離子色譜法測定活血止痛散(片)中二氧化硫殘留量*

艾 蕓 李 榮 白 雪 謝志民 張亞鋒

西安市食品藥品檢驗所(西安710054)

離子色譜法測定活血止痛散(片)中二氧化硫殘留量*

艾 蕓 李 榮 白 雪 謝志民 張亞鋒

西安市食品藥品檢驗所(西安710054)

目的：建立活血止痛散(片)中二氧化硫殘留量的測定方法。方法：離子色譜法,電導(dǎo)檢測器,陰離子抑制器,淋洗液為20mmol/L氫氧化鉀溶液,流速1mL/min,柱溫30℃。結(jié)果：硫酸根進樣量在12.5ng～1000ng內(nèi),峰面積積分值與進樣量呈良好的線性關(guān)系(r=0.9994)；加樣回收率為93.2%,RSD為2.89%(n=9)；最低檢測限0.3μg/g,最低定量限0.8μg/g。結(jié)論：該方法簡便、準(zhǔn)確度高,可用于該制劑中二氧化硫殘留量的控制方法。

我國傳統(tǒng)中藥炮制中，使用硫磺熏蒸的方法使中藥材、中藥飲片潔白、防蟲、防腐，但藥材中殘留的二氧化硫?qū)θ梭w健康和中藥材的功效會造成一定影響，實驗中關(guān)于這方面的報道屢見不鮮[1]。中國藥典對中藥材、中藥飲片中的二氧化硫殘留量已有明確規(guī)定，但關(guān)于中成藥中二氧化硫殘留量的研究尚少見，且對于安全量也無規(guī)定[2]?；钛雇瓷?片)是2012年國家藥品計劃抽驗品種，由當(dāng)歸、三七、制乳香、冰片、土鱉蟲、煅自然銅組成，在臨床中有一定的使用范圍[3]。本文為考察該藥二氧化硫殘留情況，利用離子色譜法對成品中的殘留量進行測試觀察，為該藥的安全使用提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀 器 ICS-5000型離子色譜儀，變色龍色譜工作站，陰離子色譜柱AS19(4×250mm)，保護柱AS19(4×50mm)均為戴安公司產(chǎn)品。

1.2 試劑與試藥 硫酸根標(biāo)準(zhǔn)溶液：批號 GBS(E)080523，全國化工標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)委員會標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究開發(fā)中心提供，1000mg/L；亞硫酸鈉：98%分析純；鹽酸：優(yōu)級純；蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性 采用離子色譜法，電導(dǎo)檢測器，陰離子抑制器，陰離子色譜柱，淋洗液為20mmol/L氫氧化鉀溶液，流速1mL/min，柱溫30℃。理論塔板數(shù)按硫酸根峰計算應(yīng)不低于6000。

2.2 對照品溶液制備 取硫酸根標(biāo)準(zhǔn)溶液，加水分別制成每1mL含硫酸根0.5μg、5μg、10μg、20μg、30μg、40μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備 取供試品粉末約10g(過三號篩)，置三頸圓底燒瓶中，加水50mL，搖勻，加入5mL鹽酸，迅速密塞，接通水蒸氣蒸餾，以3%過氧化氫溶液20mL為吸收液，50min收集餾出液近100mL，加水稀釋至刻度，搖勻，放置3h，即得。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍 精密吸取對照品溶液各25μL，注入離子色譜儀，按上述色譜條件測定硫酸根峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)、進樣量(ng)為橫坐標(biāo)，計算回歸方程得y=0.2068x-0.0868，r=0.9994。表明在該系統(tǒng)條件下，硫酸根進樣量在12.5ng～1000ng范圍內(nèi)，峰面積與進樣量呈良好的線性關(guān)系。

2.5 進樣精密度 精密吸取上述對照品溶液(40μg/ml)25μl，各進樣6次，按上述色譜條件測定保留時間和峰面積，計算變異系數(shù)。結(jié)果保留時間RSD為0.03%，峰面積RSD為2.14%，表明系統(tǒng)精密度良好。

2.6 方法重現(xiàn)性 精密稱取活血止痛散粉末8.2524g、8.0580g、8.3327g、8.2659g、8.3346g、8.3443g，按上述方法測定硫酸根含量，依照(SO2/SO4=0.6669)換算成樣品中二氧化硫量。結(jié)果RSD為0.98%，表明本方法的重現(xiàn)性良好。

2.7 中間精密度 由相同實驗室的不同操作者在不同時間、不同條件下，按照重現(xiàn)性考察項下方法測定。結(jié)果三位不同實驗人員測定的RSD為0.24%。

2.8 溶液穩(wěn)定性 取硫酸根標(biāo)準(zhǔn)溶液，加水制成每1mL含硫酸根40μg的溶液。分別于0h、1h、2h、4h、8h、12h、16h、20h和24h精密吸取25μL，注入離子色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積。結(jié)果RSD為2.66%，表明硫酸根溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 干擾試驗 稱取陰性樣品8g，按照重復(fù)性試驗方法記錄色譜圖，并與對照品、供試品色譜對照，結(jié)果(見圖1)顯示陰性供試品溶液色譜中在與硫酸根標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜峰相應(yīng)的位置上無明顯色譜峰出現(xiàn)，說明處方中其它組分不影響硫酸根的含量測定。

2.10 加樣回收試驗 精密稱取已測得二氧化硫含量(186.2μg/g)的活血止痛散粉末3.4972g、3.4500g、3.5043g、3.5003g、3.4321g、3.4580g、3.3421g、3.3249g、3.3423g，置三頸圓底燒瓶中，每3份分別加入亞硫酸鈉溶液(每1mL含亞硫酸鈉0.856mg)1mL、2mL、3mL，加水50mL，搖勻，照重現(xiàn)性方法測定，結(jié)果平均加樣回收率為93.20%，RSD為2.89%。

2.11 系統(tǒng)耐用性考察 系統(tǒng)適用性試驗證明本系統(tǒng)在不同品牌的色譜柱、不同柱溫(25℃～35℃)、不同流速(0.8mmol/L～1.2mmol/L)、不同淋洗液濃度(18mmoll/L/min～22mmol/L)條件下硫酸根分離良好、峰形對稱，可用于含量測定，理論塔板數(shù)為6858～9098，故確定理論塔板數(shù)以硫酸根峰計不得低于6000。

2.12 蒸餾時間確定 取活血止痛散粉末8.0169g、8.0122g、7.6023g、7.9000g、8.0160g，照上述方法蒸餾，控制蒸餾時間分別為20min、30min、40min、50min、60min收集餾出液近100mL，加水稀釋至刻度，搖勻，放置3h。精密吸取上述溶液各25μL，注入離子色譜儀，按上述色譜條件測定二氧化硫的含量。結(jié)果(見圖2)表明蒸餾時間對樣品提取效果影響顯著，當(dāng)蒸餾時間為50min以上時提取率趨于平穩(wěn)。為了縮短檢驗周期，本實驗采用蒸餾時間為50min。

2.13 檢測限和最低定量限的確定 取陰性供試品粉末(過三號篩)8.0003g，照重復(fù)性考察項制備陰性供試品溶液。精密吸取對照品溶液(每1mL含硫酸根2μg)1mL，分別置50mL量瓶和20mL量瓶中，加陰性供試品溶液稀釋至刻度，照上述色譜條件測定，以信噪比為3時的含量為最低檢測限，以信噪比為10時的含量為最低定量限。結(jié)果該方法二氧化硫的最低檢測限為0.3μg/g、最低定量限為0.8μg/g。

2.14 樣品限度的制定 中國藥典規(guī)定山藥等11味藥材及其飲片中二氧化硫殘留量不得超過400mg/kg，其他中藥材及飲片二氧化硫殘留量不得超過150mg/kg[2]?；钛雇瓷?片)處方中不含限度為400mg/kg的11味中藥材，確定本品中二氧化硫殘留量不得超過150mg/kg。

2.15 樣品測定結(jié)果 活血止痛散33批次樣品不合格的有14批次，占42.42%；活血止痛片54批次樣品不合格的有37批次，占68.52%。說明原料中的二氧化硫殘留仍有相當(dāng)一部分殘留在成品中。

3 討 論

本實驗依據(jù)我國2010年版的《中國藥典》有關(guān)中藥材及其飲片二氧化硫的含量測定，采用水加鹽酸蒸餾，碘滴定的容量法[3]。容量法儀器設(shè)備簡單，適合多數(shù)實驗室操作，但該法未采用任何保護劑，未能改善蒸餾液中亞硫酸根的不穩(wěn)定性，受環(huán)境、人員、時間等因素干擾嚴(yán)重，故滴定結(jié)果可靠性較差。另有文獻報道用堿性溶液提取-離子色譜法測定中藥中二氧化硫殘留[4]。該法采用甲醛為保護劑，很大程度上改善了亞硫酸根的不穩(wěn)定性，且超聲提取方法用時較蒸餾法短，但活血止痛散(片)為復(fù)方制劑，且含礦物藥，采用超聲方法提取液成分復(fù)雜，離子色譜干擾嚴(yán)重，無法測得亞硫酸根。文獻報道用水加鹽酸蒸餾，以雙氧水作為蒸餾液中亞硫酸根的吸收液，將其氧化為硫酸根，經(jīng)離子色譜分析硫酸根含量，方法簡便快速、干擾少[5]。水蒸氣蒸餾-離子色譜法中供試液雜質(zhì)較少，離子色譜干擾大幅度降低，且該法利用雙氧水作為吸收劑，將蒸餾液中亞硫酸根氧化為性質(zhì)更為穩(wěn)定的硫酸根作為檢測對象，極大降低了環(huán)境、人員、時間等因素對檢測結(jié)果的影響，確保了結(jié)果的準(zhǔn)確性。故本實驗采用水蒸氣蒸餾-離子色譜法測定活血止痛散(片)中二氧化硫的殘留量。

按活血止痛散處方和供試品溶液制備方法折算，取土鱉蟲粉末2.0g、三七粉末0.7g、煅自然銅粉末1.0g，照上述方法測定，結(jié)果顯示煅自然銅對二氧化硫含量測定影響甚微，4個生產(chǎn)企業(yè)的土鱉蟲、三七原料中二氧化硫殘留量均極低。按活血止痛散處方和供試品溶液制備方法折算，取當(dāng)歸粉末3.5g，照上述方法測定，結(jié)果顯示4個生產(chǎn)企業(yè)的當(dāng)歸原料材中二氧化硫殘留量均極低，而藥材市場購得三批當(dāng)歸飲片中二氧化硫含量均極高，初步推測活血止痛散(片)中殘留的二氧化硫主要來源于當(dāng)歸飲片原料。本文建立了水蒸氣蒸餾-離子色譜法測定活血止痛散(片)中二氧化硫的殘留量，方法快速、準(zhǔn)確，靈敏度高，干擾少，準(zhǔn)確度高。目前關(guān)于中成藥中二氧化硫殘留量的研究還比較少，此法可用于控制該品種中二氧化硫的殘留。

[1] 孫艷平，李 濤，頂空氣相色譜-火焰光度檢測器檢測山藥中的二氧化硫[J].陜西醫(yī)學(xué)雜志2010，39(8):1024-1025,1040.

[2] 國家藥典委員會.中國藥典[S].2010年版第一增補本.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：262.

[3] 國家藥典委員會.中國藥典[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：956，附錄61.

[4] 王欣美，夏 晶，王 柯，等.堿性溶液提取-離子色譜法測定中藥中二氧化硫殘留[J].中國中藥雜志2011，39(19):2656-2658.

[5] 劉海靜，楊瑞瑞，袁向輝，等.離子色譜法測定當(dāng)歸中二氧化硫殘留量[J].藥物分析雜志2011，31(4):752-754.

(收稿2015-01-22；修回2015-03-03)

* 國家藥品計劃抽驗項目(中2012102046038)

色譜法 二氧化硫 @活血止痛散(片)

R282

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.06.047