苯乙醇胺A檢測技術(shù)研究進(jìn)展

摘 要 人們對動物性食品的質(zhì)量安全問題日益關(guān)注，尤其是食品中藥物類的殘留。與此同時(shí)，藥物殘留檢測技術(shù)水平也得到了提高和完善。以苯乙醇胺A為例，對相應(yīng)的檢測方法進(jìn)行綜述，包括高效液相色譜技術(shù)、質(zhì)譜技術(shù)、酶聯(lián)免疫技術(shù)以及電化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)等。

關(guān)鍵詞 苯乙醇胺A；檢測技術(shù)；研究進(jìn)展

中圖分類號：S859.84 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號：1673-890X（2015）10-044-03

知網(wǎng)出版網(wǎng)址：http：//www.cnki.net/kcms/detail/50.1186.S.20150428.1135.017.html 網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2015/4/28 11：35：00

苯乙醇胺A（Phenylethanolamine A），別名克侖巴胺，為福莫特羅同分異構(gòu)體，是瘦肉精的一種，運(yùn)用到畜牧業(yè)具有提高畜禽瘦肉率和脂肪再分配等作用，但人食用后會對身體健康造成潛在的威脅。介紹苯乙醇胺A的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)，分析目前的主要檢測方法。

1苯乙醇胺A概述

苯乙醇胺A即2-[4-（4-硝基苯基）丁基-2-基氨基]-1（4-甲氧基苯基）乙醇，是β-激動劑的一種，分子式為C19H24N2O4，分子量為344。研究發(fā)現(xiàn)，苯乙醇胺能夠降低飼料消耗，提高瘦肉率[1]，并且在低蛋白質(zhì)日糧條件下能有效保持豬的高增長速度[2]。但食用含苯乙醇胺類殘留的動物源性產(chǎn)品，會對人體健康產(chǎn)生嚴(yán)重的危害，導(dǎo)致頭暈、心悸等癥狀，尤其是對心臟病、高血壓患者最為明顯[3-4]。2011年，苯乙醇胺A以新型瘦肉精的身份為大家所熟知，不法分子用苯乙醇胺A替代克倫特羅等傳統(tǒng)瘦肉精添加到飼料預(yù)混料中，妄圖逃避打擊。農(nóng)業(yè)部1519號公告明確指出禁止在飼料和動物飲水中使用苯乙醇胺A，因此完善苯乙醇胺A的檢測方法將有助于監(jiān)管部門對該類藥物的監(jiān)控和管理。

目前，檢測苯乙醇胺A的方法多種多樣，主要包括高效液相色譜技術(shù)、氣象色譜-質(zhì)譜技術(shù)、液相色譜-質(zhì)譜技術(shù)、電化學(xué)技術(shù)以及免疫酶技術(shù)等。部分檢測方法及對應(yīng)檢出限見表1[5-9]。

2檢測技術(shù)

2.1高效液相色譜法（HPLC）

在多數(shù)情況下，不同物質(zhì)在流動相和固定相中具有不同的分配系數(shù)，經(jīng)過多次分配后能夠得以完全分離。該種分離技術(shù)運(yùn)用于分析檢測，則稱之為色譜分析。高效液相色譜作為色譜法的一個(gè)主要分支，以液體作為流動相，運(yùn)用高壓輸液系統(tǒng)來加速對各組分的分離，具有選擇性好、分離效率高、分析速度快、樣品用量少、多組分同時(shí)分析、檢測靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)。王瑞國等利用甲酸-甲醇混合液提取飼料中苯乙醇胺A，PCX固相萃取柱凈化，氨水-甲醇溶液洗脫吹干后，以甲酸水溶液-甲醇溶解，過濾膜上機(jī)測定，不同基質(zhì)飼料樣品測得回收率為68.7%～96.8%，檢出限和定量限分別為0.3 mg/kg和1.0 mg/kg[5]。梅麗蕓利用免疫親和柱對飼料、豬肉、豬肝中苯乙醇胺A凈化富集，加標(biāo)回收率為89.48%～101.98%[10]。但液相色譜也存在定性能力差的缺點(diǎn)，僅能依靠保留時(shí)間和紫外吸收圖譜來進(jìn)行鑒別，對于化學(xué)性質(zhì)相近的物質(zhì)則難以區(qū)別，同時(shí)液相色譜檢測靈敏度有限，對于動物產(chǎn)品中痕量苯乙醇胺A的檢測能力還有待提高。

2.2質(zhì)譜法（MS）

2.2.1 液相色譜-質(zhì)譜法（LC-MS）

液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀是聯(lián)合了液相色譜與質(zhì)譜的儀器，它以色譜為分離系統(tǒng)，質(zhì)譜為檢測系統(tǒng)。樣品經(jīng)分離后離子化，離子碎片通過質(zhì)量分析器按質(zhì)荷比分開得到質(zhì)譜圖。液質(zhì)聯(lián)用結(jié)合了色譜和質(zhì)譜優(yōu)勢，色譜分離能力強(qiáng)，質(zhì)譜選擇性高、靈敏度高并且能夠提供樣品分子量與結(jié)構(gòu)信息，二者結(jié)合起來，在藥物殘留等分析領(lǐng)域有廣泛的應(yīng)用。曲斌等利用高氯酸酸化尿液，過固相萃取柱凈化的方法，經(jīng)LC-MS測定豬尿中的苯乙醇胺A，定量限達(dá)到了0.2 μg/L[11]。盧艷芬采取LC-MS法測定豬肉中殘留的苯乙醇胺A，在前處理過程中經(jīng)酶解、酸化和調(diào)節(jié)樣品溶液pH以提高萃取效率。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在52℃水浴酶解2 h，酶解濃度達(dá)到峰值，檢測限和定量限分別為0.2 μg/kg和0.5 μg/kg，回收率大于79.0%[12]。

目前，因分析時(shí)間短、檢測限低以及定性分析結(jié)果可靠等優(yōu)點(diǎn)，LC-MS法已經(jīng)作為檢測苯乙醇胺A殘留的確證方法。其缺點(diǎn)是儀器價(jià)格昂貴、檢測成本高、檢測技術(shù)難以掌握、應(yīng)用還不夠普遍。

2.2.2 氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）

GC-MS與LC-MS主要的區(qū)別在于色譜，LC-MS的流動相為液體，而GC-MS的流動相是惰性氣體，另外在前處理方面1個(gè)主要的區(qū)別是GC-MS需要對樣品中目標(biāo)化合物分子的氨基、羥基等極性基團(tuán)衍生化，相比LC-MS前處理過程更加繁瑣。所以目前國內(nèi)關(guān)于GC-MS檢測苯乙醇胺A的報(bào)道很少。楊正彗以pH值3.6的乙酸鈉緩沖液為提取液，通過MCX小柱凈化，運(yùn)用GC-MS法檢測飼料樣品中的苯乙醇胺A。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，樣品加入80 μL衍生化試劑在60℃下反應(yīng)，運(yùn)用SIM采集模式，檢測結(jié)果有較好的靈敏度和重現(xiàn)性，檢出限達(dá)到了3.8 μg/L[6]。

2.3酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）

酶聯(lián)免疫吸附法是通過抗原與抗體的特異性反應(yīng)，將酶與待測物連接，而后酶與底物產(chǎn)生顏色反應(yīng)，多用于篩選和定量。酶聯(lián)免疫吸附法包括雙抗體夾心法、雙位點(diǎn)一步法、檢測法測抗體、競爭法、捕獲法測IgM抗體、應(yīng)用親和素和生物素的ELISA法。目前，ELISA法在實(shí)驗(yàn)室有著廣泛的應(yīng)用，操作簡單、快速是其主要特點(diǎn)，適合于大量樣品的快速篩選檢測，尤其是基層獸藥殘留監(jiān)管部門普遍采用的方法。曹碧云建立了檢測飼料和動物組織中苯乙醇胺A間接競爭的ELISA法，該方法靈敏度高，特異性高，回收率為92.2%～113.7%，檢出限達(dá)到了0.003 μg/L[9]。但ELISA法也有著致命的缺點(diǎn)，那就是假陽性率還比較高，對于篩選出來的陽性樣品還需要通過液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用方法確證。

2.4電化學(xué)發(fā)光免疫分析法

電化學(xué)發(fā)光是1種集合了電化學(xué)與發(fā)光分析的痕量分析技術(shù)，具有高靈敏度和可控性好的優(yōu)點(diǎn)。免疫傳感器是把特異性的免疫反應(yīng)與高靈敏度的傳感技術(shù)結(jié)合，用來監(jiān)測抗原-抗體反應(yīng)的一種生物傳感器。將電化學(xué)發(fā)光與免疫傳感技術(shù)相結(jié)合，則在新型瘦肉精檢測領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用前景。湯慶會等建立的基于量子點(diǎn)和酶放大電化學(xué)發(fā)光免疫法檢測苯乙醇胺A過程中，與電化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度成線性關(guān)系的苯乙醇胺A濃度被拓寬到0.05～1000 μg/L，檢出限達(dá)到了0.015 μg/L[8]。閆盼盼分別以巰基乙酸和檸檬酸三鈉作為穩(wěn)定劑和還原劑，利用合成的CdSe量子點(diǎn)和膠體金組建成了一種電化學(xué)發(fā)光免疫傳感器，并實(shí)際用于豬肝、豬肉和尿液樣品中苯乙醇胺A的檢測，回收率為82%～124%，重現(xiàn)性、穩(wěn)定性和選擇性良好[13]。

3小結(jié)

綜上所述，在現(xiàn)有的苯乙醇胺A殘留檢測方法中，高效液相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜法、液相色譜-質(zhì)譜法具有較高的靈敏度，其中液相色譜-質(zhì)譜法被農(nóng)業(yè)部1486號公告用作飼料中苯乙醇胺A的確證方法，但對儀器設(shè)備和人員素質(zhì)要求比較高；酶聯(lián)免疫檢測法快速、簡單，主要用于篩選檢測；電化學(xué)發(fā)光免疫傳感技術(shù)靈敏、快速，能夠?qū)Ρ揭掖及稟進(jìn)行現(xiàn)場監(jiān)測，是今后新型瘦肉精殘留檢測的重要研究方向。只有不斷完善新型瘦肉精的監(jiān)測手段，提高檢測水平，才能夠保證動物性食品的質(zhì)量安全。

參考文獻(xiàn)：

[1]李呂木，詹凱，吳東，等.苯乙醇胺對肉鴨生產(chǎn)性能和生化指標(biāo)的影響[J].中國家禽，1998，（9）：7-9.

[2]金邦荃，徐小明，于亞君，等.日糧中蛋白質(zhì)和賴氨酸在β-激動劑的控制下對豬生長和肌肉發(fā)育的影響[J].飼料研究，1997，（12）：6-8.

[3]王政，倪衛(wèi)忠，嚴(yán)敏鳴.新型“瘦肉精”種類及其檢測方法研究進(jìn)展[J].上海畜牧獸醫(yī)通訊，2013，（2）：30-31.

[4]蘇麗芳，何丹婷，徐飛，等.新型瘦肉精殘留的檢測方法研究進(jìn)展[J].中國獸醫(yī)雜志，2014，50（5）：59-61.

[5]王瑞國，蘇曉歐，王培龍，等.超高效液相色譜法測定飼料中苯乙醇胺A[J].分析化學(xué)，2013，41（3）：389-393.

[6]楊正彗.氣相色譜-質(zhì)譜法檢測β-受體激動劑殘留量的方法研究[D].吉林：吉林大學(xué)，2012.

[7]徐素彬，趙立軍，柏林，等. 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對家畜尿液中苯乙醇胺A殘留檢測研究[J].分析化學(xué)，2013，41（5）：776-780.

[8]湯慶會，蔡福東，鄧安平，等.基于量子點(diǎn)和酶放大電化學(xué)發(fā)光競爭免疫法超靈敏檢測β-腎上腺素受體激動劑苯乙醇胺A[A].第十八屆全國分子光譜學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C].北京：北京大學(xué)出版社，2014， 423-424.

[9]曹碧云.三聚氰胺、沙丁胺醇及苯乙醇胺A的酶聯(lián)免疫吸附分析法（ELISA）的研究和應(yīng)用[D].蘇州：蘇州大學(xué)，2013.

[10]梅麗蕓.食品中氟喹諾酮類抗生素酶聯(lián)免疫吸附分析法及苯乙醇胺A免疫親和色譜法的研究[D].蘇州：蘇州大學(xué)，2014.

[11]曲斌，鄭勝蘭，陸桂萍，等.固相萃取-UPLC-MS/MS快速測定豬尿中的苯乙醇胺A[J].中國獸藥雜志，2012，46（1）：25-27.

[12]盧艷芬.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定豬肉和豬尿中的苯乙醇胺A[J].檢驗(yàn)檢疫學(xué)刊，2013，23（1）：41-44.

[13]閆盼盼.基于量子點(diǎn)和膠體金電化學(xué)發(fā)光免疫傳感器的構(gòu)建及應(yīng)用[D].蘇州：蘇州大學(xué)，2014.

（助理編輯：易婧；責(zé)任編輯：敬廷桃）