奶?？谔阋吣冈纯贵w測定及三價滅活疫苗免疫效果評價

徐春志，藺俐仲，方 英*，袁翠霞，白 璧，余啟茂

口蹄疫(Foot-and-mouth disease，F(xiàn)MD)是由口蹄疫病毒感染豬、牛、羊等偶蹄動物引起的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，患病動物臨床主要表現(xiàn)為口腔黏膜、舌面、唇、鼻鏡、蹄叉、乳頭等部位發(fā)生水泡，破潰形成爛斑，嚴(yán)重者蹄殼邊緣潰裂或出現(xiàn)脫殼癥狀。該病在易感動物中發(fā)病率可達(dá)100%，并形成大范圍流行［1］，嚴(yán)重影響畜牧業(yè)的健康持續(xù)發(fā)展，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，甚至還會帶來國際政治影響，素有“政治經(jīng)濟(jì)病”之稱［2］。由于FMD危害大，被世界動物衛(wèi)生組織和聯(lián)合國糧農(nóng)組織列為A類動物傳染病之首［3］，我國也將其列為一類動物疫病。

口蹄疫病毒共有7個血清型，不同血清型之間不能產(chǎn)生交叉免疫反應(yīng)，口蹄疫病毒的血清型與流行地域存在密切關(guān)系，我國發(fā)生的口蹄疫疫情中，已經(jīng)證實(shí)畜群主要遭受O型、亞洲Ⅰ型和A型流行毒株的侵襲［4］。為有效控制口蹄疫的發(fā)生與流行，國內(nèi)主要采取給易感動物接種疫苗的措施，而疫苗免疫效果的好壞直接關(guān)系到口蹄疫的控制效果。為此，筆者開展了奶?？谔阋吣冈纯贵w測定及其O型、A型、亞洲Ⅰ型三價滅活疫苗免疫效果評價，旨在探索一套合理的免疫程序，以指導(dǎo)奶?？谔阋叩姆揽毓ぷ?，現(xiàn)將試驗(yàn)結(jié)果報道如下。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動物 選取規(guī)模化奶牛場健康新生犢牛30頭，健康成年母牛30頭。

1.2 口蹄疫疫苗和免疫方法 牛羊口蹄疫O型、A型、亞洲Ⅰ型三價滅活疫苗由新疆天康畜牧生物技術(shù)股份有限公司提供，接種途徑和免疫劑量嚴(yán)格按照疫苗使用說明書操作。

1.3 檢測試劑 口蹄疫O型、A型、亞洲Ⅰ型抗體液相阻斷ELISA檢測試劑盒購自中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所，檢測操作方法嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行，結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)按照農(nóng)業(yè)部規(guī)定的O型、亞洲Ⅰ型和A型口蹄疫液相阻斷ELISA抗體效價≥1∶64為合格。

1.4 樣品采集及檢測 新生犢牛出生后未吃初乳前進(jìn)行第 1 次采血，以后 7、14、21、30、45、60、75、90 d及首免后每間隔1個月采血，分離血清，檢測O型、亞洲Ⅰ型和A型口蹄疫抗體效價。成年母牛于免疫前及以后每間隔1個月采血，分離血清，檢測O型、亞洲Ⅰ型和A型口蹄疫抗體效價。

2 結(jié)果

2.1 犢牛母源抗體水平檢測結(jié)果 30頭犢牛經(jīng)采血檢測口蹄疫O型、亞洲Ⅰ型和A型母源抗體，抗體平均效價消長規(guī)律檢測結(jié)果見表1。表1檢測結(jié)果表明，新生犢牛出生后未吃初乳前具有一定的口蹄疫抗體水平，但平均效價較低，達(dá)不到保護(hù)水平;吃初乳后抗體水平迅速上升，7 d達(dá)到高峰，隨后維持在一個較高的水平，一直持續(xù)到60 d，60 d后抗體水平迅速降低，至90 d回落近臨界值。

表1 犢牛母源抗體平均效價消長規(guī)律

2.2 犢牛首免及加強(qiáng)免疫后抗體檢測結(jié)果 由于母源抗體水平過高可能會干擾疫苗免疫效果，因此，應(yīng)該在母源抗體水平不高的情況下對新生犢牛進(jìn)行首次免疫。根據(jù)上述對犢牛母源抗體水平的測定，90 d時平均抗體效價接近臨界值，選擇90 d時進(jìn)行首次免疫，120 d加強(qiáng)1次免疫。30頭犢牛首免及加強(qiáng)免疫后口蹄疫抗體平均效價消長規(guī)律檢測結(jié)果見表2。由表2檢測結(jié)果看出，犢牛90 d首免后抗體水平有所上升，但是抗體平均效價總體水平不高。120 d加強(qiáng)免疫后，抗體水平迅速上升，150 d抗體水平達(dá)到高峰，隨后緩慢下降，但一直能夠達(dá)到保護(hù)水平，直至300 d抗體水平回落近臨界值。

表2 犢牛首免及加強(qiáng)免疫后口蹄疫抗體平均效價消長規(guī)律

2.3 成年母牛免疫后抗體檢測結(jié)果 30頭成年母牛經(jīng)采血檢測口蹄疫O型、亞洲Ⅰ型和A型抗體，抗體平均效價消長規(guī)律檢測結(jié)果見表3。表3檢測結(jié)果顯示，免疫前的成年母?？贵w平均效價處在保護(hù)水平臨界值，免疫后30 d抗體水平達(dá)到高峰，60～120 d抗體水平仍然維持在一個較高的范圍內(nèi)，免疫后180 d抗體水平下降到接近臨界值。

表3 成年母牛免疫前后口蹄疫抗體平均效價消長規(guī)律

3 討論

3.1 通過對犢牛母源抗體、首免及加強(qiáng)免疫后抗體水平的檢測，結(jié)果表明:新生犢牛未吃初乳前具有較低的口蹄疫抗體水平，這說明在妊娠期間犢牛通過胎盤從母體獲得了部分母源抗體。吃初乳后口蹄疫抗體迅速上升，7 d達(dá)到高峰，隨后維持在一個較高的抗體水平，一直持續(xù)到60 d。60 d后口蹄疫抗體迅速降低，至90 d回落近臨界值。這說明母乳是犢牛獲得高質(zhì)量母源抗體的主要途徑，由于規(guī)?；膛鐾ǔＴ?0 d停吃母乳，斷乳后母源抗體迅速下降。犢牛首免后口蹄疫抗體雖有上升，但平均效價不高，加強(qiáng)免疫后抗體迅速上升，并長時間維持在一個較高水平，這是由于首免后機(jī)體產(chǎn)生的抗體以IgM為主，能在短期內(nèi)中和大量抗原，但與抗原的結(jié)合力較弱，在體內(nèi)維持時間較短，因此，建議首免后30 d進(jìn)行加強(qiáng)免疫。

3.2 通過對成年母牛免疫后口蹄疫抗體水平進(jìn)行檢測，結(jié)果表明:免疫后30 d口蹄疫抗體水平達(dá)到高峰，免疫后60～120 d抗體水平仍然維持在一個較高范圍，180 d抗體水平下降到接近臨界值，說明使用三價滅活疫苗進(jìn)行口蹄疫免疫有效保護(hù)期可達(dá)6個月。

3.3 目前我國發(fā)生的口蹄疫疫情中，畜群主要遭受O型、亞洲Ⅰ型和A型流行毒株的侵襲，根據(jù)農(nóng)業(yè)部《口蹄疫防治技術(shù)規(guī)范》規(guī)定:要求對所有牛實(shí)施口蹄疫O型和亞洲Ⅰ型的強(qiáng)制免疫，另外對所有奶牛和種公牛進(jìn)行A型口蹄疫的強(qiáng)制免疫。2012年前，我國針對奶牛使用的口蹄疫疫苗主要有單價苗和二價苗，多以A型單價苗和O型-亞洲Ⅰ型二價苗為主［5］，這意味著奶牛進(jìn)行1次口蹄疫的免疫后，必須注射2次疫苗。據(jù)汪精華等［6］的研究結(jié)果，認(rèn)為單價苗和二價苗分開注射免疫效果優(yōu)于2種疫苗同時注射，這不僅增加了人力、物力和財力，而且增加了對畜群的應(yīng)激。鑒于此，國內(nèi)加大了對口蹄疫三價滅活苗的研制，并取得了成功。

3.4 現(xiàn)研究內(nèi)容大多數(shù)是針對口蹄疫二價苗和單價苗，而關(guān)于三價苗的免疫效果及免疫程序鮮有報道［7～10］。根據(jù)本試驗(yàn)結(jié)果，建議奶?？谔阋呷齼r苗免疫程序如下:犢牛90 d首免口蹄疫三價滅活疫苗，首免后1個月進(jìn)行二免，以后每6個月加強(qiáng)免疫1次;成年母牛首免后每6個月加強(qiáng)免疫1次。

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