吡喹酮抗體內(nèi)培養(yǎng)歐猬迭宮絳蟲裂頭蚴的作用與評價

黃金妹，張 強，陳澤威，邱明衛(wèi)，高雨靜，鐘賽鳳，甘秀鳳，呂 剛，蘆亞君

(海南醫(yī)學院熱帶醫(yī)學與檢驗醫(yī)學院，海南 ?？?571199)

吡喹酮抗體內(nèi)培養(yǎng)歐猬迭宮絳蟲裂頭蚴的作用與評價

黃金妹，張 強，陳澤威，邱明衛(wèi)，高雨靜，鐘賽鳳，甘秀鳳，呂 剛，蘆亞君

(海南醫(yī)學院熱帶醫(yī)學與檢驗醫(yī)學院，海南 海口 571199)

目的 探討吡喹酮經(jīng)灌胃及注射兩種方式抗SD大鼠體內(nèi)歐猬迭宮絳蟲裂頭蚴的效果。方法將50只SD大鼠每只感染5條歐猬迭宮絳蟲裂頭蚴，培養(yǎng)兩周后隨機分組進行藥物治療。灌胃治療組：使用吡喹酮藥物濃度分別為600 mg/kg、1 200 mg/kg、1 800 mg/kg及2 400 mg/kg進行灌胃治療7 d，灌腸對照組以單純植物油灌腸；注射治療組：配制30%吡喹酮注射液以注射劑量分別為0.2 ml和0.5 ml進行注射治療3 d及6 d，注射對照組以無菌生理鹽水注射。療程結束后剖殺大鼠，計算減蟲率，如大鼠體內(nèi)剩余蟲體則進行切片及HE染色。結果吡喹酮作用于大鼠體內(nèi)裂頭蚴，各用藥組減蟲率與對照組減蟲率差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，其中灌胃法以1 800 mg/kg劑量組減蟲率最高，注射法以0.5 ml 6 d組減蟲率最高。蟲體切片染色后觀察，體壁有明顯的斷裂，甚至深入基質(zhì)區(qū)。結論吡喹酮抗體內(nèi)裂頭蚴蟲體有良好的效果，其抗蟲機制可能與吡喹酮對裂頭蚴組織結構的破壞而致蟲體死亡有關。

歐猬迭宮絳蟲裂頭蚴；吡喹酮；灌胃；注射

歐猬迭宮絳蟲(Spirometra erinaceieuropaei)又稱曼氏迭宮絳蟲(Sparganum mansoni)，其中絳期幼蟲裂頭蚴可寄生在人體引起裂頭蚴病[1]。裂頭蚴病是一種嚴重威脅人類健康的疾病[2-3]，呈世界性分布，其中我國有1 000多例裂頭蚴病，分布于27個省、市和自治區(qū)[4]。

歐猬迭宮絳蟲裂頭蚴可侵犯人體多個組織和器官，如眼、皮下、腹壁、腦等[5]，蟲體能破壞組織、導致失明或癱瘓，甚至死亡[6-7]。目前裂頭蚴病治療方案主要為手術取出蟲體，對于淺表寄生部位者較為常用及有效，但對于腦部寄生或深部寄生者，如能采用有效的保守治療則更易為患者接受。本文主要探討吡喹酮藥物對SD大鼠體內(nèi)歐猬迭宮絳蟲裂頭蚴的作用，為保守治療裂頭蚴病提供實驗基礎。

1 材料與方法

1.1 歐猬迭宮絳蟲裂頭蚴 裂頭蚴蟲體采自于海南省?？谑行阌^(qū)及定安縣的野生青蛙體內(nèi)，選取體長為4～13 cm、蟲體完整、伸縮活動劇烈的裂頭蚴作為實驗對象。

1.2 實驗動物 雄性SD大鼠(體重200～220 g)購自長沙市天勤生物技術有限公司。

1.3 試劑 吡喹酮原粉購自Sigma公司，植物油、苯甲醇、乳酸乙酯、苯甲酸芐酯、叔丁基對羥基茴香醚(BHA)、二特丁基羥基甲苯(BHT)購自海南詣高儀器有限公司。

1.4 治療藥物 吡喹酮原粉溶于植物油配制不同濃度的吡喹酮-植物油溶液作為灌胃藥物；配制高濃度吡喹酮注射液即30%吡喹酮注射液[8]作為注射藥物。

1.5 實驗動物感染與治療 將50只SD大鼠隨機分為10組，每只大鼠經(jīng)口飼5條完整裂頭蚴蟲體，感染兩周后進行治療。(1)灌胃治療組：吡喹酮藥物濃度分別為600 mg/kg、1 200 mg/kg、1 800 mg/kg、2 400 mg/kg，每次灌胃2 ml，1次/d，治療7 d，灌腸對照組以單純植物油灌胃；(2)注射治療組：30%吡喹酮注射液劑量分別為0.2 ml、0.5 ml，腹腔注射2次/d、治療3 d及7 d，注射對照組以無菌生理鹽水注射。

1.6 吡喹酮藥物作用觀察 各組感染裂頭蚴的SD大鼠在治療結束后處死解剖，于體內(nèi)查找裂頭蚴，進行蟲體計數(shù)并計算減蟲率，減蟲率=(對照組蟲數(shù)-治療組蟲數(shù))/對照組蟲數(shù)×100%。如獲得裂頭蚴蟲體，則取出蟲體做切片及HE染色。

1.7 統(tǒng)計學方法 應用統(tǒng)計學軟件SPSS19.0對各組數(shù)據(jù)進行描述性分析，減蟲率的比較進行χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 吡喹酮對大鼠體內(nèi)裂頭蚴作用效果 吡喹酮-植物油溶液經(jīng)灌胃作用于受染大鼠7 d后，各用藥組減蟲率與對照組減蟲率比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，其中1 800 mg/kg劑量組減蟲率最高(96%)，600 mg/kg劑量組最低(80%)，但各用藥組間減蟲率比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，見表1。30%吡喹酮注射液經(jīng)腹腔注射作用于受染大鼠3 d和6 d后，各用藥組減蟲率與對照組減蟲率差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，其中注射0.5 ml 6 d組減蟲率最高(96%)，0.2 ml 3 d組最低(84%)，但各用藥組間減蟲率比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，見表2。?

表1 吡喹酮-植物油溶液對大鼠體內(nèi)裂頭蚴蟲體的作用效果

表1 30%吡喹酮注射液對大鼠體內(nèi)裂頭蚴蟲體的作用效果

2.2 SD大鼠死亡情況 在治療過程中，灌胃法給藥大鼠均無死亡，30%吡喹酮注射液0.2 ml劑量注射大鼠無死亡，0.5 ml劑量注射2 d后大鼠死亡1只，5 d后死亡2只，需重復實驗以補充數(shù)據(jù)。

2.3 裂頭蚴蟲體HE染色 將裂頭蚴蟲體切片及HE染色，光學顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，裂頭蚴蟲體經(jīng)吡喹酮作用后，有明顯的體壁皮層斷裂(見圖1A、1B)，斷裂處甚至深入基質(zhì)區(qū)(見圖1C)。

圖1 裂頭蚴蟲體HE染色標本

3 討論

吡喹酮是一種高效、低毒的抗血吸蟲病首選藥物[9]，而其對裂頭蚴的作用研究尚少[10-11]。目前裂頭蚴病的治療以手術方法居多，術中取蟲務必保證蟲體完整取出方能根治，對于裂頭蚴寄生人體深部不便手術的患者，可用40%酒精與2%普魯卡因局部封閉殺蟲[12]，但效果不佳。

本文探討吡喹酮作用于體內(nèi)裂頭蚴的效果，腹腔注射30%吡喹酮注射液及灌胃法減蟲率均達到80%以上。本實驗用高濃度吡喹酮注射液最大劑量為0.5 ml，藥量遠低于吡喹酮對大鼠腹腔注射的LD50(LD50=0.8 g/kg)[13]，但仍有少數(shù)大鼠死亡，可見吡喹酮注射液對實驗動物毒性作用大于灌胃法，口服吡喹酮藥物安全性要高于注射用藥。

經(jīng)藥物作用后獲得的裂頭蚴切片染后發(fā)現(xiàn)，蟲體體壁有明顯的斷裂，斷裂較深處則深入基質(zhì)區(qū)，表明吡喹酮對裂頭蚴蟲體毒性作用可能是對體壁損傷、改變細胞通透性，影響生理功能、代謝吸收而致蟲體死亡[14-15]；吡喹酮抗裂頭蚴的分子機制尚不明了，需進一步實驗研究闡明。

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Effect and evaluation of praziquantel on Sparganum erinaceieuropaei in vivo.

HUANG Jin-mei,ZHANG Qiang, CHEN Ze-wei,QIU Ming-wei,GAO Yu-jing,ZHONG Sai-feng,GAN Xiu-feng,LV Gang,LU Ya-jun.Tropical and Laboratory Medical College,Hainan Medical University,Haikou 571199,Hainan CHINA

ObjectiveTo explore the effect of praziquantel onSparganum erinaceieuropaeiin SD rats by gastric perfusion and injection.MethodsFifty SD rats were selected and infected with five plerocercoids each.After two weeks,the 50 SD rats were randomly divided into 10 groups for drug treatment:perfusion treatment groups with the concentrations of praziquantel of 600 mg/kg,1 200 mg/kg,1 800 mg/kg,2 400 mg/kg,0 mg/kg(vegetable oil instead,the perfusion control group)for 7 d;injection treatment groups with 30%praziquantel of 0.2 ml,0.5 ml for 3 d and 6 d,normal saline(the injection control group).After the treatment,rats were sacrificed.The reduction rate of plerocercoid was calculated.The remaining plerocercoid in rat was sliced and stained by HE.ResultsThe reduction rate showed statistically significant difference in the treatment group and the corresponding control groups(P＜0.05).The reduction rate of 1 800 mg/kg group was the highest in perfusion treatment groups.The reduction rate of 0.5 ml for 6 d group was the highest in injection treatment groups.The plerocercoid was stained and the body wall has obvious fracture,even deep into matrix area.ConclusionThe effect of praziquantel on plerocercoid is significant.The mechanism may be related to that praziquantel causes damage in organizational structure of plerocercoid and then thus results in death.

Sparganum erinaceieuropaei;Praziquantel;Gastric perfusion;Injection

R-332

A

1003—6350（2015）10—1409—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.10.0505

2014-12-05)

國家級創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓練計劃項目(編號：201211810057)

蘆亞君。E-mail：luyajuncc@163.com