納米氫氧化鈣根充材料對變形鏈球菌的抗菌性研究

劉 明 (吉林省人民醫(yī)院口腔科，吉林 長春 130000)

根管治療的目的是將根管內(nèi)的微生物，尤其是致病菌徹底清除，根管充填材料的抗菌性評價是衡量根管充填效果的重要指標(biāo)，具有抗菌、抑菌性的根管充填材料能顯著提高根管治療的效果。因此我們合成了納米氫氧化鈣根管充填材料，前期研究已證實其具有良好的根尖封閉性能、組織相容性和生物活性等，本實驗通過瓊脂擴(kuò)散法檢測納米氫氧化鈣根管充填材料對根管內(nèi)、尤其是感染根管內(nèi)變形鏈球菌的抗菌性，為其作為根管充填材料提供堅實的理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 實驗菌種:變形鏈球菌。

1.2 實驗材料的制備

1.2.1 實驗?zāi)＞叩闹苽?a.不銹鋼圈50個b.五柱定位器4個 經(jīng)高溫、高壓消毒。

1.2.2 制備4個時段的納米氫氧化鈣根管充填材料的圓柱體，即:28天、14天、7天前及即刻。圓柱體的要求為:高為4 mm、外徑為5 mm，各10個，放于恒溫箱中保持37℃?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 濾紙卷:10個，寬為4mm、長為38 mm，卷成外徑為5 mm，經(jīng)高溫、高壓消毒浸泡在蒸餾水中，放于恒溫箱中保持37℃?zhèn)溆谩?/p>

1.3 分組:試驗組:納米氫氧化鈣根管充填材料;陰性對照組:浸有蒸餾水的、無菌濾紙。

1.4 實驗步驟:①變形鏈球菌復(fù)蘇后，接種于沙氏培養(yǎng)皿，用高溫、高壓消毒后的五柱定位器在培養(yǎng)基上定位、并標(biāo)記;②將4個時段的納米氫氧化鈣根管充填材料柱體分別放入外周四孔、并做好標(biāo)記;將制備好的濾紙卷放入中心孔;10組;③將沙氏培養(yǎng)皿置于室溫中2 h后，再放入恒溫箱中37℃培養(yǎng)72 h;④觀察細(xì)菌的生長情況:將平板置于無反光、暗色的物體表面，用游標(biāo)卡尺精密測量抑菌區(qū)域大小(抑菌區(qū)域是指細(xì)菌生長的內(nèi)緣到材料的外緣之間的最短距離);每個標(biāo)本測量4個十字固定點的數(shù)值，精確度為0.01 mm，取10組的平均值;⑤結(jié)果判定:參照藥敏實驗中抗菌、抑菌區(qū)域的測量標(biāo)準(zhǔn)，若抗菌、抑菌區(qū)域≧0.5 mm，即有抗菌、抑菌作用，若抑菌區(qū)域﹤0.5 mm，則無抗菌、抑菌作用，記錄為0［1］。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析:用SPSS 10.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，因數(shù)據(jù)變量為非正態(tài)分布，采用多個樣本比較的秩和檢驗。

2 結(jié)果

納米氫氧化鈣根管充填材料對變形鏈球菌的抗菌區(qū)域(mm) 見表1。

表1 納米氫氧化鈣根管充填材料對變形鏈球菌的抗菌區(qū)域(mm)

3 討論

臨床上常用的根管充填材料的主要成分是氫氧化鈣和丁香油氧化鋅，丁香油氧化鋅糊劑在根管充填后會有短暫的炎性反應(yīng)，引起不適、疼痛、腫脹、使患者不易接受［2］;氫氧化鈣糊劑因具有強(qiáng)堿性，能有效地清除感染根管內(nèi)的病原菌;又因具備良好的組織生物相容性和可吸收性，能誘導(dǎo)牙體組織進(jìn)行礦化、修復(fù)，但穩(wěn)定性差［3］，因此我們合成了納米氫氧化鈣材料根管充填材料，使其不僅具有氫氧化鈣的抗菌、抑菌作用，又兼具了納米材料的表面能作用，提高材料與病原菌的接觸面積、提高材料的韌性和穩(wěn)定性。根管治療的目的是清除、抑制感染根管內(nèi)的病源菌，嚴(yán)密封閉根管，改變殘留病原菌的生存條件和增殖能力。因此，在根管充填時使用具有抗菌、抑菌性強(qiáng)的根管充填材料，能更好地消除根管內(nèi)殘留的病原菌，根管充填材料的抗菌性、抑菌性是影響根管充填效果的至關(guān)重要指標(biāo)。

本實驗采用瓊脂擴(kuò)散法檢測納米氫氧化鈣根管充填材料對變形鏈球菌的抗菌、抑菌性［2］。瓊脂擴(kuò)散法是檢測藥物敏感實驗的常規(guī)方法，已被廣泛應(yīng)用，最大的優(yōu)點是可以直接觀察到與所檢測的材料相接觸的微生物生長情況，能較客觀地表達(dá)納米氫氧化鈣根管充填材料的抗菌、抑菌能力。

感染根管中常檢測出的病原菌有變形鏈球菌、糞腸球菌、金黃色葡萄球菌、念珠菌等，其中變形鏈球菌檢出率較高，因此我們選擇變形鏈球菌菌種作為實驗對象檢測納米氫氧化鈣根充材料的抗菌能力。在本實驗中研究的4個時間段上，即刻制備的納米氫氧化鈣根管充填材料的抗菌性、抑菌性最強(qiáng)，隨著時間的遷移其抗菌性、抑菌性也逐漸減弱，但其仍具有抗菌、抑菌作用，這一特點完全符合根管充填材料的要求。

實驗結(jié)果顯示納米氫氧化鈣根管充填材料的抗菌性、抑菌性既依賴于氫氧化鈣的pH值，又依賴于材料中的納米粒子所發(fā)揮的表面能作用。當(dāng)材料中pH值保持在一個較高的水平時，即有殺菌、抑菌的活性，即刻制備的納米氫氧化鈣根管充填材料的pH值高達(dá)12.2，即使2周后該材料的pH值下降為9.5，但仍具有抗菌、抑菌能力［4］。納米微粒具有較高的表面能，對微生物具有很強(qiáng)的吸附能力，而且能吸附與細(xì)菌代謝相關(guān)的酶，可以直接干擾細(xì)菌的代謝、控制細(xì)菌的生長，卻不破壞根管內(nèi)的微生態(tài)環(huán)境，納米微粒在抗菌性、抑菌性方面有獨(dú)特的作用。本實驗結(jié)果顯示納米氫氧化鈣根管充填材料在即刻制備時段對變形鏈球菌具有最強(qiáng)的抗菌性、抑菌性，隨著時間的延長還具有緩慢持續(xù)的抗菌、抑菌作用，兼具了氫氧化鈣和納米材料的抗菌、抑菌性，二者協(xié)同作用，提高了抗菌、抑菌效果，納米氫氧化鈣根管充填材料適于作為根管充填材料。

［1］ 李怡源，陳 進(jìn)，胡 琛.兩種根管糊劑用于根管消毒的療效比較［J］.醫(yī)學(xué)理論與實踐，2014，27(15):2037.

［2］ 項 健.三種根管封閉劑抗菌性能的體外對比實驗［J］.南通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)，2013，(5):409.

［3］ 郭佳杰，仇麗鴻.氫氧化鈣在根管消毒中的作用機(jī)制［J］.中國實用口腔科雜志，2013，6(9):560.

［4］ 丁 虹，孫明磊.氫氧化鈣碘仿糊劑在根管消毒中的應(yīng)用［J］.中國實用醫(yī)藥，2011，8(11):43.