QuEChERS-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時檢測豬肉中121種獸藥

郭海霞, 肖桂英, 張禧慶, 王明林, 李 立, 冷 蕾, 高洪良

(1. 煙臺杰科檢測服務(wù)有限公司, 山東 萊陽 265231; 2. 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與

研究論文

QuEChERS-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時檢測豬肉中121種獸藥

郭海霞1*, 肖桂英1, 張禧慶1, 王明林2, 李 立3, 冷 蕾1, 高洪良1

(1. 煙臺杰科檢測服務(wù)有限公司, 山東 萊陽 265231; 2. 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與

工程學(xué)院, 山東 泰安 271018; 3. 中國檢驗檢疫科學(xué)研究院, 北京 100123)

建立了QuEChERS結(jié)合超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-MS/MS)同時檢測豬肉中β-激動劑類、氯霉素類、阿維菌素類、磺胺類、氟喹諾酮類、硝基咪唑類、頭孢類、四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類和聚醚類等10余類121種獸藥的分析方法。樣品經(jīng)Na2EDTA-McIlvaine緩沖溶液(pH=4)和乙腈提取,無水硫酸鈉鹽析,上清液分為兩組,分別用不同的QuEChERS凈化劑凈化。使用電噴霧離子(ESI)源,在多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)掃描模式下檢測。5種獸藥采用內(nèi)標(biāo)法定量,其余116種獸藥采用外標(biāo)法定量。121種獸藥在0.02～40 μg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r>0.99),定量限(S/N=10)為0.05～10 μg/kg。LOQ加標(biāo)水平下,121種獸藥中8種獸藥的回收率為41.7%～59.6%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.7%～13.5%; 10種獸藥的回收率為122.6%～163.2%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.6%～14.8%;其余103種獸藥的回收率為60.3%～118.3%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.4%～16.7%。該方法可對性質(zhì)差別大的多類別獸藥同時進(jìn)行分析,在節(jié)約成本和保證檢測周期方面具有突出的優(yōu)勢。

QuEChERS;超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜;分組凈化;獸藥;豬肉

豬肉是我國消費(fèi)量最大的肉類產(chǎn)品,但我國的豬肉安全狀況并不容樂觀,獸藥殘留是影響其安全性的重要因素之一[1]。造成豬肉獸藥殘留超標(biāo)的根本原因是生豬養(yǎng)殖長期以農(nóng)戶散養(yǎng)和小規(guī)模豬場為主,存在養(yǎng)殖技術(shù)落后、安全意識薄弱、用藥不規(guī)范、不遵守休藥期等問題。目前我國對豬肉安全的監(jiān)控較多依賴對終端產(chǎn)品的檢驗,未形成針對養(yǎng)殖、生產(chǎn)全過程的在線控制安全保障體系。這決定了檢測幾乎是保證食品安全的最后和唯一的手段。

QuEChERS技術(shù)因高效、快速、成本低等特點(diǎn),被廣泛地應(yīng)用于農(nóng)藥檢測領(lǐng)域[2],近年來國內(nèi)外學(xué)者將該技術(shù)引入到了獸藥檢測領(lǐng)域,并已發(fā)表了大量文章[3,4]。宮小明等[5]使用QuEChERS結(jié)合LC-MS/MS測定了動物源性食品中阿維菌素類藥物。卜明楠等[6]使用QuEChERS結(jié)合LC-MS/MS同時檢測蝦肉中的72種獸藥。研究人員通過不斷的改進(jìn),嘗試同時檢測更多類別的獸藥。本文通過一次提取分步凈化的方式,實現(xiàn)了10余類性質(zhì)差別較大的獸藥的同時分析,可在24 h內(nèi)檢測40個樣本中的121種獸藥,極大地降低了費(fèi)用,縮短了檢測周期,對生豬養(yǎng)殖和屠宰廠的質(zhì)量安全控制具有較高的實用價值。

1 實驗部分

1.1 儀器和試劑

Agilent 6490三重串聯(lián)四極桿液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國Agilent公司); L535R-1低速冷凍離心機(jī)(長沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司); KQ-500E超聲波清洗機(jī)(昆山市超聲儀器有限公司); 3205食品加工機(jī)(美國Braun公司); Vortex-enie2渦旋混合儀(美國Scientific Industries公司); OA-SYS氮吹儀(美國Organomation公司)。

十八烷基硅烷(C18)、Primary Secondary Amine(PSA)、氨基(NH2)吸附劑(美國Agilent公司);石墨化炭黑(GCB,美國Supelco公司);無水硫酸鈉(分析純,德國Merck公司);乙腈、甲醇(HPLC級,德國Merck公司);N,N-二甲基甲酰胺(HPLC級,美國Supelco公司);冰乙酸(HPLC級,中國科密歐公司);甲酸(優(yōu)級純,上海安譜公司);乙酸銨(優(yōu)級純,美國Riedel-dehaen公司); Na2EDTA52H2O(分析純,天津瑞金特化學(xué)品有限公司);磷酸氫二鈉(分析純,天津標(biāo)準(zhǔn)科技有限公司);檸檬酸(分析純,天津市化學(xué)試劑三廠);獸藥標(biāo)準(zhǔn)品購自美國Sigma或德國DR公司,純度均大于95%。

1.2 溶液的配制

分別稱取10 mg(精確至0.01 mg)標(biāo)準(zhǔn)化合物,四環(huán)素類化合物、喹諾酮類化合物、左旋咪唑、乙胺嘧啶、氯丙嗪、曲吡那敏和敵菌凈先用少量0.1%(v/v,下同)甲酸水溶解,再用乙腈定容至100 mL;頭孢類化合物和氟尼辛先用少量水溶解,再用乙腈定容至100 mL;硝基咪唑類化合物先用少量N,N-二甲基甲酰胺溶解,再用乙腈定容至100 mL;交沙霉素用甲醇溶解定容至100 mL,其余標(biāo)準(zhǔn)品用乙腈溶解定容至100 mL,分別得到121種質(zhì)量濃度為100 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。頭孢類化合物的標(biāo)準(zhǔn)儲備液需要避光保存在-18 ℃以下冰箱內(nèi),其余標(biāo)準(zhǔn)儲備液于4 ℃避光保存,保質(zhì)期為6個月。將阿維菌素類化合物、聚醚類化合物、甲芐喹酯、癸氧喹酯用乙腈配制成混合標(biāo)準(zhǔn)工作液;將氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素、琥珀氯霉素、二硝托胺用0.1%甲酸水-0.1%甲酸乙腈(40∶60, v/v)溶液配制成混合標(biāo)準(zhǔn)工作液;其余的化合物用0.1%甲酸水-0.1%甲酸乙腈(40∶60, v/v)溶液配制成混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。混合標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度分別為0.5、1.0、2.0、4.0和8.0倍定量限,保質(zhì)期為1周,保存條件與對應(yīng)的儲備液相同。將極不溶于水的聚醚類化合物、阿維菌素類化合物、甲芐喹啉和癸氧喹酯歸為Q1組,該組用高比例有機(jī)相溶液定容。其余112種化合物歸為Q2組。

準(zhǔn)確稱取37.2 g Na2EDTA52H2O、10.9 g磷酸氫二鈉和12.9 g檸檬酸于燒杯內(nèi),加入超純水900 mL,用玻璃棒不停地攪拌,用1 mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至4.0,轉(zhuǎn)移至容量瓶，用超純水定容至1 000 mL,混合均勻,即為0.1 mol/L的Na2EDTA-McIlvaine緩沖溶液。

1.3 樣品處理方法

稱取4.00 g勻漿后的樣品,置于50 mL聚丙烯離心管中,加入2 mL 0.1 mol/L的Na2EDTA-McIlvaine緩沖溶液和16 mL乙腈,以2 000 r/min的轉(zhuǎn)速渦旋混合20 s以上,加入7 g無水硫酸鈉(使用前于650 ℃烘烤4 h),混勻,超聲提取10 min,以4 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心5 min后,取上清液，進(jìn)行分組凈化。

Q1組凈化:取5 mL上清液至15 mL離心管中,加入1.0 g無水硫酸鎂(需在使用前于550 ℃烘烤5 h)、100 mg C18和100 mg PSA,以2 000 r/min的轉(zhuǎn)速渦旋混合20 s以上,以4 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心5 min后,準(zhǔn)確移取2 mL上清液至3 mL玻璃管中,在40 ℃下用氮?dú)獯蹈伞ＪＳ嗟臍堅屑尤?.5 mL乙腈-5 mmol/L乙酸銨(90∶10, v/v)溶液,過0.22 μm的聚四氟乙烯膜,濾液用于檢測聚醚類化合物、阿維菌素類化合物、甲氧芐喹酯和癸氧喹酯。

Q2組凈化:取5 mL上清液至15 mL離心管中,加入5 g無水硫酸鈉(需在使用前于650 ℃烘烤4 h)和200 mg C18,加入100 μL冰乙酸,以2 200 r/min的轉(zhuǎn)速渦旋混合20 s以上,以4 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心5 min,準(zhǔn)確移取2 mL上清液至3 mL玻璃管中,40 ℃以下氮?dú)獯蹈伞堅屑尤?.5 mL 1%甲酸乙腈-1%甲酸水(40∶60, v/v)溶液,過0.22 μm的聚四氟乙烯膜,濾液用于檢測剩余獸藥。

1.4 色譜條件

色譜柱為ACQUITYUPLC HSS T3(100 mm×2.1 mm, 1.7 μm);柱溫為35 ℃;樣品室溫度為22 ℃;流速為0.4 mL/min;進(jìn)樣量為2 μL;正離子模式流動相:0.1%甲酸-5 mmol/L乙酸銨(A2)、甲醇(B2);負(fù)離子模式流動相:水(A1)、甲醇(B2)。附表1(http://www.chrom-China.com/UserFiles/File/1509016附表.doc)中序號為1～4的藥物的梯度洗脫程序詳見表1,序號為78～84、118和119的藥物的梯度洗脫程序詳見表2,其余藥物的梯度洗脫程序詳見表3。

1.5 質(zhì)譜條件

離子源為電噴霧離子源(ESI+或ESI-);動態(tài)多反應(yīng)監(jiān)測(dynamic MRM)模式。毛細(xì)管電壓為2.5 kV;離子霧化氣壓力為137.89 kPa; 裂解電壓為380 V;干燥氣溫度為220 ℃;干燥氣流速為15 L/min;鞘氣溫度為350 ℃;鞘氣流速為12 L/min。其他質(zhì)譜參數(shù)見附表1(http://www.chrom-China.com/UserFiles/File/1509016附表.doc)。

表 1 梯度洗脫程序1Table 1 Program 1 of the gradient elution

表 2 梯度洗脫程序2Table 2 Program 2 of the gradient elution

表 3 梯度洗脫程序3Table 3 Program 3 of the gradient elution

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品前處理條件的選擇和優(yōu)化

2.1.1 提取劑的選擇

本研究中涉及的121種獸藥包含氯霉素類、β-激動劑類、磺胺類、氟喹諾酮類、硝基咪唑類、大環(huán)內(nèi)酯類、阿維菌素類、聚醚類、頭孢類、四環(huán)素類等化合物,種類多,化學(xué)性質(zhì)差異較大。乙腈對本研究所測的大部分獸藥有很好的提取效率,但四環(huán)素類化合物和頭孢氨芐等極性較強(qiáng)的化合物,在乙腈中的溶解度很低,用乙腈提取回收率均小于10%。四環(huán)素類化合物易與多價陽離子形成配合物,一般采用含有EDTA的McIlvaine緩沖溶液進(jìn)行提取[7,8]。氟喹諾酮類化合物和四環(huán)素類化合物屬于酸堿兩性化合物,在酸性或堿性條件下提取效率高[9]。試驗結(jié)果表明,使用pH 4.0的0.1 mol/L的Na2EDTA-McIlvaine緩沖溶液與乙腈的混合溶液作為提取劑,可以實現(xiàn)上述121種獸藥的同時提取。本研究比較了緩沖溶液與乙腈體積比分別為0.5∶16、1∶16、2∶16、3∶16和4∶16時提取劑的提取效率,發(fā)現(xiàn)體積比為0.5∶16和1∶16時,四環(huán)素類化合物的回收率不穩(wěn)定;體積比為2∶16時,四環(huán)素類化合物的回收率能達(dá)到90%以上;體積比為3∶16和4∶16時,四環(huán)素類化合物的回收率提升不明顯。不同體積比的提取劑對其他化合物的提取效率無顯著差異。因為緩沖溶液的量越多,對后續(xù)除水和凈化造成的困難越大,故本研究選擇2 mL的0.1 mol/L的Na2EDTA-McIlvaine緩沖溶液和16 mL乙腈作為提取劑。

2.1.2 除水劑的選擇

比較了無水硫酸鈉、無水硫酸鎂、氯化鈉的除水效果。4 g豬瘦肉中約含70%左右的水,用2 mL 0.1 mol/L的Na2EDTA-McIlvaine緩沖溶液和16 mL乙腈混合溶液提取,離心后所得上清液含水量約為23%。用5 mL乙腈-水(77∶23, v/v)進(jìn)行除水效果的驗證。2～5 g無水硫酸鈉可除掉其中43%～50%的水,不同量的無水硫酸鈉除水效率無明顯差異。1.5 g無水硫酸鎂可除掉97%左右的水(見表4),瞬時放熱溫度可達(dá)到65 ℃以上,熱不穩(wěn)定的獸藥如地美硝唑、紅霉素、頭孢氨芐等獸藥回收率降至10%以下。采用氯化鈉分層除水,四環(huán)素類化合物、氟喹諾酮類化合物、林可霉素等極性化合物大部分分配在水層,此類化合物基本無回收。

表 4 不同質(zhì)量無水硫酸鎂對提取液的除水效率(n=6)Table 4 Dependence of water removal efficiency for the extract on the quantity of anhydrous magnesium sulfate (n=6)

/: not detected.

綜上,本研究用無水硫酸鈉和無水硫酸鎂進(jìn)行分步除水。無水硫酸鎂對四環(huán)素類化合物有吸附,可能是四環(huán)素類化合物與Mg2+結(jié)合,形成配合物,因此凡涉及四環(huán)素類化合物檢測的步驟均不使用無水硫酸鎂除水。在加入提取液振蕩混勻后用無水硫酸鈉進(jìn)行第一步除水。當(dāng)無水硫酸鈉的量小于6 g時提取液產(chǎn)生分層,四環(huán)素類化合物、氟喹諾酮類化合物、林可霉素等水溶性化合物回收率變低,無水硫酸鈉量越少,水層量越多,回收率越低。無水硫酸鈉的量為7 g時,可除掉50%左右的水。第一步除水后,離心所得上清液分為兩組(Q1和Q2組),分別用無水硫酸鎂、無水硫酸鈉進(jìn)行第二步除水。無水硫酸鎂對聚醚類化合物、阿維菌素類化合物、甲氧芐喹啉、癸氧喹酯和西馬特羅無影響。Q1組待凈化液約含0.6 g左右的水,凈化時采用1 g無水硫酸鎂除水,除水過程中最高溫度為45 ℃,可除掉100%的水。Q2組中包含四環(huán)素類化合物,凈化時采用5 g無水硫酸鈉除水,除水后樣液中約含5%的水。

2.1.3 凈化吸附劑的選擇

本研究比較了C18、PSA、NH2和GCB 4種吸附劑對121種獸藥的凈化效果。通過前處理步驟獲得待凈化的提取液,加入無水硫酸鎂除水后,用該溶液配制10 μg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液,各取5 mL,分別加入50、100、200、300、400和500 mg上述吸附劑,凈化后取樣進(jìn)行液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測。C18能夠吸附脂肪等強(qiáng)疏水性干擾物,當(dāng)單獨(dú)使用C18的量增加到300 mg時,β-群勃龍、氯丙嗪、泰地羅新等8種獸藥的回收率低于70%。PSA和NH2的作用機(jī)理相似,都能夠去除極性干擾物質(zhì)[10],加入量為50 mg時即對四環(huán)素類、氟喹諾酮和頭孢類等化合物有明顯的吸附,NH2吸附劑在凈化的同時會對部分磺胺藥物引入新的干擾峰,影響目標(biāo)物的定性。PSA對酸性物質(zhì)有吸附[11],加入酸可以降低PSA對藥物的吸附,但凈化效果也變差。如圖1所示,用PSA凈化時同時加入100μL冰乙酸,干擾離子m/z160.0的峰高是不加酸時的7倍多。GCB對平面結(jié)構(gòu)分子有很強(qiáng)的親和性,能有效地去除色素和甾醇,但同時也吸附具有平面結(jié)構(gòu)的獸藥[12], 50 mg GCB對87種獸藥有超過20%的吸附。C18、PSA、NH2和GCB吸附獸藥的數(shù)目分別為8、21、22和87個。

圖 1 冰乙酸對PSA凈化的影響Fig. 1 Effect of the acetate acid in the purification with PSA

綜上,本研究選取C18和PSA作為凈化吸附劑。當(dāng)C18和PSA單獨(dú)使用時對金剛烷胺、阿奇霉素、泰樂菌素、頭孢類化合物、非諾特羅、特布他林、沙丁胺醇、噴布特羅和氯丙胺磷均沒有吸附,但兩者組合使用時會對這些藥物產(chǎn)生吸附。將組合填料中的PSA降至20 mg時,金剛烷胺的回收率仍低于30%,因此Q2組使用C18作為凈化劑,最佳添加量為200 mg。Q2組凈化時加入100 μL冰乙酸,以降低四環(huán)素類化合物在水相中的溶解度[13]。C18和PSA組合吸附劑對Q1組獸藥無吸附,通過回收試驗確認(rèn)C18和PSA最佳組合量為100 mg/100 mg。

2.2 色譜條件的選擇和優(yōu)化

氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素、氟甲砜霉素、二硝托胺、地克珠利和尼卡巴嗪采用ESI-模式電離,使用水和甲醇作為流動相。其余114種獸藥采用ESI+模式電離,流動相水相中加入0.1%甲酸,可明顯改善酸堿化合物的峰形,流動相水相中加入乙酸銨可增強(qiáng)化合物的保留性。阿維菌素類化合物、聚醚類化合物、甲氧芐喹酯、癸氧喹酯屬于弱極性化合物,在反相色譜柱上的保留性強(qiáng),梯度洗脫中有機(jī)相的比例高,梯度比例見表2。

本研究考察了ACQUITYUPLC HSS T3 (100 mm×2.1 mm, 1.7 μm,簡稱T3柱)和Poroshell 120 EC-C18 (100 mm×2.1 mm, 2.7 μm,簡稱EC-C18柱)兩種色譜柱的靈敏度和分離效率。發(fā)現(xiàn)大部分獸藥在T3柱上的靈敏度比EC-C18柱上高1～5倍,T3柱粒徑較小,分析速度快,可控制在10 min內(nèi),使用T3柱比EC-C18柱節(jié)約近一半的分析時間,因此本研究選擇使用T3柱。ESI+、ESI-模式下分析獸藥的總離子流圖見圖2。

圖 2 豬肉樣本中添加121種獸藥的總離子流圖Fig. 2 Total ion chromatograms of the pork samples spiked with 121 veterinary drugs a. the pork sample spiked with avermectin, ivermectin, moxidectin, eprinomectin, lasalocid, monensin, salinomycin, nequinate and decoquinate； b. the pork sample spiked with chloramphenicol, chloramphenicolsuccinate, florfenicol, thiamphenicol and dinitolmide； c. the pork sample spiked with 107 veterinary drugs in addition to the drugs listed in (a) and (b).

2.3 樣品基質(zhì)效應(yīng)的評價

按照公式:基質(zhì)效應(yīng)(ME)=(1-樣品基質(zhì)中添加相同含量化合物的響應(yīng)值/純?nèi)軇┲谢衔锏捻憫?yīng)值)×100%計算121種獸藥的基質(zhì)效應(yīng)。ME為正值表示增強(qiáng)的基質(zhì)效應(yīng),負(fù)值表示抑制的基質(zhì)效應(yīng),絕對值越大表示基質(zhì)效應(yīng)越強(qiáng)。86種化合物屬于弱基質(zhì)效應(yīng)(-10%≤ME≤10%), 11種化合物屬于增強(qiáng)的強(qiáng)基質(zhì)效應(yīng)(ME>10%), 24種化合物屬于抑制的強(qiáng)基質(zhì)效應(yīng)(ME<-10%),具體見表5。為減少基質(zhì)效應(yīng)的影響,建議樣品檢測時采用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行定量。

2.4 線性關(guān)系及檢出限

采用標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的制作,以目標(biāo)化合物定量離子的峰面積(Y)為縱坐標(biāo),質(zhì)量濃度(X, μg/L)為橫坐標(biāo)繪制工作曲線,得到線性回歸方程。相關(guān)系數(shù)r均大于0.99,表明各化合物在相應(yīng)的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。121種獸藥的定量限為0.05～10.0 μg/kg(見表5)。能夠滿足中國、日本、歐盟的食品安全標(biāo)準(zhǔn)要求。

2.5 回收率及精密度

在豬肉空白樣品中添加1倍、2倍和5倍定量限水平的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),分別進(jìn)行6次平行添加回收試驗,以標(biāo)準(zhǔn)曲線定量,結(jié)果見表5。氯丙嗪、氟尼辛、芬苯達(dá)唑、癸氧喹酯、頭孢噻呋、土霉素、噴布洛爾和非諾特羅的回收率為41.7%～59.6%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.7%～13.5%;氟苯尼考、氟甲喹、惡喹酸、達(dá)氟沙星、馬波沙星、氧氟沙星、培氟沙星、西諾沙星、伊維菌素和氨基比林的回收率為122.6%～163.2%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.6%～14.8%;其他103種獸藥的回收率范圍為60.3%～118.3%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.4%～16.7%。結(jié)果表明該方法有良好的重現(xiàn)性。

表 5 121種化合物的回歸方程、相關(guān)系數(shù)、定量限、加標(biāo)回收率、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=6)和基質(zhì)效應(yīng)Table 5 Regression equations, correlation coefficients (r), limits of quantitations (LOQs), spiked recoveries (Recs), RSDs (n=6), matrix effects of the 121 compounds

表 5 (續(xù))Table 5 (Continued)

表 5 (續(xù))Table 5 (Continued)

Y: peak area；X: mass concentration, μg/L.

表 6 本方法與國家標(biāo)準(zhǔn)方法比對Table 6 Comparison of this method with the State standard methods

Dr: relative deviation.

2.6 實際樣品檢測

表6為從煙臺杰科檢測服務(wù)有限公司獲得磺胺嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、強(qiáng)力霉素、金霉素、林可霉素和鹽酸克倫特羅的豬肉陽性樣本檢測結(jié)果,分別采用本方法和國家標(biāo)準(zhǔn)方法[14-18]進(jìn)行檢測,檢測結(jié)果的相對相差(Dr)≤16.4%。

3 結(jié)語

本研究結(jié)合超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù),建立了可同時提取豬肉中121種獸藥,正、負(fù)離子模式下分別檢測的分析方法,擴(kuò)展了QuEChERS技術(shù)在動物樣本中獸藥檢測的應(yīng)用范圍。該方法檢測成本低、周期短、穩(wěn)定性好、準(zhǔn)確度高,適用于生豬養(yǎng)殖、屠宰工廠內(nèi)部實驗室的批量快速篩查。

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Simultaneous determination of 121 veterinary drugs in pork by QuEChERS and ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry

GUO Haixia1*, XIAO Guiying1, ZHANG Xiqing1, WANG Minglin2,LI Li3, LENG Lei1, GAO Hongliang1

(1.YantaiJiekeInspectionServiceCo.Ltd,Laiyang265231,China;2.CollegeofFoodScienceandEngineering,ShandongAgriculturalUniversity,Taian271018,China;3.ChineseAcademyofInspectionandQuarantine,Beijing100123,China)

A method has been developed for the simultaneous determination of the 10 kinds of 121 veterinary drugs (including chloramphenicols,β-agonists, sulfonamides, 4-quinolones, nitroimidazoles, macrolides, avermections, polyether antibiotics, tetracycline antibiotics, cephalosporins, etc. ) in pork using QuEChERS method coupled with ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS). The drugs were extracted with Na2EDTA-McIlvaine buffer solution (pH=4) and acetonitrile. Anhydrous sodium sulfate was used for the salting-out process. The solutions divided into two groups were cleaned-up by different mixed sorbents. The drugs were analyzed by UPLC-MS/MS in multiple reaction monitoring (MRM) mode via electrospray ionization. Among the 121 drugs, 5 drugs were quantified by internal standard method, and the other 116 drugs were quantified by external standard method. The calibration curves of the 121 drugs were linear in the range of 0.02-40 μg/L with the correlation coefficients more than 0.99. The limits of quantification (LOQs,S/N=10) were 0.05-10 μg/kg. The average recoveries of 8 drugs at LOQ level in pork ranged from 41.7% to 59.6% with the relative standard deviations (RSDs) of 1.7%-13.5%. The average recoveries of 10 drugs at LOQ level in pork ranged from 122.6% to 163.2% with the RSDs of 0.6%-14.8%. The average recoveries of 103 drugs at LOQ level in pork ranged from 60.3% to 118.3% with the RSDs of 0.4%-16.7%. The proposed method is rapid, simple, sensitive, reliable and cost-effective.

QuEChERS; ultra performance liquid chromatography-tandem mass (UPLC-MS); grouping purification; veterinary drugs; pork

10.3724/SP.J.1123.2015.09016

2015-09-17

O658

A

1000-8713(2015)12-1242-09

* 通訊聯(lián)系人.Tel:(0535)7717752,E-mail:guohx84711@163.com.