針?biāo)幒嫌脤?duì)神經(jīng)性耳鳴的臨床療效及作用機(jī)理研究

鄒春花，畢言萍，亓秀英，鄒連琦

(泰山醫(yī)學(xué)院附屬萊蕪醫(yī)院，山東萊蕪271199)

針?biāo)幒嫌脤?duì)神經(jīng)性耳鳴的臨床療效及作用機(jī)理研究

鄒春花，畢言萍，亓秀英，鄒連琦

(泰山醫(yī)學(xué)院附屬萊蕪醫(yī)院，山東萊蕪271199)

目的:探討聰耳通竅湯加針刺治療神經(jīng)性耳鳴的臨床療效及作用機(jī)制。方法:選擇我院耳鼻喉科、五官科神經(jīng)性耳鳴患者93例，按隨機(jī)數(shù)字表法分為針刺組(31例)、聰耳通竅湯組(31例)及針?biāo)幒嫌媒M(31例)，3組均治療3個(gè)療程，每個(gè)療程為10 d，觀察治療前后患者血液中5-HT及Rho/ROCK信號(hào)通路的變化。結(jié)果:3個(gè)療程后對(duì)患者治療前后進(jìn)行比較，針刺組有效率71%，中藥復(fù)方組55%，針?biāo)幒嫌媒M87.1%，其中針?biāo)幒嫌媒M相對(duì)于其他2組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;通過(guò)HPLC檢測(cè)患者血液中5-HT發(fā)現(xiàn)，治療后相對(duì)于治療前差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，western blot檢測(cè)Rho/ROCK信號(hào)通路發(fā)現(xiàn)，治療后患者ROCK蛋白明顯下降。結(jié)論:針?biāo)幒嫌弥委熒窠?jīng)性耳鳴差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其治療效果可能與抑制5-HT/Rho/ROCK信號(hào)通路有關(guān)。

針刺;聰耳通竅湯;神經(jīng)性耳鳴;5羥色胺;Rho/ROCK

耳鳴(Tinnitus)是指患者在外界無(wú)聲源而自覺感到耳中鳴響的一種疾病，其發(fā)病可能由于耳部及相鄰的組織發(fā)生病變或全身病變引起［1］。神經(jīng)性耳鳴的病因復(fù)雜，機(jī)制尚不很明確，有研究報(bào)道與5羥色胺(5-HT)的升高有關(guān)［2］。我院耳鼻喉科近年來(lái)采用針灸合用中藥復(fù)方聰耳通竅湯治療神經(jīng)性耳鳴，取得了一定效果。本文通過(guò)我院在2010年至2013年收治的93例神經(jīng)性耳鳴患者進(jìn)行針?biāo)幒嫌弥委?，效果滿意，現(xiàn)就其針?biāo)幗Y(jié)合治療效果及作用機(jī)制進(jìn)行探討。

1 臨床資料

1.1 一般資料

表1顯示，選取2010年8月至2013年1月來(lái)我院耳鼻喉科、五官科的93例病人按隨機(jī)數(shù)字表法分為3組。針刺組31例，聰耳通竅湯組31例，針?biāo)幗Y(jié)合治療組31例。上述各組患者經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)(主要為卡方檢驗(yàn)與t檢驗(yàn))分析性別、年齡、耳鳴時(shí)發(fā)生的耳數(shù)以及患病時(shí)間長(zhǎng)短、幻聽響度等方面比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。

表1 3組病例一般資料比較

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)［3］

參照衛(wèi)生部制定的《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》以及2005年田道法主編的新世紀(jì)規(guī)劃教材《中西醫(yī)結(jié)合耳鼻喉科學(xué)》中的診斷標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。按照《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》的診斷標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。

2 治療方法

2.1 針刺治療組

針刺組選穴及操作［4］:取穴選擇在患者耳鳴患側(cè)部位的聽會(huì)、聽宮、耳門、雙側(cè)太溪、風(fēng)池、太沖穴。采用0.25 mm×15 mm毫針針刺上述各穴，以平補(bǔ)平瀉手法得氣為度，留針30 min，留針期間每間隔5 min行針1次。每日1次，10次1個(gè)療程，治療3個(gè)療程。

2.2 聰耳通竅湯組［5］

自擬聰耳通竅湯加減:赤芍15 g，丹參15 g，路路通12 g，茯苓15 g，溫郁金15 g，升麻4 g，柴胡6 g，甘草10 g。水煎3次，分3次服用，10劑為1個(gè)療程，治療3個(gè)療程。

2.3 針?biāo)幒嫌媒M

針?biāo)幒嫌媒M取穴選擇在患者耳鳴患側(cè)部位的聽會(huì)、聽宮、耳門、雙側(cè)太溪、風(fēng)池、太沖穴。針刺方法與2.1項(xiàng)相同。在行針后，服用聰耳通竅湯加減方。行針和服用中藥復(fù)方分先后進(jìn)行，治療3個(gè)療程。

3 臨床療效評(píng)價(jià)

治療效果的判定標(biāo)準(zhǔn)［6］:臨床痊愈:患者耳鳴癥狀消失，聽力功能恢復(fù)正常狀態(tài)，治療結(jié)束后隨訪3個(gè)月耳鳴癥狀未復(fù)發(fā);顯效:聽力功能恢復(fù)明顯甚至無(wú)障礙，出現(xiàn)的幻聽現(xiàn)象不會(huì)影響工作和休息;有效:聽力功能有所恢復(fù)，偶有從嘈雜環(huán)境中到安靜環(huán)境中出現(xiàn);或由持續(xù)性發(fā)作轉(zhuǎn)為間歇性發(fā)作;無(wú)效:不自主的幻聽耳鳴無(wú)改善甚至加重者，聽力功能沒(méi)有改善甚至加重。

4 作用機(jī)理研究

4.1 治療前后5-HT的比較

采用微柱液相色譜電化學(xué)檢測(cè)(microbore HPLC-ECD)法測(cè)定所有患者在治療前后血液中5-HT含量。

4.2RhoA/Rock信號(hào)通路檢測(cè)

檢驗(yàn)血漿RhoA以及Rock蛋白質(zhì)樣品加入1/4倍量5×SDS上樣緩沖液進(jìn)行混勻，10%SDSPAGE115V進(jìn)行電泳，210 mA恒流1.5 h濕轉(zhuǎn)至硝酸纖維膜(NC膜)上。5%脫脂奶粉TBST緩沖液室溫封閉3 h，加抗RhoA、ROCK單抗(鼠抗人1∶500)。TBST洗膜3次，然后與結(jié)合辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG(1∶5000)室溫孵育1 h，最后采用發(fā)光試劑盒ECL反應(yīng)，X膠片曝光顯影。

5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

6 結(jié)果

6.1 治療效果比較

表1顯示，我們發(fā)現(xiàn)患者在治療3個(gè)療程后，總有效率的大小順序是:針?biāo)幗Y(jié)合組＞針刺組＞聰耳通竅湯組。通過(guò)χ2檢驗(yàn)顯示，針?biāo)幒嫌媒M同針刺組、中藥復(fù)方組比較χ2分別為5.32和13.57，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，說(shuō)明針?biāo)幗Y(jié)合確實(shí)具有明顯優(yōu)勢(shì)，尤其是相對(duì)于中藥復(fù)方組的治療效果，取得的優(yōu)勢(shì)更為明顯。

表2 3組患者治療效果比較

6.2 針?biāo)幗Y(jié)合組與患者病程和聽力的關(guān)系

表2、3顯示，我們發(fā)現(xiàn)針?biāo)幒嫌媒M的治療效果與治療神經(jīng)性耳鳴患者的病程成正比的關(guān)系，即患者患病的時(shí)間越短，其治愈的可能性就越高。通過(guò)比較我們發(fā)現(xiàn)，病程在前3個(gè)月發(fā)現(xiàn)的患者，及時(shí)就醫(yī)其治愈率較高，而病程超過(guò)6個(gè)月以上患者，其治愈的可能性較低。可以得出的結(jié)果是，接受針?biāo)幗Y(jié)合的患者大多能都能恢復(fù)正常聽力。

表3 針?biāo)幗Y(jié)合與患者發(fā)病程度之間關(guān)系

表4 針?biāo)幗Y(jié)合于患者聽力恢復(fù)程度之間的關(guān)系

6.3 治療前后患者血液中5-HT含量變化

表4顯示，3組中所有患者血液經(jīng)HPLC檢測(cè)，5-HT的含量均升高;通過(guò)治療后，血液中的5-HT含量與治療前呈明顯下降趨勢(shì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);而針?biāo)幒嫌媒M與針刺組、中藥復(fù)方組這一作用趨勢(shì)更為明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

6.4 蛋免疫印跡法(western blot)對(duì)RhoA/ Rock信號(hào)通路的檢測(cè)

表5圖1顯示，我們?cè)趶氖屡R床時(shí)經(jīng)患者簽字同意后取血，采用western blot檢驗(yàn)患者血漿中RhoA、Rock 2種蛋白的變化。以還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)作為參照，測(cè)定患者治療前后血漿中RhoA、Rock蛋白的變化。結(jié)果顯示，RhoA在治療前后沒(méi)有明顯變化，而Rock蛋白治療前與治療后有明顯變化，治療后3組Rock蛋白均有明顯的下降趨勢(shì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);而針?biāo)幒嫌媒M同前2組的這一作用更為明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

圖1

表5 治療前后患者血液中5-HT含量變化

表6 治療前后各組ROCK含量(灰度比)變化

7 討論

近年來(lái)，耳鳴的發(fā)病率比較高，主要是周圍環(huán)境的變化所致，該病在成年人中約占2%～5%，而在年齡超過(guò)55歲的人群中則高達(dá)20%～30%［7］。大約超過(guò)一半的人在一生中曾經(jīng)有過(guò)耳鳴的癥狀，但其癥狀程度較輕，不會(huì)影響睡眠及正常生活和工作。目前，在耳鼻喉科以耳鳴為主訴的病人約占門診的10%～20%［8］。耳鳴嚴(yán)重時(shí)嚴(yán)重影響患者的工作、生活，尤其是在睡眠時(shí)不自覺的耳鳴極易造成失眠，使生活和工作質(zhì)量受到負(fù)面影響。西醫(yī)認(rèn)為神經(jīng)性耳鳴主要是由于患者聽力功能減退、內(nèi)耳微循環(huán)障礙，如缺血缺氧及神經(jīng)傳導(dǎo)相關(guān)通路發(fā)生病變等原因引起9］。有研究顯示，血管袢壓迫或神經(jīng)發(fā)生脫髓鞘病變是導(dǎo)致神經(jīng)性耳鳴的主要原因，失髓鞘可以使神經(jīng)纖維絕緣性下降，從而常伴隨神經(jīng)纖維的電生理改變，動(dòng)作電位從一條神經(jīng)纖維傳至另一條或者多條，產(chǎn)生聽神經(jīng)沖動(dòng)的泛化現(xiàn)象，電生理的改變導(dǎo)致患者耳內(nèi)產(chǎn)生高低不一、強(qiáng)弱有別的鳴響［10］。5-HT是經(jīng)典神經(jīng)遞質(zhì)之一，對(duì)機(jī)體的許多生理功能起重要作用，如感覺通路的調(diào)控，尤其對(duì)聽覺信息的過(guò)濾、幻覺的覺察、睡眠和清醒周期的調(diào)節(jié)等［11］。許多學(xué)者包括臨床研究神經(jīng)性耳鳴者都發(fā)現(xiàn)，患者血液中5-HT呈明顯升高趨勢(shì)［12］。我們?cè)谂R床上已證實(shí)，針灸加中藥復(fù)方治療神經(jīng)性耳鳴具有明顯的效果，尤其在聽力恢復(fù)、幻覺消失等方面效果更為明顯。為此，我們進(jìn)一步研究針灸加藥物治療神經(jīng)性耳鳴的作用機(jī)制。大量研究顯示，RhoA/ Rock信號(hào)通路受到5-HT的升高而被激活，RhoA/ Rock信號(hào)通路的激活將引起機(jī)體的較多病變，如高血壓、神經(jīng)性病變以及血管方面的病變［13］。故我們制取患者血漿，采用western blot檢測(cè)血漿中RhoA、Rock 2種蛋白的變化，研究結(jié)果與目前的報(bào)道相一致。筆者認(rèn)為，神經(jīng)性耳鳴的發(fā)病機(jī)制可能是由于患者機(jī)體內(nèi)5-HT的升高進(jìn)而激活RhoA/Rock信號(hào)通路，從而使患者產(chǎn)生幻覺、聽力功能障礙等。

中醫(yī)認(rèn)為，耳鳴的發(fā)病機(jī)制主要是患者因外有風(fēng)熱上感、客邪蒙竅;另因患者體內(nèi)有痰熱、肝熱、蒸動(dòng)濁氣上壅而阻竅等原因所致。綜上，由于患者多因氣滯血瘀、精氣不足易引起耳鳴耳聾［14］。《靈樞·口問(wèn)》曰:“耳者，宗脈之所聚也，故胃中空則宗脈虛，虛則下溜，脈有所竭，故耳鳴。”有報(bào)道指出［15］，針刺耳周穴可以改善微循環(huán)，促進(jìn)血液與迷路之間的物質(zhì)交換，使尚未完全壞死的內(nèi)耳細(xì)胞及聽神經(jīng)得到修復(fù)與再生。聽宮、聽會(huì)、耳門、風(fēng)池、雙側(cè)太溪、太沖穴分別是手足少陽(yáng)經(jīng)和手太陽(yáng)經(jīng)的穴位。手足少陽(yáng)經(jīng)兩經(jīng)經(jīng)脈均繞行于耳之前后，手太陽(yáng)經(jīng)“卻入耳中”。腎俞為腎之背俞穴，“腎開竅于耳”，以上穴位均為治療耳疾的要穴。筆者在耳周穴位通過(guò)懸灸、點(diǎn)刺等手法進(jìn)行“補(bǔ)”和“瀉”［16］。聰耳通竅湯以柴胡、郁金、丹參、赤芍、茯苓、葛根、升麻為組方，該方具有行氣活血補(bǔ)血、通竅除濕的功效，能夠達(dá)到減輕甚至消除耳鳴的效果。通過(guò)研究筆者發(fā)現(xiàn)，針刺聯(lián)合聰耳通竅湯在治療神經(jīng)性耳鳴方面具有一定的效果，而且在我們隨訪中患者復(fù)發(fā)的可能性比西藥小很多。故此我們認(rèn)為，針?biāo)幒嫌弥委熒窠?jīng)性耳鳴可能與5-HT/RhoA/Rock信號(hào)通路有關(guān)。

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Clinical Efficacy and Mechanism on Acupuncture Therapy Added Conventional Parmacotherapy in the Treatment of Tinnitus

ZOU Chun-hua，BI Yan-ping，QI Xiu-ying，ZOU Lian-qi
(Laiwu affiliated Hospital of Taishan Medical College，Shandong，Laiwu 271199，China)

Objective:To investigate the clinical efficacy and mechanism of Conger Tongqiao decoction added acupuncture in the treatment of neurological tinnitus.Methods:To choose ENT，ENT tinnitus patients，93 patients were randomly divided into the acupuncture group(31 cases)，Conger Tongqiao decoction group(31 cases)and needle-drug combination group(31 cases)，the three groups were treated for three courses，each course is ten days，and to observe the patient's blood before and after treatment in serotonin(5-HT)and changes of Rho/ROCK signaling pathway.Results: After three courses of patients before and after treatment were compared，the effective rate of acupuncture was 71%，traditional Chinese medicine group was 55%，needle-drug combination group was 87.1%，Where the needle drug combination group relative to the other two groups had significant difference;Patients'blood by HPLC detection of 5-HT found that after treatment with a very significant difference relative to pre-treatment，western blot detection of Rho/ROCK signaling pathway.It was found that after treatment the patient ROCK protein was significantly decreased by the detection of Rho/ROCK.Conclusion:The treatment on Acupuncture combined Conger Tongqiao Decoction of tinnitus had a very significant difference，its therapeutic effect is related to the inhibition of 5-HT/Rho/ROCK signaling pathway.

Acupuncture;Conger Tongqiao Decoction;nervous tinnitus;serotonin;Rho/ROCK

R764.45

:A

:1006-3250(2015)05-0581-03

2015-01-19

鄒春花(1968-)，女，醫(yī)學(xué)本科，從事耳鼻喉科的臨床與研究。