Maspin和uPA蛋白在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及意義

李美艷

子宮內(nèi)膜癌(endometrial carcinoma，EC)是起源于子宮內(nèi)膜腺體的惡性腫瘤，約占生殖道惡性腫瘤的20% ～30%，近年來發(fā)病率有明顯上升趨勢(shì)［1］。惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移是一個(gè)復(fù)雜的過程，在結(jié)直腸癌等惡性腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移過程中，Maspin和尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)起著重要作用。但在子宮內(nèi)膜癌中二者的表達(dá)情況，筆者鮮見相關(guān)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)對(duì)我院收治的子宮內(nèi)膜癌患者進(jìn)行回顧性分析，并利用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)Maspin和uPA蛋白在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)情況，探討其在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展過程中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院婦科2004年6月至2014年6月初診治療的子宮內(nèi)膜癌50例，年齡30～75歲，平均年齡49.03歲，中位年齡49.99歲。根據(jù)國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO 2009)手術(shù)病理分期標(biāo)準(zhǔn):Ⅰ期24例，Ⅱ期17例，Ⅲ期7例，Ⅳ期2例。組織學(xué)分級(jí):高分化(G1)10例，中分化(G2)27例，低分化(G3)13例;肌層浸潤(rùn):肌層浸潤(rùn)深度＜1/2肌層31例，≥1/2肌層19例;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移:術(shù)后證實(shí)有淋巴轉(zhuǎn)移10例，無淋巴轉(zhuǎn)移40例。正常對(duì)照組:選擇同期行手術(shù)治療并經(jīng)病理確診的增殖期子宮內(nèi)膜30例。所有病例術(shù)前均未進(jìn)行放化療及內(nèi)分泌治療。3組年齡差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。所有標(biāo)本均用100 ml/L甲醛溶液固定，石蠟包埋切片，厚4 μm。

1.2 方法 Maspin一抗為兔抗人多克隆抗體(北京博奧森生物技術(shù)有限公司)，uPA一抗為鼠抗人單克隆抗體(即用型)(福州邁新生物技術(shù)有限公司)，SP廣譜超敏試劑盒、PBS緩沖液、DAB酶底物顯色劑均為福州邁新生物技術(shù)公司產(chǎn)品。本實(shí)驗(yàn)染色程序嚴(yán)格按S-P染色試劑盒說明書操作。

1.3 結(jié)果判定 免疫組化結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)按陽性細(xì)胞百分比及陽性細(xì)胞染色強(qiáng)弱評(píng)分(immunohistochemical scores，IHS)。每張切片均以IHS評(píng)價(jià)得分。采用雙盲法觀察結(jié)果。Maspin和uPA的陽性表達(dá)均主要定位于細(xì)胞質(zhì)，以Maspin和uPA在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性表達(dá)。每批染色均同步設(shè)立對(duì)照，以PBS液代替一抗為陰性空白對(duì)照。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)、確切概率法和Spearman相關(guān)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Maspin和uPA蛋白在子宮內(nèi)膜癌組織中的定位Maspin和uPA的陽性表達(dá)均主要定位于細(xì)胞質(zhì)，以Maspin和uPA在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性表達(dá)。見圖 1、2。

圖1 Maspin蛋白在正常子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)(SP×200)

圖2 uPA蛋白在低分化子宮內(nèi)膜腺癌中的表達(dá)(SP×400)

2.2 Maspin和uPA蛋白在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及與臨床生物學(xué)行為的關(guān)系 Maspin蛋白及uPA蛋白的陽性表達(dá)率在手術(shù)病理分期，肌層浸潤(rùn)深度，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，之間做比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，但在年齡組陽性表達(dá)率無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見表1。

表1 Maspin和uPA蛋白在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及臨床生物學(xué)行為關(guān)系 例(%)

2.3 Maspin和uPA蛋白在子宮內(nèi)膜癌中表達(dá)的相關(guān)性 Maspin和uPA蛋白的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.341，P＜0.05)。見表2。

表2 Maspin和uPA蛋白相關(guān)性研究 例

3 討論

Maspin是在正常乳腺上皮細(xì)胞中分離得到的，定位于染色體18q21.3，編碼產(chǎn)物為絲氨酸蛋白水解酶抑制劑的一種，是一種腫瘤抑制基因［2］，其的作用不僅表現(xiàn)在可以抑制腫瘤的生長(zhǎng)，增加腫瘤細(xì)胞的粘附、降低腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)，還可以抑制新生腫瘤血管形成。作用機(jī)制:(1)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡;(2)增加黏附因子的作用;(3)抑制腫瘤新生血管生成;(4)抑制纖維蛋白溶酶原激活物的作用［3，4］。文獻(xiàn)報(bào)道顯示:Maspin抑癌作用也表現(xiàn)在口腔癌，結(jié)直腸癌等惡性腫瘤中［5］。成少華等采用免疫組化SP法對(duì)63例胃癌患者的標(biāo)本進(jìn)行研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn):Maspin在浸潤(rùn)深度達(dá)漿膜外、分化程度較低組、臨床分期晚、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組低表達(dá)，提示Maspin蛋白表達(dá)下調(diào)與胃癌的惡性演變有關(guān)［6］。本研究結(jié)果顯示:Maspin蛋白在增殖期子宮內(nèi)膜、不典型子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜癌中表達(dá)逐漸降低(86.67%，52.00%，34.00%)，同時(shí)發(fā)現(xiàn)Maspin與手術(shù)病理分期，肌層浸潤(rùn)深度，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有無均密切相關(guān)，和喬玉環(huán)等［7］研究結(jié)果基本一致，提示Maspin在抑制子宮內(nèi)膜癌腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)、侵襲、轉(zhuǎn)移等方面起著重要作用。

UPA基因定位于10號(hào)染色體長(zhǎng)臂，相對(duì)分子質(zhì)量約55 000，是一種多功能絲氨酸蛋白酶，它可以在正常細(xì)胞例如成纖維細(xì)胞，單核細(xì)胞等細(xì)胞中表達(dá)，也可以在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)，且和腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，其作用機(jī)制主要是通過其介導(dǎo)的纖維蛋白溶解系統(tǒng)來實(shí)現(xiàn)。uPA與表面受體結(jié)合后，可使無活性的纖維蛋白酶原轉(zhuǎn)化成有活性的纖維蛋白酶，纖維蛋白酶通過直接和間接作用降解細(xì)胞外基質(zhì)，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移。多項(xiàng)研究顯示:宮頸癌、乳腺癌、胃癌、結(jié)腸癌等［8-11］惡性腫瘤的患者組織中uPA水平升高，腫瘤則轉(zhuǎn)移快，易復(fù)發(fā)，生存時(shí)間短，預(yù)后差，故測(cè)定uPA的表達(dá)水平對(duì)判斷腫瘤的預(yù)后提供重要依據(jù)［12］。有研究對(duì)克隆癌的研究中發(fā)現(xiàn)，浸潤(rùn)的腫瘤上皮細(xì)胞產(chǎn)生uPAR，然而uPA由鄰近的成纖維細(xì)胞樣間質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生［10］。說明uPAR陽性表達(dá)的腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)鄰近間質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生uPA以降解間質(zhì)，促使細(xì)胞轉(zhuǎn)移侵襲。本研究發(fā)現(xiàn):uPA在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)明顯高于正常組織中(P＜0.05)。通過分析uPA與臨床病理參數(shù)間的關(guān)系，還發(fā)現(xiàn)uPA與臨床病理分期、組織學(xué)分化、肌層浸潤(rùn)深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均有相關(guān)性(P＜0.05)，提示uPA參與了子宮內(nèi)膜癌的發(fā)展、轉(zhuǎn)移等過程，可以作為預(yù)測(cè)子宮內(nèi)膜癌侵襲和轉(zhuǎn)移潛能及預(yù)后的指標(biāo)，此結(jié)果與文獻(xiàn)［13］報(bào)道一致。

Maspin具有阻止絲氨酸蛋白酶介導(dǎo)的ECM和膠原降解的能力，抑制細(xì)胞周圍的uPA對(duì)蛋白水解和細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的調(diào)節(jié)作用，從而阻止細(xì)胞浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移［14］。張偉等［15］通過在乳腺癌中的研究表明，Maspin蛋白可以使細(xì)胞的表面uPA和uPAR水平降低，對(duì)uPA起到抑制作用。本研究結(jié)果可以看出:在子宮內(nèi)膜癌中，Maspin的表達(dá)明顯降低，而uPA的表達(dá)顯著升高，且二者的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，這與文獻(xiàn)報(bào)道相符。由此可以推斷，二者可能共同參與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移等過程。

綜上所述，Maspin、uPA蛋白對(duì)子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展起到一定的作用，對(duì)分析腫瘤惡性程度及預(yù)后判斷均有意義，二者有可能為子宮內(nèi)膜癌的早期診斷和臨床治療方案提供新的思路。

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