老齡大鼠尿量、離子濃度及皮質(zhì)醇的變化?

吳君，韓蕓，梁偉玲，荊雪寧，黃萍

(1.山東中醫(yī)藥高等專科學(xué)校，山東煙臺264199;2.濱州醫(yī)學(xué)院，山東煙臺264003; 3.廣州中醫(yī)藥大學(xué)，廣州510006)

老齡大鼠尿量、離子濃度及皮質(zhì)醇的變化?

吳君1，韓蕓2，梁偉玲1，荊雪寧1，黃萍3△

(1.山東中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，山東煙臺264199;2.濱州醫(yī)學(xué)院，山東煙臺264003; 3.廣州中醫(yī)藥大學(xué)，廣州510006)

目的:觀察老齡大鼠24 h及水負(fù)荷后5 h尿量、尿中Na+、K+、Cl-濃度及血清皮質(zhì)醇(Cort)含量的變化，研究腎虛多尿模型。方法:老年大鼠20只，青年大鼠20只，用代謝籠法測24 h尿量及水負(fù)荷5 h尿量，用生化分析儀測尿液中Na+、K+、Cl-濃度，采用ELISA測血中Cort的含量。結(jié)果:老齡大鼠5 h、24 h尿量明顯增多，尿液中Na+、Cl-濃度明顯增加，K+濃度明顯降低，血清中Cort的含量明顯降低。結(jié)論:老齡大鼠尿量增多，且Na+、K+及Cl-排泄異常，血清中Cort的含量明顯降低，表明其可作為腎虛多尿模型進(jìn)行試驗(yàn)研究。

老齡大鼠;尿量;離子濃度;皮質(zhì)醇;

人口老齡化是當(dāng)今世界大多數(shù)國家面臨的共同問題，我國是老齡化發(fā)展最快的國家之一，無論男性女性，其老齡進(jìn)程均與膀胱功能的顯著改變和臨床癥狀有關(guān)［1］。老年人排尿功能障礙也是由于各臟腑功能的失常及其各臟腑間的失調(diào)所致，但其中最主要的一個原因是膀胱失約，在病理情況下，如開合失調(diào)則可以引起“膀胱不利為癃，不約為遺溺”(《素問·宣明五氣》)。因此，膀胱的病理表現(xiàn)主要是排尿異常，除膀胱直接感受濕熱外邪等，多由腎病所累及。腎氣充足，能溫煦膀胱，固攝有權(quán)，膀胱開闔有度，以維持水液的正常代謝。本課題選用老齡大鼠作為研究對象，探討其是否可以作為“腎虛多尿”的動物模型來驗(yàn)證藥物“補(bǔ)腎縮尿”的功效。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動物及飼養(yǎng)條件

SD大鼠(3月齡)SPF級，雌雄各半，體質(zhì)量160～180 g，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供(許可證號SCXK(粵)2008-0020，合格證號0065097)。20月齡SD老齡大鼠SPF級，由成都達(dá)碩動物中心提供(許可證號SCXK(川)2008-24，合格證號0022687，動物實(shí)驗(yàn)設(shè)施使用證明號0043550及0032584)。飼養(yǎng)條件:溫度(24±2)℃，濕度50%～70%，采用12 h∶12 h晝夜間斷照明;每天添加飼料1次，換水2次，更換墊料2次;動物自由進(jìn)食、飲水。

1.2 試劑與儀器

酶標(biāo)儀:RT-2100C，美國RAYTO公司產(chǎn)品;日立7180型生化分析儀:日本日立公司產(chǎn)品; JA1203N型電子天平:上海精密儀器有限公司產(chǎn)品; TD25-WS多管架自動平衡離心機(jī):賽特湘儀離心機(jī)儀器有限公司產(chǎn)品;三用電熱恒溫水浴箱，上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠;JA1203N型電子天平:上海精密儀器有限公司產(chǎn)品。

2 方法

2.1 實(shí)驗(yàn)分組

取老年大鼠(20月齡)20只，青年大鼠(3月齡)20只，設(shè)置空白對照組20只，模型對照組20只。適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d，每天觀察并記錄動物的一般情況，包括活動、外觀形態(tài)、毛色光澤、精神狀態(tài)等變化。

2.224 h尿量及水負(fù)荷后5 h尿量

2組動物置于代謝籠中，禁食不禁水18 h后，留取24 h尿液測定尿量(放入和拿出前輕壓大鼠下腹部排盡余尿)。根據(jù)大鼠體質(zhì)量灌胃，各組均以3 mL/100 g的生理鹽水做水負(fù)荷，然后按其下腹部排盡尿液，放入代謝籠內(nèi)，收集5 h內(nèi)尿量。

2.3 尿Na+、K+、Cl-濃度

將24 h總尿量收集的尿液取2 mL分裝于試管中，用生化分析儀測定尿液中Na+、K+、Cl-濃度。保持實(shí)驗(yàn)室溫度、濕度，盡量減少尿液揮發(fā)。

2.4 血清Cort的測定

收集尿液結(jié)束后，乙醚麻醉，大鼠眼眶靜脈叢取血3 mL，置離心機(jī)中以4000 r/min離心10 min，取血清置-20℃冰箱備用。檢測方法按照試劑盒操作說明進(jìn)行。

3 結(jié)果

3.1 一般癥狀

老齡大鼠與空白對照組比較，出現(xiàn)倦臥、嗜睡懶動、行動遲緩、反應(yīng)遲鈍、毛發(fā)發(fā)黃無光、目光晦暗、精神不振等外部癥狀。

3.2 老齡大鼠5 h和24 h尿量變化

結(jié)果提示，與空白組比較，老齡大鼠5 h、24 h尿量明顯增多(P＜0.05)。

表1 老齡大鼠5 h和24 h尿量變化(±s)

表1 老齡大鼠5 h和24 h尿量變化(±s)

注:與空白組比較:#P＜0.05;與空白組比較:##P＜0.01(下同)

組別鼠數(shù)5 h尿量(mL/100 g)24 h尿量(mL/100 g) 200.83±0.324.23±1.16模型組201.53±0.45#6.4±1.63空白組#

3.3 老齡大鼠尿中Na+、K+、Cl-濃度的變化

結(jié)果提示，與空白組比較，老齡大鼠尿液中Na+、Cl-濃度明顯增加(P＜0.05～0.01)，K+濃度明顯降低(P＜0.05)。

表2 老齡大鼠尿中Na+、K+、Cl－濃度變化(±s)

表2 老齡大鼠尿中Na+、K+、Cl－濃度變化(±s)

組別鼠數(shù)Na+(mmol/L)Cl-(mmol/L)K+(mmol/L) 2023.05±6.7570.28±29.8449.54±11.76模型組2026.74±11.21﹟94.34±32.47﹟﹟33.48±11.87空白組﹟

3.4 老齡大鼠血清Cort含量變化

結(jié)果提示，與空白組比較，老齡大鼠血清中Cort含量明顯降低(P＜0.05)。

表3 老齡大鼠血清中Cort含量影響(±s)

表3 老齡大鼠血清中Cort含量影響(±s)

組別鼠數(shù)Cort含量(ng/mL) 20347.57±75.23模型組20242.193±51.23空白組﹟

4 討論

隨著老齡化的發(fā)展，尿頻、尿急、夜尿增加等下尿路癥狀正逐漸成為影響老年人生活質(zhì)量的主要原因之一。中醫(yī)學(xué)指出，腎為先天之本，腎虛是衰老的根本原因之一。衰老是體內(nèi)精氣變化至一定階段時(shí)出現(xiàn)的必然現(xiàn)象，腎中精氣的盛衰決定著衰老的速度。腎虛證實(shí)為未老先衰，而衰老就是生理性腎虛，在進(jìn)行腎陽虛的研究時(shí)可將老齡作為相應(yīng)的研究對象［2］。很多臨床觀察以及相關(guān)報(bào)道也都傾向于陽虛，特別是腎陽虛是衰老之本的結(jié)論，而且表明腎陽虛的病理基礎(chǔ)是下丘腦-垂體-靶腺軸功能下降。劉國林［3］對自然衰老大鼠進(jìn)行觀察及實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明自然衰老雄性健康SD大鼠具有腎陽虛的實(shí)質(zhì)，能夠作為腎陽虛動物模型來應(yīng)用。此外據(jù)臨床報(bào)道，年老時(shí)人的神經(jīng)-內(nèi)分泌和免疫機(jī)能下降，這與腎陽虛衰的病人極為相似，自然衰老雖不一定具有腎陽虛衰的表象，卻具有腎陽虛的內(nèi)涵，因此人們常將自然衰老動物作為腎陽虛動物模型［4］。

皮質(zhì)醇是腎上腺皮質(zhì)分泌的主要激素之一，是機(jī)體神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)為重要的一環(huán)，其含量占血中17-羥類固醇總量的4/5，亦是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究神經(jīng)內(nèi)分泌生理病理變化的重要指標(biāo)，也是研究腎理論的重要手段［5］。腎臟通過對Na+、K+及Cl-的排泄調(diào)節(jié)來維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài)，如果Na+、K+及Cl-濃度出現(xiàn)異常則表明腎臟重吸收功能障礙。本研究發(fā)現(xiàn)，老齡大鼠出現(xiàn)倦臥、嗜睡懶動、行動遲緩、反應(yīng)遲鈍、毛發(fā)發(fā)黃無光、目光晦暗、精神不振等外部癥狀，5 h、24 h尿量明顯增多;老齡大鼠尿液中Na+、Cl-濃度明顯增加，K+濃度明顯降低;老齡大鼠血清中Cort的含量明顯降低，表明老齡大鼠可以作為“腎虛多尿”動物模型來驗(yàn)證藥物“補(bǔ)腎縮尿”的功效，為后續(xù)進(jìn)一步的試驗(yàn)研究開展打下了研究基礎(chǔ)。

［1］趙新鴻，熊恩慶，宋波，等.老年大鼠膀胱逼尿肌舒張功能改變的神經(jīng)機(jī)制研究［J］.華北國防醫(yī)藥，2004，1(1):36.

［2］沈自尹.腎陽虛證的定位研究［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，1997，17(1):50-51.

［3］劉國林.自然衰老SD大鼠腎陽虛模型的研究［D］.廣州中醫(yī)藥大學(xué)碩士研究生論文，2005.

［4］沈自尹.從調(diào)理內(nèi)環(huán)境著眼:論腎陽虛老年人潛能的異同［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，1993，15(6):362.

［5］丁橋年，師成杰，趙方萍，等.血皮質(zhì)醇測定對中醫(yī)腎虛理論的探［J］.青海醫(yī)藥雜志，1988，6:31-33.

Changes in urine，ion concentration and cortisol in aged rats

WU Jun1，HAN Yun2，LIANG Wei-ling1，JING Xue-ning1，HUANG Ping3△
(1．Shandong College of Traditional Chinese Medicine，Yantai 264199，China;2．Binzhou Medical University，Yantai 264003，China;3 Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510006，China)

Objective:The model of excessive urination due to Kidney deficiency was investigated by observing the 24 h urination，5 h urination after the water load，urinary Na+、K+、Cl-concentration and the content of cortisol in serum was investigated in the aging rat.Methods:20 aged rats and 20 young rats were chosen.The 5 h urination after the water load in rats and 24 h urination was measured in metabolic cages.The urinary Na+、K+、Cl-concentration was measured by biochemistry analyzer.The concentration of Cort was detected by ELISA in the blood of the natural aging rats.Results The 5 h and 24 h urination of aging rats significantly increased.The quantity discharged of Na+、Cl-significantly decreased and K+increased，the content of Cort significantly decreased too.Conclusion:Excessive urination，Abnormal excretion of Na+、Cl-、K+and the Content decreased significantly in serum，which indicate the aged rats were used as the model of excessive urination due to kidney deficiency for experimental study.

Aged rats;Urination volume;Ion concentrations;Cortisol

R285.5

:B

:1006-3250(2015)05-0515-02

2015-02-09

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(30873425);山東省高等學(xué)?？萍加?jì)劃項(xiàng)目(J12LM52);山東中醫(yī)藥高等專科學(xué)校中西醫(yī)基礎(chǔ)重點(diǎn)學(xué)科資助

吳君(1981-)，男，山西人，講師，醫(yī)學(xué)博士，從事中藥復(fù)方藥理的臨床與研究。

△通訊作者:黃萍，教授，從事中藥新藥與保健品的研發(fā)，Tel:18254579188，E-mail:hping@gzhtcm.edu.cn。