植物生長調(diào)節(jié)劑對水飛薊中水飛薊賓含量及其他生理指標的影響

摘 要 以菊科植物水飛薊為試驗材料，采用濃度為200， 300， 400， 500， 600 mg/L的吲哚乙酸和激動素溶液分別對水飛薊進行處理，研究2種植物生長調(diào)節(jié)劑對水飛薊賓含量和一些生理特征的影響。結(jié)果表明，在吲哚乙酸的處理下，隨其濃度的升高，水飛薊賓的含量、SOD和POD活性先下降后上升，而MDA和CAT基本不受影響。但在激動素處理下水飛薊賓含量逐漸降低，MDA含量先增加后下降，SOD、POD和CAT活性呈上升趨勢。

關(guān)鍵詞 水飛薊；水飛薊賓；吲哚乙酸；激動素

中圖分類號：Q945 文獻標志碼：A 文章編號：1673-890X（2015）22-066-03

知網(wǎng)出版網(wǎng)址：http：//www.cnki.net/kcms/detail/50.1186.s.20150908.1416.014.html 網(wǎng)絡(luò)出版時間：2015/9/8 14：16：57

水飛薊（Silybum marianum Gaertn.）為菊科水飛薊屬草本植物，又名奶薊、水飛雉，是民間治療肝炎的良藥。栽培以前茬禾谷類、豆類作物為好[1]。水飛薊素是從水飛薊種子中提取的黃酮木酯素類化合物的混合物，主要成分有水飛薊賓、異水飛薊賓、水飛薊寧和水飛薊亭等黃酮類物質(zhì)，其中水飛薊賓含量最高。目前研究發(fā)現(xiàn)，水飛薊素具有保肝、降血脂、抗氧化、防止糖尿病、保護心肌和抗腫瘤等生理作用[2-4]。何維明等[5]研究表明，水飛薊油中含有粗脂肪油、8種脂肪酸、12種氨基酸及維生素、鐵等營養(yǎng)成分。因此，水飛薊不僅有較好的醫(yī)療作用，而且具有較高的營養(yǎng)價值。

吲哚乙酸（IAA）是一類內(nèi)源生長調(diào)節(jié)劑，是最早發(fā)現(xiàn)的植物生長調(diào)節(jié)劑，生理作用十分廣泛，包括對細胞分裂、伸長和分化，營養(yǎng)器官和生殖器官的生長、成熟和衰老的調(diào)控等方面。激動素（KT-30）又叫動力精，是一種非天然的植物生長調(diào)節(jié)劑，具有促進細胞分裂和延緩離體葉片和切花衰老，誘導(dǎo)芽分化和發(fā)育及增加氣孔開度的作用。

本試驗主要研究不同濃度吲哚乙酸和激動素對水飛薊中水飛薊賓含量和一些生理特征的影響，篩選適宜濃度的植物生長調(diào)節(jié)劑，以期為提高水飛薊相關(guān)品質(zhì)提供一定借鑒。

1材料與方法

1.1試驗材料

水飛薊種子，取自吉林農(nóng)業(yè)科技學院中藥學院實驗基地。

1.2田間試驗

田間試驗采用大田栽培法，于5月中旬播種。7月中旬挑選生長狀況良好并一致的水飛薊進行吲哚乙酸和激動素處理，設(shè)定濃度為200， 300， 400， 500， 600 mg/L，單株噴施量為30 mL，對照（CK）噴施等量自來水，每組處理3次重復(fù)。10 d噴1次，連續(xù)噴3次。噴第一次的當天測量株高，以后每隔10 d測量1次，作好相應(yīng)記錄。

1.3室內(nèi)測定項目及方法

1.3.1水飛薊賓含量的測定

取HPLC測定用對照品溶液各1， 2， 3， 4， 5， 6 μL，按預(yù)定色譜條件進樣分析，以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，分別得到水飛薊賓A、B的標準曲線（如圖1、圖2）。

標準品溶液制備：精密稱取水飛薊素標準品5.0 mg，于50 mL容量瓶中，加甲醇溶解、定容，搖勻，0.45 μm微孔濾膜濾過，濾液即為HPLC法測定用各標準品溶液。

供試溶液制備：精密稱量水飛薊新鮮種子5 g，經(jīng)烘箱干燥至種子水分完全散發(fā)。再將烘干的種子粉碎，精密稱量1 g，用50 mL石油醚在70℃下回流3 h。待提取完成后，將溶液過濾，殘渣用濾紙包裹并溫風吹干。精密加入150 mL乙酸乙酯，78℃水浴回流3 h，過濾提取液并用20 mL乙酸乙酯分2次洗滌燒瓶以及濾紙。合并濾液和洗滌液濃縮至干，以1 mL色譜純甲醇定容，即為HPLC測定用水飛薊素供試溶液。

1.3.2丙二醛含量（MDA）的測定

根據(jù)張治安[6]丙二醛含量測定方法：MDA含量[μmol/g]=（CVTV1）/1000V2W，式中C：MDA濃度（μmol/L）；VT：樣品提取液的總體積（mL）；V1：樣品提取液和TBA溶液總反應(yīng)液體積（mL）；V2：于TBA反應(yīng)的樣品提取液體積（mL）；W：鮮樣品質(zhì)量（g）；1000是將mL換算成L的系數(shù)。

1.3.3超氧化物歧化酶（SOD）的測定

根據(jù)張治安[6]SOD測定方法：取低溫保存的鮮樣，稱2 g左右的葉片放在50 mL的離心管，加入20 mL濃度為0.05 mol/L的磷酸緩沖溶液（pH=7.8），研磨，8000 r/min的冷凍離心機離心20 min，上清液為粗酶液。測試時，取3 mL反應(yīng)液+0.02 mL的粗酶液，于光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6～10 min，OD650下測定吸光度。SOD單位為U/g。

1.3.4過氧化物酶（POD）的測定

根據(jù)張治安[6]POD測定方法：2 mL 0.3%H2O2溶液+0.95 mL 0.2%愈創(chuàng)木酚溶液+1 mL 0.05 mol/L pH為7.0的磷酸緩沖溶液（PBS）+0.02 mL酶液（對照用0.05 mol/L磷酸緩沖溶液代替酶液），記錄470 nm處OD降低速度。POD單位為U/g。

1.3.5過氧化氫酶（CAT）的測定

根據(jù)張治安[6]CAT測定方法：1 mL 0.3%H2O2溶液+1.9 mLH2O+0.1 mL 酶液，測定240 nm處OD降低速度。CAT單位為U/g。

1.3.6葉綠素含量的測定

用TYS-A葉綠素測定儀直接測定葉綠素含量。葉綠素單位為mg/g.FW。

1.3.7水飛薊產(chǎn)量的測定

成熟期，各個小區(qū)單獨收取水飛薊種子，分別測定每個小區(qū)的水飛薊產(chǎn)量。

1.3.8水飛薊株高的測定

水飛薊使用植物生長調(diào)節(jié)劑處理后，每隔10 d測量每個小區(qū)水飛薊的株高，并取平均值。

2結(jié)果與分析

吲哚乙酸和激動素噴施濃度對水飛薊中水飛薊賓、MDA、SOD、POD、CAT、葉綠素含量的影響測定結(jié)果列于表1。

2.1吲哚乙酸和激動素對水飛薊中水飛薊賓含量的影響

本試驗提取出了水飛薊賓，由表1可知，吲哚乙酸處理過的水飛薊與空白對照相比，吲哚乙酸濃度在0～300 mg/L時水飛薊賓的含量呈上升趨勢，在300～600 mg/L時水飛薊賓的含量呈下降趨勢；而水飛薊賓含量隨著激動素處理濃度的增加而下降。

2.2吲哚乙酸和激動素對水飛薊丙二醛含量的影響

吲哚乙酸處理后，MDA含量基本在0.005～0.0065 mol/g之間浮動，但浮動不明顯；而隨著激動素處理濃度的增加，MDA含量先增加，后呈下降趨勢。

2.3吲哚乙酸和激動素對水飛薊超氧化物歧化酶（SOD）活性的影響

噴施吲哚乙酸200 mg/L時SOD活性下降，而后呈上升趨勢；激動素對SOD活性影響在試驗濃度區(qū)間一直呈上升趨勢。

2.4吲哚乙酸和激動素對水飛薊過氧化物酶（POD）活性的影響

噴施濃度在0～300 mg/L區(qū)間，隨著吲哚乙酸濃度的增加，POD活性降低，在300 mg/L時達到最小值；噴施濃度在400～600 mg/L區(qū)間，POD活性隨吲哚乙酸濃度的增加而增加。而隨著KT-30濃度的增加，POD活性持續(xù)下降。

2.5吲哚乙酸和激動素對水飛薊過氧化氫酶（CAT）的活性影響

隨著吲哚乙酸濃度的升高，CAT的活性在35～40之間浮動，且浮動不明顯；而隨著激動素濃度的增加，CAT活性一直增加。

2.6吲哚乙酸和激動素對水飛薊葉綠素含量的影響

噴施濃度在0～600 mg/L范圍內(nèi)，隨著吲哚乙酸和KT-30濃度的增加，葉綠素含量均持續(xù)上升。水飛薊葉綠素含量KT-30處理高于吲哚乙酸處理。

2.7吲哚乙酸和激動素對水飛薊產(chǎn)量的影響

由表2可以看出，水飛薊產(chǎn)量在吲哚乙酸300 mg/L處理達最大值，而后隨濃度的增加呈下降趨勢；激動素處理的水飛薊產(chǎn)量一直呈上升趨勢，故激動素的最佳處理濃度還有待探究。

2.8吲哚乙酸和激動素對水飛薊株高的影響

由表3可以看出，吲哚乙酸會促進植物生長，使其株高明顯高于對照，而激動素會使其生長減緩，低于正常水平。

3討論

探究適宜種類及濃度植物生長調(diào)節(jié)劑對藥用植物有效成分的影響意義重大。本試驗水飛薊在不同濃度吲哚乙酸和激動素處理下，雖然水飛薊賓含量提高不明顯，但水飛薊產(chǎn)量有一定提高。本探究旨在為藥用植物引種馴化、中藥鑒定以及合理利用土地資源提供理論依據(jù)。植物生長調(diào)節(jié)劑對藥用植物初級代謝產(chǎn)物和次級代謝產(chǎn)物的影響作用機制以及作用程度尚須深入研究。

參考文獻：

[1]張曉紅.水飛薊的種植技術(shù)[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)，2009：11.

[2]董巖，孔春燕.水飛薊有效成分的提取研究[J].中成藥，2010，32（7）：1225-1227.

[3]睢大.保肝藥水飛薊素的藥理研究進展[J].時珍國藥研究，1993，4（4）：41-42.

[4]馬波.水飛薊的研究進展[J].基層中藥雜志，1998，12（3）：48-49.

[5]何維明，許牡丹，楊菁，等.水飛薊油的營養(yǎng)成分及降脂作用的研究[J].營養(yǎng)學報，1996，18（2）：163-167.

[6]張治安，陳展宇.植物生理學實驗技術(shù)[M].長春：吉林大學出版社，2008.

（責任編輯：丁志祥）