR-26a-5p expression in plasma/placentas and MCL-1 mRNA expression in placentas, and the correlation analysis of miR-26a-5p expression between plasma and placentas.

圖2 血漿及胎盤組織中miR-26a-5p與胎盤組織中MCL-1 mRNA表達(dá)的相關(guān)性，以及血漿與胎盤組織中miR-26a-5p表達(dá)的相關(guān)性分析

3 胎盤組織中miR-26a-5p、MCL-1 mRNA和蛋白表達(dá)及其相關(guān)性

各組隨機(jī)選擇5例患者進(jìn)行血漿miR-26a-5p、胎盤組織miR-26a-5p、MCL-1 mRNA及蛋白表達(dá)量分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在normal、GH、MPE和SPE組，MCL-1蛋白表達(dá)呈明顯下降趨勢(shì)，提示隨著病情進(jìn)展，MCL-1蛋白表達(dá)明顯下調(diào)；胎盤組織中miR-26a-5p表達(dá)與胎盤組織中MCL-1蛋白表達(dá)呈明顯負(fù)相關(guān)，而MCL-1的mRNA和蛋白表達(dá)呈正相關(guān)。這表明miR-26a-5p通過(guò)抑制胎盤組織中MCL-1 的mRNA生成來(lái)抑制MCL-1蛋白的產(chǎn)生，并非誘導(dǎo)MCL-1 mRNA轉(zhuǎn)錄后翻譯的抑制，進(jìn)而促進(jìn)了子癇前期的發(fā)生發(fā)展，見圖3

4 血漿及胎盤組織中miR-26a-5p及胎盤組織中MCL-1的mRNA表達(dá)與其臨床特征的相關(guān)性分析

我們分析了miR-26a-5p及MCL-1的mRNA表達(dá)變化與GH、MPE、SPE孕產(chǎn)婦孕齡、血壓、尿蛋白量、白蛋白量及胎兒體重的相關(guān)性，結(jié)果顯示，血漿及胎盤組織中miR-26a-5p的表達(dá)上調(diào)與孕產(chǎn)婦孕齡、白蛋白水平及胎兒體重呈明顯負(fù)相關(guān)(P<0.01)。而孕產(chǎn)婦胎盤及血漿中miR-26a-5p表達(dá)變化與孕產(chǎn)婦收縮壓、舒張壓及尿蛋白水平呈明顯正相關(guān)(P<0.01)；在胎盤組織中，MCL-1 mRNA的表達(dá)下調(diào)與此相反，見表2。

討 論

妊娠高血壓疾病包括妊娠期高血壓、子癇前期和子癇，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，具體機(jī)制仍不清楚。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，PE胎盤組織與正常胎盤組織相比，存在一些特異性、差異表達(dá)的microRNA，提示microRNA表達(dá)的變化參與了子癇前期的發(fā)生與發(fā)展，豐富了我們對(duì)子癇前期發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識(shí)。我們通過(guò)比較正常妊娠、GH、MPE和SPE孕產(chǎn)婦血漿及胎盤組織中miR-26a-5p及其靶基因MCL-1表達(dá)的變化，表明隨著病情進(jìn)展，miR-26a-5p表達(dá)呈明顯升高趨勢(shì)，而MCL-1 mRNA及蛋白表達(dá)呈明顯下降趨勢(shì)，二者存在明顯負(fù)相關(guān)。這提示miR-26a-5p可能通過(guò)調(diào)控胎盤組織中MCL-1基因的表達(dá)參與了子癇前期發(fā)生與發(fā)展的進(jìn)程。

Choi等[8]比對(duì)正常和子癇前期孕產(chǎn)婦胎盤組織中microRNA表達(dá)時(shí)發(fā)現(xiàn)，miR-26a在SPE孕產(chǎn)婦胎盤組織中表達(dá)較正常平均升高2.75倍，表明其可能參與了子癇前期的發(fā)生發(fā)展。成熟的miR-26a包括其miR-26a-5p和miR-26a-3p成熟片段，我們研究發(fā)現(xiàn)，在GH、MPE和SPE孕產(chǎn)婦血漿和胎盤組織中，miR-26a-5p表達(dá)呈明顯上升趨勢(shì)，尤以SPE胎盤和血漿中表達(dá)升高明顯，與Choi等[8]研究結(jié)果一致。我們比較了4組孕產(chǎn)婦胎盤組織和血漿中miR-26a-5p表達(dá)的相關(guān)性，結(jié)果顯示二者呈明顯正相關(guān)，提示血漿中microRNA表達(dá)可以很好地顯示胎盤組織中相關(guān)microRNA表達(dá)的變化，同時(shí)也表明胎盤組織中microRNAs參與了妊娠期高血壓疾病的全身性改變。那么，miR-26a-5p 調(diào)控哪些靶基因參與了子癇前期的發(fā)生和發(fā)展呢？Yang等[9]研究肝癌中miR-26a功能時(shí)發(fā)現(xiàn)，miR-26a在肝癌中表達(dá)下降，作為抑癌基因起作用，上調(diào)miR-26a能夠明顯抑制MCL-1基因表達(dá)。此外，miR-26a通過(guò)抑制MCL-1基因表達(dá)進(jìn)而抑制乳腺癌細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移[10]。而MCL-1基因表達(dá)下調(diào)還與腫瘤細(xì)胞的凋亡有關(guān)[13]。而在妊娠高血壓疾病中，隨著病情進(jìn)展，miR-26a-5p表達(dá)明顯升高，與腫瘤性疾病表達(dá)相反。是否miR-26a表達(dá)上調(diào)夠通過(guò)抑制MCL-1在妊娠高血壓疾病中也發(fā)揮重要作用呢？我們發(fā)現(xiàn)，在妊娠高血壓疾病孕產(chǎn)婦血漿及胎盤組織中，miR-26a-5p表達(dá)逐步升高，而胎盤MCL-1 mRNA及蛋白表達(dá)呈下降趨勢(shì)，二者呈明顯負(fù)相關(guān)，這就表明，miR-26a-5p高表達(dá)可能通過(guò)抑制MCL-1基因表達(dá)參與了妊娠高血壓疾病的發(fā)生與發(fā)展。研究發(fā)現(xiàn)，MCL-1存在MCL-1S和MCL-1L可變剪切體，在子癇前期孕產(chǎn)婦胎盤組織中，依賴caspase-3/7凋亡蛋白酶剪切形成死亡抑制因子MCL-1S，并向死亡促進(jìn)因子MCL-1S轉(zhuǎn)變[14]。此外，低氧-復(fù)氧誘導(dǎo)胎盤絨毛膜細(xì)胞MCL-1L可變剪切體形成，能夠阻斷其凋亡。由于生理性低氧在胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞分化中發(fā)揮重要作用，而這種低氧可誘導(dǎo)抑制細(xì)胞死亡MCL-1L剪切體的形成，表明MCL-1在胎盤功能中發(fā)揮重要作用。Kalkat等[15]研究發(fā)現(xiàn)，MCL-1通過(guò)與BECN1蛋白相互作用抑制人胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞自噬的發(fā)生，過(guò)表達(dá)MCL-1能夠減弱氧化應(yīng)激所致自噬增加效應(yīng)，由于自噬在胎盤生理性低氧過(guò)程中維持滋養(yǎng)層細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育、分化以及營(yíng)養(yǎng)供給中起重要作用[16]，因此，MCL-1表達(dá)的變化勢(shì)必引起胎盤功能障礙，誘發(fā)胎盤相關(guān)性疾病的發(fā)生。

Figure 3.The protein expression MCL-1 in normal, GH, MPE and SPE pregnant women and its correlations with the expression of miR-26a-5p and MCL-1 mRNA.

圖3 正常妊娠、妊娠期高血壓、輕度子癇前期和重度子癇前期孕產(chǎn)婦胎盤組織中MCL-1蛋白表達(dá)及其與MCL-1 mRNA和miR-26a-5p表達(dá)的相關(guān)性分析

表2 血漿和胎盤組織中miR-26a-5p和胎盤組織中MCL-1 mRNA的表達(dá)變化與孕產(chǎn)婦臨床特征的關(guān)系

此外，我們研究發(fā)現(xiàn)，miR-26a-5p高表達(dá)與育齡、孕產(chǎn)婦血清白蛋白、胎兒體重呈明顯負(fù)相關(guān)，與孕產(chǎn)婦血壓和蛋白尿呈明顯正相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，miR-26a在調(diào)控血管平滑肌細(xì)胞功能諸如細(xì)胞增殖、凋亡和表型轉(zhuǎn)換中發(fā)揮關(guān)鍵作用[17]，這就支持我們的結(jié)論，表明miR-26a-5p可能通過(guò)調(diào)控胎盤血管平滑肌細(xì)胞的功能，在子癇前期的發(fā)病中起作用。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，mmu-miR-26a等足突細(xì)胞特異性microRNA功能缺失導(dǎo)致小鼠出生2周后發(fā)生顯著蛋白尿，在出生后3周發(fā)生顯著腎小球和腎小管損傷[18]。表明miR-26a表達(dá)變化參與了腎小球足突細(xì)胞重要的功能，在腎小球?yàn)V過(guò)屏障中發(fā)揮重要作用。我們研究顯示，miR-26a-5p表達(dá)在子癇前期孕產(chǎn)婦胎盤和血漿中表達(dá)明顯升高，而與孕產(chǎn)婦蛋白尿表達(dá)呈明顯正相關(guān)，表明miR-26a-5p可能參與調(diào)控子癇前期孕產(chǎn)婦腎小球?yàn)V過(guò)膜的功能，進(jìn)而導(dǎo)致蛋白尿增多，但需要進(jìn)一步驗(yàn)證。

總之，在妊娠高血壓疾病中，隨著病情進(jìn)展，miR-26a-5p表達(dá)明顯增加，而胎盤組織中MCL-1 mRNA及蛋白表達(dá)明顯下降，兩者呈明顯負(fù)相關(guān)。miR-26a-5p及MCL-1這一組合變化與孕產(chǎn)婦血壓、低蛋白血癥、蛋白尿等呈明顯相關(guān)性，表明miR-26a-5p和MCL-1相互作用參與了妊娠高血壓疾病的發(fā)生發(fā)展。

[1] Kanasaki K, Kalluri R. The biology of preeclampsia[J]. Kidney Int, 2009, 76(8):831-837.

[2] Enquobahrie DA, Abetew DF, Sorensen TK, et al. Placental microRNA expression in pregnancies complicated by preeclampsia[J]. Am J Obstet Gynecol, 2011, 204(2):178.e12-178.e21.

[3] Pineles BL, Romero R, Montenegro D, et al. Distinct subsets of microRNAs are expressed differentially in the human placentas of patients with preeclampsia[J]. Am J Obstet Gynecol, 2007, 196(3):261.e1-261.e6.

[4] Hu Y, Li P, Hao S, et al. Differential expression of microRNAs in the placentae of Chinese patients with severe pre-eclampsia[J]. Clin Chem Lab Med, 2009, 47(8): 923-929.

[5] Hromadnikova I, Kotlabová K, Jirásek JE, et al. Detection of placenta-specific microRNAs in maternal circulation[J]. Ceska Gynekol, 2010, 75(3): 252-256.

[6] Mayor-Lynn K, Toloubeydokhti T, Cruz AC, et al. Expression profile of microRNAs and mRNAs in human placentas from pregnancies complicated by preeclampsia and preterm labor[J]. Reprod Sci, 2011, 18(1):46-56.

[7] Wu L, Zhou H, Lin H, et al. Circulating microRNAs are elevated in plasma from severe preeclamptic pregnancies[J]. Reproduction, 2012, 143(3):389-397.

[8] Choi SY, Yun J, Lee OJ, et al. MicroRNA expression profiles in placenta with severe preeclampsia using a PNA-based microarray[J]. Placenta, 2013, 34(9): 799-804.

[9] Yang X, Liang L, Zhang XF, et al. MicroRNA-26a suppresses tumor growth and metastasis of human hepatocellular carcinoma by targeting interleukin-6-Stat3 pathway[J]. Hepatology, 2013, 58(1):158-170.

[10]Gao J, Li L, Wu M, et al. MiR-26a inhibits proliferation and migration of breast cancer through repression of MCL-1[J]. PLoS One, 2013, 8(6):e65138.

[11]茍文麗，楊慧霞. 妊娠期高血壓疾病[M]// 謝 幸，茍文麗，林仲秋.婦產(chǎn)科學(xué). 第8版. 北京：人民衛(wèi)生出版社，2013:64-72.

[12]Livak KJ, Schmittgen TD. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2-ΔΔCtmethod[J]. Methods, 2001, 25(4): 402-408.

[13]朱惠明，李銀鵬，候曉華，等. 凋亡素誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞HepG2凋亡過(guò)程中Mcl-1 mRNA和蛋白水平的變化及其意義[J]. 中國(guó)病理生理雜志, 2009, 25(12):2353-2356.

[14]Soleymanlou N, Jurisicova A, Wu Y, et al. Hypoxic switch in mitochondrial myeloid cell leukemia factor-1/Mtd apoptotic rheostat contributes to human trophoblast cell death in preeclampsia[J]. Am J Pathol, 2007, 171(2):496-506.

[15]Kalkat M, Garcia J, Ebrahimi J, et al. Placental auto-phagy regulation by the BOK-MCL1 rheostat[J]. Auto-phagy, 2013, 9(12):2140-2153.

[16]Gong JS, Kim GJ. The role of autophagy in the placenta as a regulator of cell death[J]. Clin Exp Reprod Med, 2014, 41(3):97-107.

[17]Bai Y, Wang L, Sun L, et al. Circulating microRNA-26a: potential predictors and therapeutic targets for non-hypertensive intracerebral hemorrhage[J]. Med Hypotheses, 2011, 77(4):488-490.

[18]Ho J, Ng KH, Rosen S, et al. Podocyte-specific loss of functional microRNAs leads to rapid glomerular and tubular injury[J]. J Am Soc Nephrol, 2008, 19(11):2069-2075.

Clinical significance of miR-26a-5p-regulated MCL-1 expression in preeclampsia

YANG ying1, GOU Wen-li2, GU Yin1, CHENG Li1, LAI Cai-qin1, JU Ye-Lan1, WANG Chen-hong1

(1ShenzhenMaternalandChildHealthHospital,GuangzhouMedicalUniversity,Shenzhen518000,China;2TheFirstAffiliatedHospital,Xi’anJiaotongUniversityHealthScienceCenter,Xi’an710000,China.E-mail:szwangchenhong@vip.163.com)

AIM: To investigate the clinical significance of microRNA-26a-5p (miR-26a-5p)-regulated myeloid cell leukemia-1 (MCL-1) expression in the development of maternal preeclampsia. METHODS: Plasma and placental tissues were collected from 21 cases of normal pregnancy, 13 cases of maternal gestational hypertension, 15 cases of mild preeclampsia and 26 cases of severe preeclampsia. The levels of plasma and placental miR-26a-5p and placental MCL-1 mRNA were detected by real-time PCR. Western blotting analysis was used to determine the protein expression of placental MCL-1. The clinical significance of the above parameters was also analyzed. RESULTS: miR-26a-5p expression gradually increased(P<0.01) in the 4 groups of maternal plasma and placentas with the disease development, and the mRNA expression of MCL-1 was significantly reduced in the placentas (P<0.01), both showing a significant negative correlation (P<0.01). Meanwhile, the expression of miR-26a-5p and MCL-1 protein in the placental tissues was negatively correlated (P<0.01). The miR-26a-5p up-regulation in maternal plasma and placental tissues was negatively correlated with gestational age, maternal plasma albumin levels and fetal weight, while it was positively correlated with maternal blood pressure and urinary protein level (P<0.01), which was in contrary to the down-regulation of placental MCL-1. CONCLUSION: Up-regulation of miR-26a-5p is involved in the occurrence and development of preeclampsia by down-regulation of MCL-1.

Preeclampsia; MicroRNA-26a-5p; Myeloid cell leukemia-1

1000- 4718(2015)04- 0713- 06

2014- 11- 05

2014- 12- 30

深圳市科技研發(fā)資金項(xiàng)目(No. JCYJ20120821095458279)

R714.24+5

A

10.3969/j.issn.1000- 4718.2015.04.025

△通訊作者 Tel: 0755-82889999； E-mail: szwangchenhong@vip.163.com