竇曉,楊建剛,馬瑩瑩,林秋,林艷,吳赫川
(四川理工學(xué)院生物工程學(xué)院,四川 自貢,643000)
華根霉(Rhizopus chinonsis)屬于接合菌亞門(Zygomyotina)、接合菌綱(Zygomycetes)、毛霉目(Mucorales)、毛霉科(Mucoaceae)、根霉屬(Rhizopus ehrenberg)[1],在我國的酒藥和酒曲中廣泛出現(xiàn)。菌落疏松擴(kuò)散,初期白色,后變褐色。假根不發(fā)達(dá),短小,手指狀。孢子囊柄常直立,光滑,淺褐色至黃褐色。孢子囊球形或近似球形,灰黑褐色至黑色,能產(chǎn)生球形、橢圓形或短柱形的厚垣孢子。此菌耐高溫,發(fā)育溫度15~45℃,最適宜生長(zhǎng)溫度為30℃[2],由于其耐高溫(45℃能生長(zhǎng))的特性為其擴(kuò)大工業(yè)應(yīng)用提供了基礎(chǔ),在傳統(tǒng)和現(xiàn)代發(fā)酵工業(yè)中有著重要的應(yīng)用。華根霉多出現(xiàn)在我國的酒藥和酒曲中,可產(chǎn)生淀粉酶、耐酸性木聚糖酶、脂肪酶以及蛋白酶等。淀粉酶可以使底物中的淀粉降解為糊精和一些低分子糖,如葡萄糖、麥芽糖等;脂肪酶可以催化酸和酒精合成酯類物質(zhì)對(duì)酒的香氣成分形成具有重要影響。另外一些書上談到,華根霉還具備一定的酒化能力[2]。而它產(chǎn)生的糖化酶和脂肪酶活性較高在發(fā)酵應(yīng)用中有著重要作用也是近年來研究的熱點(diǎn)。
劉云秀等人對(duì)華根霉純種的初步分離做了詳細(xì)研究,具體做法是:取酒曲1.0 g于裝有100 mL無菌生理鹽水的三角瓶中,經(jīng)兩次平板分離后進(jìn)行斜面培養(yǎng),然后采用1株1瓶的方法進(jìn)行初篩,經(jīng)鏡檢后再進(jìn)行第3次平板分離,然后在經(jīng)過1次復(fù)篩和平板分離后,再進(jìn)行1次復(fù)篩(1株3~5瓶),最后選出較優(yōu)菌株進(jìn)行保藏。根據(jù)華根霉的生長(zhǎng)特性他們?cè)O(shè)計(jì)了5種培養(yǎng)基進(jìn)行分析比較分別是蔡氏培養(yǎng)基、麥芽汁培養(yǎng)基、豆芽汁培養(yǎng)基、改良的馬鈴薯培養(yǎng)基以及馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基,最后得出培養(yǎng)純種華根霉的最適培養(yǎng)基是改良的馬鈴薯培養(yǎng)基[3]。
淀粉酶也稱淀粉水解酶,它是能分解淀粉糖苷鍵的一類酶的總稱。包括α-淀粉酶、糖化酶、異淀粉酶、麥芽糖酶等。華根霉產(chǎn)糖化酶活力較強(qiáng),也可產(chǎn)α-淀粉酶[4]。糖化酶(amyloglucosidase)又稱糖化淀粉酶、淀粉葡萄糖糖苷酶和糖化型淀粉酶。糖化酶在作用于淀粉時(shí),能從淀粉分子的非還原性末端逐一將葡萄糖分子切下并將葡萄糖分子構(gòu)型從α-型轉(zhuǎn)變?yōu)棣?型,它既可水解 α-1,4-糖苷鍵也可以水解 α-1,6-糖苷鍵。因此糖化酶作用于直鏈淀粉或者支鏈淀粉是能將它們完全水解為葡萄糖[5]。華根霉的淀粉酶液化能力很強(qiáng),在釀酒發(fā)酵過程中常為底物液化提供動(dòng)力。在已知的各類酒曲中常??梢苑蛛x出性狀優(yōu)良的華根霉菌株。
劉芳等人為了得到產(chǎn)淀粉酶活力較高的華根霉,對(duì)甜酒小曲中分離出的華根霉菌株進(jìn)行篩選。將篩選出的糖化力和液化力最強(qiáng)的菌株進(jìn)行紫外線誘變處理,得到了比原菌株酶活力更高的優(yōu)良菌株,其糖化力和液化力分別比原來菌株高出30%和12.5%,且遺傳特性穩(wěn)定。此菌株的應(yīng)用不僅使甜酒的風(fēng)味更足也縮短了發(fā)酵的糖化時(shí)間[6]。另外他們還通過正交試驗(yàn)和單因素實(shí)驗(yàn)對(duì)該菌株的產(chǎn)酶條件進(jìn)行優(yōu)化研究,得到了此菌株產(chǎn)淀粉酶的最佳條件,使得到的菌株產(chǎn)淀粉酶的活力進(jìn)一步提高,此時(shí)的淀粉酶活力比優(yōu)化前提高了60.96%[7]。汪彬彬研究了利用Plackett-Benhnken法和Box-Benhnken Design實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)法優(yōu)化華根霉產(chǎn)糖化酶發(fā)酵培養(yǎng)基,測(cè)定出在通過培養(yǎng)基培養(yǎng)華根霉時(shí)影響其產(chǎn)糖化酶活的最顯著的3個(gè)因素分別是橄欖油、酪蛋白和麥麩。再對(duì)這3個(gè)因素進(jìn)行最陡爬坡實(shí)驗(yàn)篩選出主要因素的中心點(diǎn),確定出產(chǎn)糖化酶最大值點(diǎn)此時(shí)橄欖油0.01%,酪蛋白8.14%,麥麩 4.32%,糖化酶活比優(yōu)化前提高了81%;在此基礎(chǔ)上又通過響應(yīng)面法對(duì)時(shí)間、溫度、接種量、培養(yǎng)基初始PH值等各因素顯著性和交互作用進(jìn)行分析最后得出最佳培養(yǎng)條件為,時(shí)間為71.94,溫度為31.99℃,接種量為11.94%,pH值為6.06此時(shí)培養(yǎng)基培養(yǎng)的華根霉產(chǎn)糖化酶的酶活又提高了30%[8]。
李彧娜研究了微孢根霉華根霉變種CICIM F0088的生淀粉酶系。分別對(duì)華根霉菌株在固態(tài)和液態(tài)兩種發(fā)酵方式下產(chǎn)生的淀粉酶系進(jìn)行比較研究。她通過對(duì)固態(tài)發(fā)酵和液態(tài)發(fā)酵所產(chǎn)生的淀粉酶進(jìn)行分離純化,結(jié)果在固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物中分離得到3個(gè)酶蛋白GAA,GAB和AA,在液態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物中得到2個(gè)酶蛋白GAC和GAD。然后對(duì)這5種淀粉酶的酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行分析得出GAA、GAB無論在耐熱性上還是在pH耐受范圍上均優(yōu)于GAC、GAD。這4種淀粉酶均有一定的生淀粉水解能力,但AA不具備??紤]到真菌淀粉酶系的復(fù)雜性,在分離純化過程中會(huì)遺漏一些小產(chǎn)量的淀粉酶,李彧娜根據(jù)根酶屬產(chǎn)葡萄糖淀粉酶的氨基酸保守序列和微孢根霉的密碼子偏好性等信息設(shè)計(jì)出兼并引物,然后再通過PCR和反向PCR技術(shù)獲得了該菌株完整的淀粉酶編碼基因gluE。通過對(duì)比分析發(fā)現(xiàn)gluE是一個(gè)新的葡糖糖淀粉酶,在此基礎(chǔ)上運(yùn)用基因工程手段將gluE的cDNA聯(lián)入表達(dá)載體,構(gòu)成重組質(zhì)粒并成功實(shí)現(xiàn)了異源活性表達(dá),發(fā)現(xiàn)表達(dá)后的重組酶蛋白具有水解生淀粉的能力[9]??傮w上來看華根霉在發(fā)酵過程中有較好的糖化能力,在此基礎(chǔ)上我們可以通過誘導(dǎo)突變和優(yōu)化培養(yǎng)條件等方法使其的糖化能力得到進(jìn)一步加強(qiáng),為工業(yè)生產(chǎn)提供更有力的支撐。
脂肪酶作為一種在異相系統(tǒng)即在油水界面起催化作用的特殊酯鍵水解酶,作用底物主要為天然油和脂肪,水解產(chǎn)物為甘油二酯、甘油單酯、甘油和脂肪酸。脂肪酶在白酒制曲和發(fā)酵期間,可以水解原料中所含的脂肪,使原料中的淀粉充分接觸酵母,促進(jìn)發(fā)酵代謝進(jìn)程;同時(shí)產(chǎn)生有機(jī)酸和甘油,而有機(jī)酸是白酒最好的呈味劑,可以使酒的口味豐富而不單一,增長(zhǎng)酒的后味,如酸量適度、比例協(xié)調(diào),可使酒出現(xiàn)甜味和回甜感。甘油作為一種多元醇助香劑,可以消除糙辣感,增加白酒的醇和度。更重要的是,脂肪酶同時(shí)還可以催化有機(jī)酸與大量存在的乙醇生成己酸乙酯、乙酸乙酯等酯類香味物質(zhì),從而提高白酒中酯類香味物質(zhì)的含量,加快白酒中各種酸、醇、酯的反應(yīng)平衡,縮短貯存老熟時(shí)間,調(diào)節(jié)白酒中各種香味物質(zhì)的含量和比例,提高白酒品質(zhì)[10]。
由于脂肪酶在工業(yè)上的巨大利用價(jià)值,而微生物作為脂肪酶的主要來源,一直是科學(xué)界研究的重點(diǎn)。孫舒揚(yáng)研究?jī)?yōu)化了華根霉產(chǎn)全細(xì)胞脂肪酶在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)的條件,確定了其脂肪酶具有較強(qiáng)的短鏈酯的合成能力且對(duì)辛酸乙酯和己酸乙酯的轉(zhuǎn)化率可高達(dá)95%;另外還發(fā)現(xiàn)華根霉CCTCCM201021在固態(tài)發(fā)酵過程中產(chǎn)生的脂肪酶的合成活力和水解活力存在不對(duì)應(yīng)性,并首次采用水解活力和合成活力2種純化標(biāo)準(zhǔn)對(duì)華根霉產(chǎn)生的脂肪酶進(jìn)行純化,并對(duì)分離純化的2種同工酶的一些性質(zhì)進(jìn)行了研究;發(fā)現(xiàn)橄欖油不僅是華根霉生長(zhǎng)的碳源也是合成脂肪酶和水解脂肪酶的雙重誘導(dǎo)物[11-12],而滕云進(jìn)一步研究了油脂對(duì)華根霉產(chǎn)脂肪酶的影響發(fā)現(xiàn)其對(duì)脂肪酶的水解酶活和合成酶活的影響并不相同,底物中油脂的存在與否對(duì)水解酶活影響并不大,但對(duì)其合成酶活來說就變得至關(guān)重要[13];顏興和研究了華根霉有機(jī)相的合成酶活,通過對(duì)7種脂肪酶的合成酶活、水解酶活以及在正庚烷中催化合成己酸乙酯的能力證明了脂肪酶的水解酶活和合成酶活關(guān)聯(lián)性不強(qiáng)的結(jié)論,并且得出合成酶活更能反映脂肪酶的合成能力,合成酶活高的脂肪酶催化脂合成的能力也越強(qiáng)[14];周藝博研究發(fā)現(xiàn)華根霉菌體的聚集有利于其膜結(jié)合脂肪酶發(fā)酵水平的提高。他在搖瓶水平上研究了發(fā)酵液初始量、接種量、擋板條件、裝液量、搖床轉(zhuǎn)速以及橄欖油的添加量對(duì)華根霉菌體形態(tài)的的影響并得出塊狀菌體的形成條件,王棟和滕云也在相關(guān)方向做了研究[15-17];朱增亮、王棟等人通過對(duì)發(fā)酵裝置的改進(jìn)實(shí)現(xiàn)了促進(jìn)華根霉菌體在7 L發(fā)酵罐中的聚集也提高了菌體對(duì)橄欖油的利用效率[18-19]。
目前國內(nèi)外已報(bào)道了多個(gè)根霉脂肪酶基因序列,其中已報(bào)道的Rhizopus stolonifer和Rhizopus oryzae脂肪酶基因的同源性達(dá)到80%以上。日本、德國先后用大腸桿菌、釀酒酵母和巴斯德畢赤酵母成功表達(dá)出米根霉脂肪酶基因,但國內(nèi)外對(duì)華根霉脂肪酶分子水平研究較少。王樂樂通過PCR技術(shù)首次克隆出了華根霉CCTCCM20021脂肪酶的全基因,其可以編碼一個(gè)由389個(gè)氨基酸殘基組成的蛋白質(zhì),其中26個(gè)氨基酸由信號(hào)肽編碼,前導(dǎo)序列編碼94個(gè)氨基酸,成熟肽編碼269個(gè)氨基酸。然后通過基因工程手段構(gòu)建產(chǎn)脂肪酶的前導(dǎo)肽和成熟肽的重組質(zhì)粒,并且把重組質(zhì)粒導(dǎo)入到巴斯德畢赤酵母中進(jìn)行表達(dá)用SDSPAGE分析表達(dá)的前肽脂肪酶的最大表達(dá)量為0.85 mg/mL,占蛋白分泌總量的68.3%,用PPNP法測(cè)得的脂肪酶水解酶活為121.2 U/mL;而成熟肽最大表達(dá)量為0.16 mg/mL,占分泌總量的21.6%,脂肪酶水解酶活為4.3 U/mL。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)表達(dá)的兩種脂肪酶都未進(jìn)行N末端糖基化修飾,兩種酶的最適反應(yīng)溫度及pH相近,但底物選擇性和動(dòng)力學(xué)常數(shù)相差較大,且它們?cè)诋愋镣?、正己烷和正庚烷中都表現(xiàn)出良好的穩(wěn)定性和較高的活力[20]。
華根霉在發(fā)酵中主要產(chǎn)淀粉酶和脂肪酶,除此之外研究還發(fā)現(xiàn)它還可以產(chǎn)耐酸性木聚糖酶和纖溶酶等。耐酸性木聚糖酶可以水解米粒淀粉層外圍的木聚糖,提高淀粉的利用率,而纖溶酶主要是水解纖維蛋白的酶類。陸健、曹鈺和陳堅(jiān)等人在國內(nèi)首次對(duì)中國酒曲中分離出來的華根霉產(chǎn)生的耐酸性木聚糖酶進(jìn)行純化,并和米曲霉和白曲霉產(chǎn)生的耐酸性木聚糖酶進(jìn)行比較。分析發(fā)現(xiàn)米曲霉產(chǎn)生的木聚糖酶在促進(jìn)米細(xì)胞溶解和提高原料米的利用率方面效果更優(yōu)[21];遲文鶴和王海寬等對(duì)華根霉產(chǎn)纖溶酶的工藝優(yōu)化和發(fā)酵條件等方面進(jìn)行了研究,優(yōu)化了產(chǎn)酶條件[22-23]。我們知道,米粒有谷皮、糊粉層、胚乳和胚四部分構(gòu)成,其中谷皮有果皮和種皮復(fù)合而成,其主要成分是纖維素和灰分,而糊粉層和胚里面都富含有蛋白質(zhì)和脂肪等。米粒的這些部位所含有的物質(zhì)不僅不利于酒體的釀造,還會(huì)影響酒的品質(zhì),而根據(jù)目前的研究來看,華根霉所產(chǎn)的脂肪酶,木聚糖酶和纖溶酶等可以對(duì)這些有害物質(zhì)的降解產(chǎn)生積極的作用。
華根霉在釀酒發(fā)酵中的主要作用除了提供糖化力和液化力之外,也為酒類風(fēng)味物質(zhì)產(chǎn)生做出了主要貢獻(xiàn)。它可以產(chǎn)生乳酸和脂肪酶,另外一些書籍上也說華根霉可以產(chǎn)酒精。
華根霉可以產(chǎn)乳酸等有機(jī)酸,乳酸是釀酒過程中重要的物質(zhì),它可以與乙醇結(jié)合生成酒類的重要風(fēng)味物質(zhì)乳酸乙酯。周小楠以一株野生型的產(chǎn)L-乳酸的華根霉為出發(fā)菌,研究了該菌株適宜產(chǎn)酸的條件,并以10keV氮離子對(duì)出發(fā)菌進(jìn)行誘變獲得了高產(chǎn)L-乳酸的華根霉突變菌株[24]。
華根霉可以產(chǎn)脂肪酶。脂肪酶不僅可以水解發(fā)酵底物中的油脂等,還可以催化分解底物時(shí)產(chǎn)生的酸和酒精合成酯類,而酯類是酒中重要的增香物質(zhì),對(duì)酒類風(fēng)味的形成至關(guān)重要。前面孫舒揚(yáng),周藝博等對(duì)華根霉產(chǎn)脂肪酶各方面特性進(jìn)行了深入研究,另外崔如生等人利用華根霉產(chǎn)脂肪酶具有合成己酸乙酯能力的特性制出了一種新的調(diào)味酒,用這種調(diào)味酒制成的勾兌酒比市面上一般勾兌酒的酒質(zhì)要好[25-26]。孫舒揚(yáng)通過實(shí)驗(yàn)確定了華根霉產(chǎn)全細(xì)胞脂肪酶具有合成乙酯類風(fēng)味物質(zhì)的能力,且對(duì)辛酸乙酯和癸酸乙酯的轉(zhuǎn)化率可高達(dá)95%[27]。
華根霉作為一種在釀酒工業(yè)中應(yīng)用比較廣泛的微生物,在很多酒曲中都能找到它的影子,尤其是在小曲中根霉的作用更為顯著。在大曲中存在的根霉分為黑根霉、米根霉、華根霉、無根根霉幾種。除具有假根的特征外,主要和毛霉、酵母菌共存。在制曲過程中,曲塊表面用肉眼可以觀察到的形狀如同網(wǎng)狀似的菌絲體就是根霉[4]。華根霉菌絲初為白色,隨著大曲發(fā)酵的品溫不斷上升和水分的揮發(fā)變?yōu)榛液稚蚝诤稚H绻蔑@微鏡觀察可明顯看到其孢子囊;華根霉和曲霉一樣隨著發(fā)酵的深入,菌絲插入到大曲的基質(zhì)中去。但大曲中的根霉主要是米根霉,華根霉較少。小曲中所含的微生物主要是霉菌和酵母菌,而霉菌主要是根霉。其中常見的根霉有河內(nèi)根霉,米根霉,日本根霉,爪哇根霉,華根霉等。各菌種之間主要是適應(yīng)性、生長(zhǎng)特性、糖化力強(qiáng)弱以及代謝產(chǎn)物上有所差別。目前生產(chǎn)上常用的根霉菌株為河內(nèi)根霉AS3.866、白曲根霉、米根霉和Q303根霉等[4]。華根霉也在一些研究中發(fā)現(xiàn)。曾令琴,葛毅強(qiáng)等人通過對(duì)泰國甜酒曲中的優(yōu)勢(shì)真菌進(jìn)行分離純化培養(yǎng),鑒定出泰國甜酒曲中的優(yōu)勢(shì)菌株為華根霉和米根霉以及假絲酵母屬的酵母菌[1]。通過進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)分別用米根霉和華根霉做甜酒曲與Q303根霉相對(duì)照表明,這兩種酒曲的液化力均不及Q303,做出的甜酒與Q303相比色澤更好但風(fēng)味稍差[28]。陳曉蕓對(duì)廣東客家釀酒酒曲微生物進(jìn)行鑒定分離得出興寧地區(qū)的酒曲以酒香酵母屬和華根霉為主,河源地區(qū)酒曲微生物以米根霉和假絲酵母屬為主并且通過比較發(fā)現(xiàn)興寧地區(qū)酒曲產(chǎn)酒率和糖度要高于河源地區(qū),興寧地區(qū)的酒品質(zhì)更好[29]。
新型勾兌酒是指以優(yōu)質(zhì)酒精為基礎(chǔ)酒,經(jīng)調(diào)配而成的各種白酒。新型勾兌酒具有無色透明,香味協(xié)調(diào)、自然,口味干凈,具有特定的風(fēng)格等特點(diǎn)。相對(duì)于釀造酒來說勾兌酒自身具備很多優(yōu)點(diǎn),目前在市場(chǎng)上占有很大的份額。例如,節(jié)約糧食,增香原材料豐富,含高級(jí)脂肪酸脂少,工藝簡(jiǎn)單,適應(yīng)市場(chǎng)經(jīng)濟(jì)變化等。另外隨著各種新香料物質(zhì)的發(fā)現(xiàn)和新勾兌技術(shù)的不斷創(chuàng)新,使得勾兌酒很有可能成為未來白酒的主體類型。由于種種原因,我國的勾兌酒目前存在2個(gè)突出問題:一是雜質(zhì)含量高,二是香味成分不純。這是阻礙勾兌酒發(fā)展的2個(gè)突出問題。崔如生和徐巖為解決市場(chǎng)上勾兌酒存在浮香突出,質(zhì)量不穩(wěn)定等問題,研究出利用R92華根霉生物酯化技術(shù)生產(chǎn)香料物質(zhì)制成調(diào)味酒來代替化工合成香料的方法。他們?cè)谘芯繒r(shí)發(fā)現(xiàn)R92華根霉的己酸乙酯合成能力特別強(qiáng),單純的利用己酸和乙醇作原料中試出來的結(jié)果表明己酸乙酯含量很高,但乳酸乙酯和其它微量物質(zhì)含量偏低,造成酯化液口感單一,己酸味突出。然后他們?cè)谏a(chǎn)中又添加了黃水,酒頭和酒糟等物質(zhì),豐富了酯化液中其它微量物質(zhì)的含量。結(jié)果表明,通過這種方式做出來的酯化液含有大量的酸脂等微量物質(zhì),用此做調(diào)味酒生產(chǎn)的46%Vol洋河試驗(yàn)酒比市場(chǎng)上的銷售的中檔酒在微量成分的數(shù)量和含量上都要高,并且品嘗等級(jí)分也高于市售中檔酒,成功解決了市售勾兌酒的浮香問題,找到了改善勾兌酒質(zhì)量的新方法[25-26]。
華根霉在制曲和釀酒方面都發(fā)揮著作用,它所產(chǎn)的糖化酶活性很強(qiáng),是釀造工業(yè)中常用的糖化菌;能產(chǎn)生酒精、脂肪酶類、乳酸等,??梢栽黾俞勗炀频娘L(fēng)味。華根霉的脂肪酶在酒類發(fā)酵中合成己酸乙酯、乳酸乙酯等乙酯類香味物質(zhì)的能力較強(qiáng),但如果單純用華根霉做純種曲釀造出的酒口味較單一,還需借助其它菌或者添加其他風(fēng)味物質(zhì)才能克服自身的不足。另外,對(duì)于華根霉在釀酒發(fā)酵中的單獨(dú)作用研究的還相對(duì)較少,在靈活應(yīng)用自身特性方面也還有許多需要進(jìn)一步探究的地方:
(1)通過現(xiàn)代生物技術(shù)在DNA分子水平上不斷開發(fā)和利用華根霉在釀酒中的優(yōu)良特性,發(fā)揮其更大的作用將需要更多的研究工作。
(2)結(jié)合華根霉菌體自身的生理特性和產(chǎn)酶特性來看,在固態(tài)發(fā)酵中,更適宜其菌體的生長(zhǎng)和酶活的提高。因此在研究酒類的固態(tài)發(fā)酵時(shí),華根霉具有更多的利用價(jià)值。
(3)利用華根霉產(chǎn)脂肪酶具有高活性的產(chǎn)乙酯類物質(zhì)的能力結(jié)合現(xiàn)代勾兌技術(shù)和釀酒工藝的不斷進(jìn)步,華根霉可在研制新型勾兌酒方面發(fā)揮更大的作用。
(4)在深入研究華根霉和其他菌株特性的基礎(chǔ)上,利用它們的互利關(guān)系,取長(zhǎng)補(bǔ)短,發(fā)揮各自的優(yōu)勢(shì)進(jìn)行有規(guī)律的混合發(fā)酵,生產(chǎn)出成本更低,質(zhì)量更優(yōu)異的產(chǎn)品將會(huì)具有很大的市場(chǎng)空間。
(5)由于華根霉產(chǎn)生的淀粉酶具有水解生淀粉的能力,可以考慮利用華根霉進(jìn)行生料發(fā)酵,這將對(duì)降低企業(yè)的生產(chǎn)成本很有幫助。
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