蝴蝶蘭組織培養(yǎng)快繁技術(shù)研究初報(bào)

摘 要 為探索蝴蝶蘭快繁的有效途徑，將蝴蝶蘭無菌種子播種在不同培養(yǎng)基中培育實(shí)生苗，從而篩選種子最佳萌發(fā)培養(yǎng)基。實(shí)驗(yàn)初步表明，不同培養(yǎng)基對蝴蝶蘭種子的生長萌發(fā)有較大影響，1/2MS培養(yǎng)基利于蝴蝶蘭種子的萌發(fā)，不會出現(xiàn)萌發(fā)后漸漸枯黃的現(xiàn)象；在此基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加“6-BA 2.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L”可以促進(jìn)種子萌發(fā)，節(jié)約成本。“MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L”培養(yǎng)基組合利于叢生芽增殖成苗，提高移栽成活率，蝴蝶蘭長勢良好，畸形率極低。

關(guān)鍵詞 蝴蝶蘭；組織培養(yǎng)；培養(yǎng)基；種子萌發(fā)

中圖分類號：S682.31 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號：1673-890X（2015）31-023-02

知網(wǎng)出版網(wǎng)址：http：//www.cnki.net/kcms/detail/50.1186.s.20151205.1608.024.html 網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2015/12/5 16：08：00

蝴蝶蘭（Phalaenopsis amabilis）又稱蝶蘭，屬熱帶氣生蘭，多年生草本植物。蝴蝶蘭屬是著名的切花種類，是國際上最具商業(yè)價(jià)值的四大觀賞熱帶蘭之一[1]。蝴蝶蘭有“洋蘭皇后”的美稱，隨著國內(nèi)市場需求量的增加，蝴蝶蘭生產(chǎn)前景將越來越好，具有極高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。由于蝴蝶蘭屬于單軸性氣生蘭，種子細(xì)小，胚及胚乳等發(fā)育不完全[2]，不適合用傳統(tǒng)方法進(jìn)行播種。利用組織培養(yǎng)進(jìn)行蝴蝶蘭種苗大量繁殖是一個(gè)快速、便捷、不受時(shí)間約束的有效途徑。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

試驗(yàn)材料選用哈爾濱市農(nóng)業(yè)科學(xué)院溫室栽培的盆栽蝴蝶蘭白花紅唇自交品種（代號W1）。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1 人工授粉

在3月末至4月初，蝴蝶蘭開花的第3天進(jìn)行人工授粉。首先將鑷子用酒精消毒，然后將父本花粉頭取下放入母本柱頭上，1株蝴蝶蘭最多授粉2朵花，以防營養(yǎng)缺失。授粉后做好記錄。授粉花朵逐漸凋萎，子房逐漸膨大成蒴果。4個(gè)月后取下未開裂果莢備用。

1.2.2 果莢處理

在無菌超凈臺內(nèi)將果莢用0.1%的升汞滅菌10 min，再用75%酒精滅菌3 min，滅菌水清洗3～5次，用無菌濾紙吸干表面多余水分。然后用解剖刀縱向切開果莢，將細(xì)小的種子均勻撒在培養(yǎng)基上，每個(gè)果莢用培養(yǎng)基5瓶。

1.2.3 培養(yǎng)基

試驗(yàn)用基礎(chǔ)培養(yǎng)基有MS、KYOTO、1/2MS，添加不同濃度激素及蔗糖3%、瓊脂6 g/L，pH 調(diào)至5.6～5.8。配制好的培養(yǎng)基分裝滅菌備用。

1.2.4 培養(yǎng)條件

遮光暗培養(yǎng)7 d，溫度保持25℃，7 d后采用光強(qiáng)1000～1500 lx、光照時(shí)間15 h/d進(jìn)行培養(yǎng)。1個(gè)月后調(diào)查萌發(fā)率。

2結(jié)果與分析

2.1不同基礎(chǔ)培養(yǎng)基對蝴蝶蘭種子萌發(fā)的影響

將蝴蝶蘭種子分別接種到MS、KYOTO、1/2MS培養(yǎng)基中，每種培養(yǎng)基接種20瓶，30 d后觀察萌發(fā)情況。從表1可以看出，3種培養(yǎng)基中1/2MS培養(yǎng)基萌發(fā)率較高。

2.2不同激素配比培養(yǎng)基對蝴蝶蘭種子萌發(fā)的影響

在1/2MS培養(yǎng)基中分別加入6-BA 1.0 mg/L、2.5 mg/L、4.0 mg/L，NAA 0.2 mg/L、0.6 mg/L、1.0 mg/L，共得到表2的9組培養(yǎng)基組合。結(jié)果表明，播種90 d的種子萌發(fā)率都在60%以上，其中“1/2MS+6-BA 2.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L”組合的培養(yǎng)基萌發(fā)率最高，達(dá)到98%左右（見表2）。播種30 d后，種子由黃變綠、膨大；播種60 d后，1/3的種子萌發(fā)出小葉片；90 d后，基本全部萌發(fā)，小苗高約0.6 cm。

2.3不同激素配比的培養(yǎng)基對叢生芽增殖和成苗的影響

為減少污染、節(jié)約成本，本試驗(yàn)采用3步成苗法：播種→分瓶擴(kuò)繁→壯苗培養(yǎng)。接種時(shí)按照大小分級，每1000 mL蝴蝶蘭專用瓶移入20個(gè)帶葉小苗。以MS作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，在培養(yǎng)基中分別加入6-BA 2.0 mg/L、3.0 mg/L、4.0 mg/L，NAA 0.1 mg/L、0.2 mg/L、0.3 mg/L。從表3中可以看出，培養(yǎng)基“MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L”生長快、幼苗壯、小苗達(dá)標(biāo)率高。

2.4移栽

小苗高約6 cm、具有3～5條根時(shí)，把培養(yǎng)基瓶打開，移到溫室環(huán)境下煉苗2周，然后將小苗栽于水藻中，一般成活率可以達(dá)到75%左右，“MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L”培養(yǎng)基組合的成活率可以達(dá)到85%。

3小結(jié)與討論

從授粉開始經(jīng)過120 d，發(fā)育成熟的蝴蝶蘭種子胚呈淡黃色，接種到培養(yǎng)基中易均勻散播、生長較快、原球莖易形成、顆粒整齊飽滿、成苗快。不同培養(yǎng)基對蝴蝶蘭種子的生長萌發(fā)有較大影響，1/2MS培養(yǎng)基利于蝴蝶蘭種子的萌發(fā)，不會出現(xiàn)萌發(fā)后漸漸枯黃的現(xiàn)象；在此基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加“6-BA 2.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L”可以促進(jìn)種子萌發(fā)，節(jié)約成本?！癕S+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L”培養(yǎng)基組合利于叢生芽增殖成苗，提高移栽成活率，蝴蝶蘭長勢良好，畸形率極低。

參考文獻(xiàn)：

[1]盧思聰.蘭花栽培入門[M].北京：金盾出版社，1990：19.

[2]杜廣平.蝴蝶蘭種子無菌培養(yǎng)的研究[J].黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010（10）：16-18.

（責(zé)任編輯：丁志祥）