DKK-1在漿液性卵巢癌患者血清的表達(dá)及其臨床意義

陜西省腫瘤醫(yī)院婦瘤科(西安710061)

袁 淵 常曉斌△ 姚安梅 韓志紅 楊雪梅

DKK-1在漿液性卵巢癌患者血清的表達(dá)及其臨床意義

陜西省腫瘤醫(yī)院婦瘤科(西安710061)

袁 淵 常曉斌△姚安梅 韓志紅 楊雪梅

目的：探討血清DKK-1在漿液性卵巢癌患者中的表達(dá)情況及其臨床意義。方法：通過ELISA檢測57例漿液性卵巢癌患者及健康婦女的血清標(biāo)本中DKK-1的表達(dá)水平，繪制ROC曲線分析其診斷價(jià)值，并以CA125作為對照；采用χ2檢驗(yàn)分析DKK-1的表達(dá)水平與卵巢癌患者臨床病理特征的關(guān)系；Kaplan-Meier法分析DKK-1的表達(dá)與病人的生存之間的關(guān)系。結(jié)果：卵巢癌患者血清中DKK-1表達(dá)高于健康對照組(P<0.001)；ROC曲線下面積0.846 (95%CI:0.771-0.926)，靈敏度85.9%，特異度87.7%； CA125曲線下面積為0.849 (95%CI:0.764-0.927)，靈敏度92.9%，特異度84.2%；血清DKK-1與卵巢癌臨床分期密切相關(guān)(P<0.05)，且在卵巢癌細(xì)胞核中/低分化組的表達(dá)顯著高于細(xì)胞核高分化組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而與年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征無顯著相關(guān)性(P>0.05)；血清DKK-1高表達(dá)的漿液性卵巢癌患者術(shù)后5年生存率顯著低于血清DKK-1低表達(dá)的漿液性卵巢癌患者。結(jié)論:卵巢癌患者血清中DKK-1表達(dá)水平增高，為漿液性卵巢癌的臨床診斷及預(yù)后判斷提供了重要參考，具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。

卵巢癌病理類型復(fù)雜，上皮癌占全部卵巢腫瘤40%，有漿液性和粘液性兩種，均有向兩側(cè)卵巢發(fā)展和種植的傾向，惡性率高，其中漿液性最多，且惡變最常見， 具有早期癥狀隱匿、 易于轉(zhuǎn)移和廣泛播散的生物學(xué)行為，大部分患者就診時(shí)已屬晚期，5年生存率只有30%[1,2]。因此，尋找早期診斷漿液性卵巢癌的分子指標(biāo)具有重要的臨床實(shí)用意義。DKK-1是Dickkopf-1的簡稱，是Wnt-1信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的拮抗物。該分子在成人組織中很少表達(dá)，但可表達(dá)于胎盤和胚胎組織[3]。有研究發(fā)現(xiàn)DKK-1在肺癌、肝癌多種腫瘤患者血清中高表達(dá)，血清中DKK-1可以作為多種腫瘤的診斷標(biāo)志物[4～6]。本研究探討了血清中DKK-1在漿液性卵巢癌中的表達(dá)及其臨床意義，為漿液性卵巢癌的診斷提供了新的理論基礎(chǔ)。

資料和方法

1 一般資料 收集我院2007年6月至2010年6月期間收治的漿液性卵巢癌患者57例(實(shí)驗(yàn)組)，以及同期健康體檢者57例(對照組)?；颊叩呐R床資料完整，納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者均經(jīng)影像學(xué)和病理組織學(xué)確診為卵巢癌，均為初診初治患者；②均未接受放、化療及激素等藥物治療；③肝腎功能未見異常；④無其他腫瘤及內(nèi)科疾病。術(shù)后每3個(gè)月進(jìn)行一次隨訪，隨訪截止之間為2015年6月。實(shí)驗(yàn)組57例年齡28～70歲，平均年齡57.34±6.71歲，其中I-II期23例，III-IV期34例，高分化27例，中/低分化30例。對照組57例年齡27～75歲，平均年齡58.26±7.97歲。兩組受試者在年齡、生理等一般資料方面比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。

2 試劑與主要儀器 DKK-1酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)由瑞典康乃格有限公司提供；CODA酶標(biāo)儀由美國伯樂公司生產(chǎn)；-80℃冰箱由Thermo公司生產(chǎn)；臺式低溫高速離心機(jī)美國Beckman公司生產(chǎn)；全自動化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)的AXSYM生化分析儀及配套CA125檢測試劑由美國雅培公司生產(chǎn)。

3 實(shí)驗(yàn)方法 兩組空腹采血5 ml，真空干燥管中保存，2000r/min 10 min 后，-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

3.1 血清DKK-1含量檢測：采用ELISA檢測血清中DKK-1的含量，步驟根據(jù)試劑盒說明書進(jìn)行。將96孔的包被有DKK-1抗體的酶標(biāo)板置于室溫過夜。酶標(biāo)板洗滌3次，并加300μl稀釋液封閉，室溫靜置3h，洗滌2次。每孔加入100μl 血清標(biāo)本，室溫孵育3h，洗滌酶標(biāo)板2次。加入100μl 檢測抗體，室溫孵育3h，洗滌酶標(biāo)板3次。每孔加入100μl鏈霉卵白素-過氧化物酶后，室溫反應(yīng)30 min，洗滌酶標(biāo)板3次。每孔加入100μl四甲基聯(lián)苯胺底物液，室溫反應(yīng)30min，最后再在每孔中加入50μl硫酸。迅速用酶標(biāo)儀檢測每孔的光吸收值。

3.2 血清CA125含量檢測：使用全自動化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)的AXSYM生化分析儀及配套CA125檢測試劑對血清 CA125 進(jìn)行檢測，參考值為0～35 U/ml。

結(jié) 果

1 DKK-1在漿液性卵巢癌血清和健康對照血清中的表達(dá)水平差異 通過ELISA檢測漿液性卵巢癌患者血清及健康對照血清中DKK-1 的表達(dá)差異，結(jié)果顯示漿液性卵巢癌患者血清中DKK-1的表達(dá)水平高于健康對照組，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。

2 血清DKK-1表達(dá)水平與漿液性卵巢癌患者臨床病理特征的關(guān)系 將57例漿液性卵巢癌患者按照病例特征因素(臨床分期、細(xì)胞核分化程度、年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)進(jìn)行分類，進(jìn)一步分析血清DKK-1相對表達(dá)量與漿液性卵巢癌患者臨床特征的關(guān)系。χ2分析結(jié)果顯示，血清DKK-1的表達(dá)水平與漿液性卵巢癌患者的臨床分期密切相關(guān)，隨著臨床分期的進(jìn)展，血清DKK-1的表達(dá)亦逐漸升高(P<0.05)。此外，血清DKK-1在卵巢癌細(xì)胞核中/低分化組的表達(dá)顯著高于細(xì)胞核高分化組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。血清DKK-1的表達(dá)與漿液性卵巢癌其他臨床病理特征，包括年齡、淋巴結(jié)分期均無顯著相關(guān)性，見附表。

附表 血清DKK-1表達(dá)水平與漿液性卵巢癌患者臨床病理特征的關(guān)系

注：組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義， *P<0.05

3 血清DKK-1表達(dá)水平對漿液性卵巢癌的診斷效率 根據(jù)上述血清DKK-1的表達(dá)水平，建立DKK-1和CA125的ROC曲線，利用ROC曲線評價(jià)兩者在卵巢癌中的診斷價(jià)值。結(jié)果顯示，ROC曲線下面積0.846 (95%CI:0.771-0.926)，靈敏度85.9%，特異度87.7%； CA125曲線下面積為0.849 (95%CI:0.764-0.927)，靈敏度92.9%，特異度84.2%。血清DKK-1和CA125均具有較好的診斷價(jià)值。

4 血清DKK-1表達(dá)與漿液性卵巢癌患者生存之間的關(guān)系 生存分析結(jié)果顯示，血清DKK-1表達(dá)與漿液性卵巢癌患者術(shù)后5年生存率密切相關(guān)，血清DKK-1高表達(dá)的漿液性卵巢癌患者術(shù)后5年生存率顯著低于血清DKK-1低表達(dá)的漿液性卵巢癌患者(Log-rank test:P=0.0412)，如附圖。

附圖 血清DKK-1表達(dá)與漿液性卵巢癌患者生存之間的關(guān)系

討 論

近年來隨著人們飲食結(jié)構(gòu),生育觀念以及環(huán)境等因素的改變，卵巢癌發(fā)病率呈現(xiàn)出逐年上升的趨勢，且高卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)腫瘤中致死率最高的惡性腫瘤，如果能夠早期(Ⅰ～Ⅱ)發(fā)現(xiàn)，約有90%的患者經(jīng)過標(biāo)準(zhǔn)治療可達(dá)完全緩解[7]。血清標(biāo)志物具有易檢測、 可重復(fù)、 非侵入性、 標(biāo)本用量以及人為干擾少等優(yōu)點(diǎn)， 且無需復(fù)雜的標(biāo)本前處理，其在卵巢癌的診斷和預(yù)后預(yù)測中均占有重要的地位。因此, 尋找卵巢癌的早期診斷的血清學(xué)指標(biāo)已成為近年來研究的熱點(diǎn)問題。

DKK-1是人DKK(Dickkopf)蛋白家族成員之一，最早在非洲爪蟾中發(fā)現(xiàn)，其主要作用是誘導(dǎo)爪蟾頭部形成。大量研究顯示DKK-1表達(dá)異常與腫瘤的發(fā)生、 發(fā)展相關(guān)，并且DKK-1是一種分泌型糖蛋白，在多種腫瘤患者血清中呈高表達(dá)，為腫瘤的早期診斷、治療監(jiān)測及其預(yù)后判斷提供新的途徑。HCC組織DKK-1高表達(dá)患者遠(yuǎn)期預(yù)后較差，DKK-1單獨(dú)或聯(lián)合β-catenin可作為HCC預(yù)后預(yù)測標(biāo)志物[8]。Lee等研究發(fā)現(xiàn)153例胃癌患者血清中DKK-1的濃度水平明顯高于173例健康對照者，血清DKK-1診斷胃癌的敏感度為87.6%，特異度為87.9%，由此可見，檢測血清DKK-1水平有可能幫助診斷胃癌并且預(yù)測患者預(yù)后[9]。DKK-1在骨轉(zhuǎn)移乳腺癌患者血清中的表達(dá)水平顯著高于未發(fā)生骨轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者和健康婦女，并可能對乳腺腫瘤細(xì)胞的骨轉(zhuǎn)移能力發(fā)揮正向調(diào)節(jié)作用，提示檢測血清DKK-1水平有助于乳腺癌骨轉(zhuǎn)移患者的臨床研究[10]。此外，血清DKK-1在多發(fā)性骨髓瘤患者的表達(dá)水平高于MGUS患者和健康對照[11]。 肺癌患者腫瘤組織中表達(dá)升高，血清中含量增加，且血清DKK-1在肺癌患者的陽性率為69.8%，而在肺部良性疾病患者和健康對照者分別為12.5%和5%[12]。由此可見，DKK-1不僅在不同腫瘤組織中表達(dá)，更重要的是在腫瘤患者血清中也存在高表達(dá)，血清DKK-1作為一種血液生物標(biāo)志，極有可能在腫瘤早期診斷、療效監(jiān)測、預(yù)后預(yù)警等方面發(fā)揮重要的臨床作用。

本研究主要探討了血清DKK-1在漿液性卵巢癌中的表達(dá)及臨床意義。研究發(fā)現(xiàn)血清DKK-1在漿液性卵巢癌患者血清中高表達(dá)；ROC曲線下面積0.846 (95%CI:0.771-0.926)，靈敏度85.9%，特異度87.7%； CA125曲線下面積為0.849 (95%CI:0.764-0.927)，靈敏度92.9%，特異度84.2%；血清DKK-1與卵巢癌臨床分期密切相關(guān)，且在卵巢癌細(xì)胞核中/低分化組的表達(dá)顯著高于細(xì)胞核高分化組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而與年齡等無顯著相關(guān)性；血清DKK-1高表達(dá)的漿液性卵巢癌患者術(shù)后5年生存率顯著低于血清DKK-1低表達(dá)的漿液性卵巢癌患者。這些結(jié)果說明DKK-1是一種良好的診斷卵巢癌及判斷卵巢癌預(yù)后的血清腫瘤標(biāo)志物，血清DKK-1有望成為漿液性卵巢癌早期診斷和預(yù)后判斷的新指標(biāo)。

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(收稿：2015-07-18)

Expression and clinical significance of serum DKK-1 in Serous ovarian cancer patients Department of Gynecological Oncology, Shaanxi Provincial Tumor Hospital

(Xi’an 710061)

Yuan Yuan Chang XiaoBin Yao AnMei et al

Objective: To investigate the expression of serum DKK-1 in serous ovarian cancer patients and its diagnosis and prognosis value．Methods: ELISA was used to detect the expression of serum DKK-1 in 57 serous ovarian cancer patients and 57 controls, and its diagnostic value was analyzed by the receiver operating characteristic (ROC) curve，and CA125 was aslo detected as control. Meanwhile，relationships between the expression levels of DKK-1 and ovarian cancer clinicopathological features were analyzed by χ2; the association of serum DKK-1 level with survival of serous ovarian cancer patients was further evaluated by Kaplan-Meier．Results: The expression of serum DKK-1 of serous ovarian cancer patients showed statistically higher than controls (P<0.001). The area under the ROC curve ( AUC) of DKK-1 was 0.846 (95%CI:0.771-0.926), DKK-1 screening serous ovarian cancer sensitivity rate was 85.9%，specificity rate was 87.7%, The area under the ROC curve ( AUC) of CA125 was 0.849 (95%CI: 0.764-0.927), sensitivity rate was 92.9%, specificity rate was 84.2%. The expression of serum DKK1 was significantly increased in serous ovarian cancer patients with advanced TNM stage (P<0.05), and the expression of serum DDK-1 in ovarian cancer cell medium / poorly differentiated-nuclear group was significantly higher than that in the well differentiated-nuclear group , but the expression of serum DKK-1 had no significant correlations with age and lymph node status (P> 0.05). The 5 years overall survival rate in the patients with high serum DKK1 expression was significantly lower than in the patients with low serum DKK1 expression. Conclusion: The relative expression level of DKK1 is significantly increased in serous ovarian cancer patients, which provides important references for the diagnosis and prognosis of serous ovarian cancer.

Ovarian neoplasms @Dkk-1 Diagnosis Prognosis

卵巢腫瘤 @DKK-1 診斷 預(yù)后

R737.31

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2015.12.008

△陜西省腫瘤醫(yī)院放療科