羊水細胞染色體核型分析在孕婦產(chǎn)前診斷中的應用分析

張惠清

羊水細胞染色體核型分析在孕婦產(chǎn)前診斷中的應用分析

張惠清

目的 分析羊水細胞染色體核型分析在孕婦產(chǎn)前診斷中的應用價值。方法 選取產(chǎn)檢的孕婦40例，均為孕18～24周。在孕婦本人知情同意下，在B超介導情況下給予羊膜腔穿刺抽取羊水，并進行細胞培養(yǎng)，仔細觀察細胞生長狀況，準確收獲細胞后進行核型分析。結果 40例孕婦均成功進行羊水穿刺細胞培養(yǎng)，成功率為100%。其中染色體核型正常36例，染色體核型異常4例；2例21-三體綜合征孕婦在確診后進行引產(chǎn)手術終止妊娠，2例2N/4N四倍體核型孕婦接受進一步臍帶血檢查后診斷為核型正常。28例年齡＜35歲孕婦均未檢出異常染色體核型。另外12例年齡＞35歲孕婦中檢出4例染色體核型異常。結論 目前，產(chǎn)前診斷異常胎兒必不可少的方法就是羊水細胞染色體核型分析，該診斷方法能幫助及早發(fā)現(xiàn)和診斷異常胎兒，對優(yōu)生優(yōu)育、提高我國人口素質(zhì)具有重要意義。

羊水細胞；染色體核型分析；產(chǎn)前診斷；應用價值

染色體疾病作為一種常見遺傳病，約占遺傳性疾病的10%。這類先天性疾病不能治愈，對家庭、社會都帶來沉重負擔[1]。產(chǎn)前診斷尤其重要，自1956年羊膜腔穿刺技術的研發(fā)以來，羊水細胞染色體核型分析作為一種有效的產(chǎn)前診斷手段已被廣泛應用于臨床產(chǎn)檢中，能有效診斷一系列染色體異常性疾病，包括染色體數(shù)量異常、染色體異位或倒位、染色體重復或缺失、染色體變異、胎兒畸形等[2]。本研究對羊水細胞染色體核型分析在產(chǎn)前診斷中的實際應用情況進行分析，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年1月～2013年12月在廣西貴港市婦幼保健院優(yōu)生遺傳科產(chǎn)檢的40例孕婦，年齡20～40歲，平均年齡（26.8±1.2）歲；孕周18～24周，平均孕周（18.5± 1.5）周。所有入組孕婦均經(jīng)本人知情同意。

1.2 研究方法 在B超引導下通過羊膜腔穿刺，先使用無菌注射器抽取2mL羊水棄去，再用2支無菌注射器（10mL）抽吸20mL羊水標本，實驗室進行細胞培養(yǎng)。在超凈臺中使用無菌離心管對羊水標本進行分裝，以1200r/min速度離心10min后去除上清液，保留0.5mL羊水和細胞沉淀物，混勻后分別接種于盛有2mL羊水培養(yǎng)液的斜面培養(yǎng)管中，37℃、5%CO2環(huán)境的培養(yǎng)箱中靜態(tài)培養(yǎng)6d。在顯微鏡下觀察有成堆或散在梭形細胞緊貼壁生長，換液繼續(xù)培養(yǎng)，隔天觀察細胞的生長情況，若細胞增殖非常旺盛、分裂細胞較多時則可收獲。若細胞增殖不同步，有7～9個大克隆時即可傳代，第2天在顯微鏡下觀察帶細胞密度合適、梭形細胞胞體發(fā)亮且折光性好、細胞間連接不密，及時收獲。加入1滴秋水仙素（25μg/mL）繼續(xù)培養(yǎng)4h后收獲細胞。首先將培養(yǎng)液緩慢倒入離心管內(nèi)，滴入0.2mL左右的0.25%胰酶-EDTA消化液，再加入0.85%氯化鈉溶液至2mL，放入37℃的恒溫箱中恒溫5min，在顯微鏡下確認細胞脫壁后吸出液體至離心管內(nèi)，之后使用37℃預熱生理鹽水沖洗瓶壁至離心管中，以1200r/min速度離心10min，去除上清液，保留0.5mL，輕彈管底，加入1mL已經(jīng)預熱的低滲液（0.4%拘櫞酸鈉∶0.4%氯化鉀= 1∶1），低滲6min后加入10滴固定液（甲醇∶冰乙酸=3∶1）混勻，精致6min后再次以1200r/min速度離心10min，去除上清液，加入4mL固定液混勻固定25min，再次離心去除上清液，重復上一固定步驟再固定1次，離心去除上清液后觀察沉淀細胞量，加入固定液，調(diào)整滴片濃度，常規(guī)G顯帶。顯微鏡下技術分散良好的30個中期分裂相，異常核型技術50個分裂相，進行核型分析。

2 結果

2.1 羊水培養(yǎng)與核型分析結果 40例孕婦均成功進行羊水穿刺細胞培養(yǎng)，成功率為100%。40例孕婦細胞培養(yǎng)核型分析結果表明，36例染色體核型正常，4例染色體核型異常，其中2例21-三體綜合征孕婦在確診后進行引產(chǎn)手術終止妊娠，2例2N/4N四倍體核型孕婦接受進一步臍帶血檢查后診斷為核型正常。

2.2 年齡因素與染色體非整倍體 40例孕婦中28例年齡＜35歲，均未檢出異常染色體核型。另外12例年齡＞35歲孕婦中檢出4例染色體核型異常。

3 討論

新生兒出生缺陷指的是在其出生時就已經(jīng)存在的外在、內(nèi)在結構或功能異常，先天畸形、代謝性疾病、智力障礙等都屬于出生缺陷，多數(shù)是由于遺傳或環(huán)境或兩者共同作用導致的，其遺傳因素中最常見的就是染色體異常[3]。研究數(shù)據(jù)表明我國每年約有10萬新生兒存在染色體異常，活產(chǎn)新生兒中染色體核型異常約為0.5%，其中唐氏綜合征發(fā)病率占0.12%～0.17%，性染色體異常發(fā)病率約占0.1%，具有產(chǎn)前診斷指征高風險孕婦妊娠胎兒染色體核型異常檢出率更是高達3.8%～7.7%[4]。有效準確的產(chǎn)前診斷染色體核型異常的胎兒能及時終止妊娠，有利于優(yōu)生優(yōu)育[5]。羊水細胞染色體核型分析能起到產(chǎn)前明確診斷作用，該方法操作簡便、準確性高、并發(fā)癥少，是目前最經(jīng)典的檢查染色體異常的方法。本組40例孕婦經(jīng)羊水細胞核型分析發(fā)現(xiàn)4例染色體異常，其中2例為21-三體綜合征，2例為2N/4N四倍體核型。同時研究還發(fā)現(xiàn)4例染色體檢出異常孕婦均為35歲以上的高齡孕婦。21-三體綜合征在胎兒畸形中比較常見，有研究發(fā)現(xiàn)其發(fā)病率與孕婦年齡呈正比，尤其是35歲以上孕婦發(fā)病率明顯升高[6-7]。臨床產(chǎn)檢中要注意35歲以上孕婦務必進行羊水穿刺染色體檢查，這也是羊水穿刺、細胞培養(yǎng)的確切指征之一[8]。

綜上所述，開展產(chǎn)前診斷工作非常必要，應建議所有孕婦在孕中期進行產(chǎn)前篩查，普及產(chǎn)前篩查知識，提高產(chǎn)婦自身對妊娠的認識，以期達到優(yōu)生優(yōu)育的目的。

[1] 趙欣榮，程蔚蔚，王慧，等.2635例羊膜腔穿刺產(chǎn)前診斷臨床研究[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志，2009，17(9)：60．

[2] 戚其瑋，王雪倩，張紅巖，等.羊水細胞染色體在高危妊娠產(chǎn)前診斷中的應用[J].中華醫(yī)學遺傳學雜志，2011，28（4）：462-464．

[3] 高雪峰，邵敏杰，楊麗萍，等.羊水細胞培養(yǎng)染色體核型分析在產(chǎn)前診斷中的意義[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志，2009，17(2)：46．

[4] 楊燦鋒，耿金花，王峻峰，等.羊水細胞染色體分析在產(chǎn)前診斷中的應用[J].中國婦幼保健雜志，2009，24（32）：4602-4604．

[5] 韋美德，蘇國生，趙桓，等.羊水檢查在產(chǎn)前診斷中的臨床應用價值[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志，2009，17(2)：131．

[6] 高菲菲，王酉，項靜英.產(chǎn)前診斷分子遺傳學方法進展[J].同東醫(yī)藥，2010，50(40)：110.

[7] 胡美紅，劉雨生，何國平，等.羊水細胞培養(yǎng)及染色體核型分析在產(chǎn)前診斷中的應用[J].臨床輸血與檢驗,2011，13(1)：23-25.

[8] 石鑫瑋，劉海意，喬福元，等.熒光原位雜交技術及染色體核型分析在產(chǎn)前診斷中的應用價值[J].中國實用婦科與產(chǎn)科雜志，2011，27（2）：125-127．

10.3969/j.issn.1009-4393.2015.5.071

廣西 537100 廣西貴港市婦幼保健院優(yōu)生遺傳科 （張惠清）