高效液相色譜法測定碳酸鈣D3咀嚼片中維生素D3的含量

邢俊波,姜春來，靳守東，曹 紅,陳玉敏,水彩紅,單婷婷,胡 丹

(總后勤部衛(wèi)生部藥品儀器檢驗所，北京 100071)

高效液相色譜法測定碳酸鈣D3咀嚼片中維生素D3的含量

邢俊波*,姜春來，靳守東，曹 紅,陳玉敏,水彩紅,單婷婷,胡 丹

(總后勤部衛(wèi)生部藥品儀器檢驗所，北京 100071)

目的：建立高效液相色譜法測定碳酸鈣D3咀嚼片中維生素D3含量的方法。方法：采用高效液相色譜法。以Diamonsil C18(250 mm×4.6mm，5 μm)為色譜柱；流動相為甲醇；流速：1.0 ml·min-1；檢測波長：264 nm。結(jié)果：維生素D3在4.8～38.4 μg范圍內(nèi)。進(jìn)樣量與峰面積線性關(guān)系良好(r=1.0)。平均回收率為：97.82%(RSD=1.15%)。結(jié)論：方法簡便、快速準(zhǔn)確、靈敏度高，重現(xiàn)性好。可作為碳酸鈣D3咀嚼片的質(zhì)量控制方法。

碳酸鈣D3咀嚼片；維生素D3；高效液相色譜

維生素D是一種脂溶性維生素，是人體和動物維持生命和健康必不可少的。主要用于調(diào)節(jié)人體內(nèi)化學(xué)元素的代謝，并且促進(jìn)其吸收和利用，促進(jìn)骨骼成長，且可動員、促進(jìn)鈣離子在骨骼上的沉積，從而降低摔倒及骨折的風(fēng)險。有研究也表明，維生素D在對抗心血管病、不良情緒以及特定類型的癌癥方面亦具有積極作用。碳酸鈣D3咀嚼片是以碳酸鈣和維生素D3等為主要原料制成的非處方藥品，主要用于妊娠和哺乳期婦女、更年期婦女、老年人和兒童的鈣補(bǔ)充劑，因此有必要對其主要成分進(jìn)行含量測定，提高其質(zhì)量可控性。本文參照文獻(xiàn)等[1-3]建立了高效液相色譜柱測定碳酸鈣D3咀嚼片中維生素D3含量的方法。所建方法簡便、快捷，專屬性好，可用于其質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀：島津LC-20AT高效液相色譜儀，SPD-20A紫外檢測器，LC-solutin色譜工作站。甲醇為色譜純，水為重蒸水。維生素D3對照品(100061-201208,中檢院提供)。碳酸鈣D3咀嚼片(1.2g/片×60片，批號為1303320、1303325、1402130，安士制藥有限公司)

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相為甲醇；檢測波長：264 nm；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：40 ℃。

2.2 系統(tǒng)適用性試驗

按上述色譜條件進(jìn)樣,得對照品、供試品及空白圖譜，見圖1，空白無干擾，理論板數(shù)按維生素D3峰計算可達(dá)9 000以上，且與相鄰雜質(zhì)峰的分離度均能達(dá)到要求。

2.3 供試品溶液的制備

取本品20片，研細(xì)，取5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，超聲處理(功率250 W，頻率33 kHz)30 min，取出，放冷，濾過，濾液減壓濃縮，用甲醇定容至5 mL，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 對照品溶液的制備

取維生素D3對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含1 μg的溶液。

2.5 陰性對照液的制備

按處方比例制備缺維生素D3的陰性樣品，按含量測定方法操作，結(jié)果陰性樣品在與維生素D3對照品相同保留時間處，未顯示色譜峰。

2.6 線性關(guān)系的考察

精密吸取維生素D3對照品溶液(0.048 mg· mL-1) 0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mL分別置于50 mL量瓶中，用乙醇定容，搖勻。以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)(X)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算得回歸方程為：Y=15 383 592.71X+910.68，r=1.0,線性范圍為：4.8～38.4 μg。

2.7 定量限檢測

以流動相的基線信噪比為10 ∶1計算，定量限為0.2 ng。

2.8 樣品溶液穩(wěn)定性試驗

將待測樣品溶液，在室溫下貯存，每間隔一定時間進(jìn)樣測定，結(jié)果8 h內(nèi)平均峰面積為228 460，RSD為3.22%。

2.9 重復(fù)性試驗

取同一批號的碳酸鈣D3咀嚼片6份，按含量測定方法平行試驗，測得平均含量為0.926 μg·g-1，RSD為0.84%。

2.10 準(zhǔn)確度試驗(加樣回收率試驗)

稱取已知含量的同一批樣品約2.5 g(6份)，精密稱定，分別精密加入維生素D3對照品適量，按正文供試品溶液的制備方法操作，測定含量，并計算回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗

2.11 樣品測定

分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μl，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件，以外標(biāo)法計算含量，結(jié)果三批樣品分別為0.926 μg·g-1、0.928 μg·g-1、0.926 μg·g-1。色譜圖見圖1。

圖1 碳酸鈣D3咀嚼片HPLC色譜圖

3 討 論

本研究結(jié)果表明，測得值與標(biāo)示值基本一致，反映本品質(zhì)量控制較好。

本研究建立了測定碳酸鈣D3咀嚼片中維生素D3的高效液相色譜法，前處理直接用溶劑提取，避免了繁雜的柱凈化提純步驟，減少了維生素的損失。另外在測量中對照品溶液盡量現(xiàn)用現(xiàn)配，且使用棕色量瓶，避免光線對維生素D3的影響。結(jié)果表明該方法靈敏度高、重現(xiàn)性好、操作簡便。

[1] 譚青松，付潔，何瑞國. 高效液相色譜法測定魚樣中的維生素A、維生素D3和維生素E [J]. 動物營養(yǎng)學(xué)報,2007，19(5)：636-640.

[2] 舒琬清，楊曉東，曾曉丹. HPLC法測定三種藥品中的維生素D2的含量分析[J]. 中國醫(yī)藥指南，2013，11(11):75-76.

[3] 蔣 曄，劉紅菊，郝曉花. 4 種脂溶性維生素的非水反相HPLC 測定[J]. 中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2005，36(2)：93-94.

Determination of Vitamin D3in Calcium Carbonate and Vitamin D3Chewable Tablets by HPLC

Xing Junbo, Jiang Chunlai，Jin Shoudong, Cao Hong, Chen Yumin, Shui Caihong, Shan Tingting, Hu Dan

(Institute for Drug and Instrument Control of Health Dept., GLD of PLA, Beijing 100071, China)

Objective: To establish a method for the determination of vitamin D3in Calcium Carbonate and Vitamin D3Chewable Tablets by HPLC. Methods: The HPLC system consisted of Diamonsil C18column(250 mm×4.6 mm, 5 μm), acetonitrile-water(23 ∶77); flow rate at 1.0ml·min-1and detected with UV at 264 nm. Results: The method had good linear relationship within the rage 4.8～38.4 μg of vitamin D3(r=1.0). The result (n=6)of the recovery was 97.82%(RSD=1.15%. Conclusion: The method is simple, fast, rapid, accurate and suitable for the determination of preparation.

HPLC；Calcium Carbonate and Vitamin D3Chewable Tablets ;vitamin D3; HPLC

2015-03-18

國家重大科學(xué)儀器設(shè)備開發(fā)專項項目(2012YQ18013208)。

10.3969/j.issn.1006-9690.2015.05.009

R284.1

A

1006-9690(2015)05-0033-02

*通訊作者： 邢俊波。E-mail: junboxing98@sohu.com