輻射對(duì)人膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞COX-2和survivin表達(dá)的影響

儲(chǔ)進(jìn)錦，張 帆，王 凡

(安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院腫瘤放療科，安徽合肥 230022)

神經(jīng)膠質(zhì)瘤來源于神經(jīng)上皮，是最常見的顱內(nèi)原發(fā)腫瘤之一，約占顱內(nèi)腫瘤的40% ～50%。膠質(zhì)瘤是一種生物學(xué)特性非常復(fù)雜的惡性腫瘤，腫瘤生長迅速，向周圍組織浸潤能力強(qiáng)，手術(shù)難以全切，術(shù)后放療是重要的治療手段［1]。神經(jīng)膠質(zhì)瘤治療后復(fù)發(fā)以原發(fā)灶局部復(fù)發(fā)為主，而增加原發(fā)灶局部的放射劑量卻沒有提高原發(fā)灶局部控制率，患者多數(shù)在確診后1～2年內(nèi)死亡，究其原因是人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞存在放射抵抗性［2]。因此膠質(zhì)瘤的治療效果差，預(yù)后不佳。環(huán)氧化酶是催化花生四烯酸向前列腺素轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵限速酶，環(huán)氧化酶2(cyclooxygenase-2，COX-2)在正常組織中幾乎無表達(dá)，主要在腫瘤組織中表達(dá)，主要通過抑制細(xì)胞凋亡促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展［3]。survivin是凋亡抑制蛋白家族(Inhibitor of apoptosis proteins，IAP)的成員之一，是一類獨(dú)立于Bcl-2的內(nèi)源性細(xì)胞凋亡抑制蛋白，具有抑制細(xì)胞凋亡和調(diào)節(jié)細(xì)胞有絲分裂的功能，在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用［4]。研究證實(shí)COX-2和survivin蛋白在膠質(zhì)瘤組織中均高表達(dá)，尤其在Ⅲ～Ⅳ級(jí)高度惡性膠質(zhì)瘤組織中表達(dá)明顯增多，促進(jìn)膠質(zhì)瘤的發(fā)生和發(fā)展［5-6]。本實(shí)驗(yàn)通過體外培養(yǎng)人膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞，經(jīng)X線照射后，觀察COX-2和survivin蛋白表達(dá)的變化，分析輻射對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞COX-2和survivin蛋白表達(dá)的影響，了解輻射是否通過改變腫瘤細(xì)胞的抗凋亡能力來增加其放射抵抗性。

1 實(shí)驗(yàn)材料和方法

1．1 研究對(duì)象和分組 人膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U251細(xì)胞購自中國科學(xué)院上海細(xì)胞庫，進(jìn)行體外傳代培養(yǎng)，并隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組為經(jīng)過10 Gy劑量X線照射的細(xì)胞，對(duì)照組無特殊處理。

1．2 實(shí)驗(yàn)試劑和器材 COX-2、survivin兔抗人多克隆抗體均購自英國Abcam公司;PV6000聚合物免疫組化檢測(cè)試劑盒、DAB濃縮型顯色試劑盒購自北京中杉金橋公司;DMEM高糖培養(yǎng)基購自Gibco公司;胎牛血清購自杭州四季青公司;CO2培養(yǎng)箱為HERA cell 150型;醫(yī)用電子加速器為美國瓦里安23EX型直線加速器;倒置顯微鏡為OLYMPUSCX41型。

1．3 細(xì)胞培養(yǎng) 細(xì)胞培養(yǎng)各操作均在無菌細(xì)胞培養(yǎng)室超凈臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。人膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U251貼壁培養(yǎng)在含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中，置于37℃、CO2體積分?jǐn)?shù)5%的飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，2～3 d換液一次，在倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞生長面積達(dá)到培養(yǎng)瓶底約80% ～90%時(shí)，常規(guī)傳代:吸棄舊培養(yǎng)基，0．25%的胰蛋白酶消化，觀察到細(xì)胞間隙增大、形態(tài)變圓、細(xì)胞漂浮時(shí)加入含有血清的培養(yǎng)基終止胰酶消化，收集細(xì)胞懸液，離心后制成單細(xì)胞懸液，并置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。重復(fù)以上操作，同時(shí)觀察細(xì)胞生長情況，細(xì)胞貼壁狀況良好，排列較為緊密，培養(yǎng)基清亮，無明顯雜質(zhì)及沉淀，說明細(xì)胞已處于對(duì)數(shù)生長期，可用于實(shí)驗(yàn)。

1．4 照射方式 取處于對(duì)數(shù)生長期的實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組U251細(xì)胞，0．25%胰酶消化后制成單細(xì)胞懸液，分別接種于六孔板中，培養(yǎng)至細(xì)胞鋪滿板底70% ～80%后，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞釆用直線加速器6MVX線垂直照射，照射方法:室溫下進(jìn)行源皮距照射，劑量率為200 cGy·min-1，照射野為10 cm×10 cm，源皮距(射線至板頂)為100 cm，劑量為10 Gy，接受照射后再立即放回培養(yǎng)箱中。對(duì)照組細(xì)胞同步進(jìn)行傳代培養(yǎng)，但不予X線照射。

1．5 細(xì)胞爬片制作及免疫組化 將實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)48 h，分別取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞，將0．25%胰蛋白酶消化后的細(xì)胞懸液分別接種于預(yù)先置有細(xì)胞爬片的六孔板中培養(yǎng)，每組細(xì)胞各制作10張細(xì)胞爬片。從六孔板中取出爬片，pH7．2的PBS液沖洗3次，4%多聚甲醛室溫下固定20 min，0．5%TxitonX-100室溫下處理 20 min，后采用PV6000免疫組化法染色:3%過氧化氫去離子水室溫下處理10 min，PBS液沖洗3次，每組其中5張滴加 COX-2一抗(稀釋濃度為1∶800)，另外5張滴加survivin一抗(稀釋濃度為1∶1 500)，置于4℃冰箱孵育過夜，PBS液沖洗后滴加通用型IgG抗體-HRP多聚體(二抗)，37℃溫箱中孵育20 min，DAB試劑顯色5 min，待陽性染色為黃色或棕黃色后，蘇木素復(fù)染細(xì)胞核1 min，沖洗，烤干，封片，觀察。每組細(xì)胞爬片按以上操作重復(fù)3次實(shí)驗(yàn)。

1．6 結(jié)果判定 細(xì)胞免疫組化結(jié)果利用生物圖像分析軟件，每張細(xì)胞爬片隨機(jī)選取5個(gè)高倍(×400)視野，分別測(cè)定平均光密度值，用平均光密度值來表示細(xì)胞中COX-2和survivin蛋白的相對(duì)含量。

1．7 統(tǒng)計(jì)分析 運(yùn)用SPSS19．0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，組間比較采用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P＜0．05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

COX-2和survivin蛋白在未處理的對(duì)照組人膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中均有表達(dá)，呈黃色或者棕黃色。經(jīng)過10 Gy劑量X射線照射48 h后，檢測(cè)到COX-2和survivin蛋白在細(xì)胞內(nèi)的染色變深，平均光密度值增加，說明兩者的表達(dá)量較未照射組均明顯增加(P ＜0．05)，見表1，圖1，圖 2。

表1 生物圖像分析系統(tǒng)定量分析輻射對(duì)人膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞COX-2和survivin蛋白表達(dá)的影響

圖1 免疫組化法檢測(cè)輻射對(duì)COX-2蛋白表達(dá)的影響(A:對(duì)照組，B:實(shí)驗(yàn)組)(×400)

圖2 免疫組化法檢測(cè)輻射對(duì)survivin蛋白表達(dá)的影響(C:對(duì)照組，D:實(shí)驗(yàn)組)(×400)

3 討論

細(xì)胞凋亡是一種由基因控制的細(xì)胞自主性死亡方式，在凋亡刺激因子作用下通過啟動(dòng)細(xì)胞內(nèi)死亡機(jī)制和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，最終發(fā)生細(xì)胞程序性死亡的過程，它是一種細(xì)胞生長的負(fù)性調(diào)控機(jī)制。細(xì)胞凋亡涉及一系列基因的激活、表達(dá)以及調(diào)控，多種基因相互作用共同調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖和凋亡。近年來研究表明，腫瘤不僅是一種增殖失控的疾病，也是細(xì)胞凋亡異常的疾病。正常情況下，細(xì)胞應(yīng)處于增殖與凋亡的動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)，凋亡調(diào)控基因的表達(dá)異常直接導(dǎo)致了細(xì)胞凋亡異常，這使得細(xì)胞分裂周期失調(diào)的細(xì)胞逃脫正常的監(jiān)控機(jī)制而異常增殖，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。

環(huán)氧化酶(cyclooxygenase，COX)是催化花生四烯酸向前列腺素轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵的限速酶，其存在兩種亞型:結(jié)構(gòu)型COX-1和誘導(dǎo)型COX-2。COX-1是表達(dá)于大部分組織的結(jié)構(gòu)酶，定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，呈穩(wěn)定持續(xù)表達(dá)，COX-2為一種誘導(dǎo)酶，定位于細(xì)胞質(zhì)和核膜。一般認(rèn)為COX-2在正常生理狀態(tài)下多數(shù)組織不表達(dá)，當(dāng)受到包括生長因子、細(xì)胞因子、炎性介質(zhì)、各種促癌因素等刺激因素作用時(shí)，其表達(dá)量迅速上調(diào)［7]。大量研究證實(shí)COX-2可從多個(gè)環(huán)節(jié)參與腫瘤的形成，具有抑制細(xì)胞凋亡、促進(jìn)細(xì)胞增殖分化、促進(jìn)腫瘤血管生成、干擾細(xì)胞正常免疫及促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移和侵襲的生物學(xué)作用，在乳腺癌、食管癌、胃腸道惡性腫瘤等多種癌組織中高表達(dá)［8]。COX-2的主要產(chǎn)物前列腺素(PGE)可促進(jìn)細(xì)胞的增殖、侵襲、血管生成，抑制細(xì)胞凋亡，與腫瘤的發(fā)展密切相關(guān)，在正常組織中無表達(dá)，而在腫瘤中高表達(dá)［9]。survivin蛋白是凋亡抑制蛋白IAP家族的成員之一，生物學(xué)功能主要有抑制細(xì)胞凋亡、調(diào)控細(xì)胞周期、調(diào)節(jié)有絲分裂、促進(jìn)細(xì)胞增殖，在分化成熟的組織中不表達(dá)，特異性地高表達(dá)于多種惡性腫瘤中，如肺癌、胃癌，包括膠質(zhì)瘤，因此被認(rèn)為是在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用的一個(gè)關(guān)鍵分子［10]。survivin蛋白是染色體分裂和細(xì)胞質(zhì)分裂中關(guān)鍵的調(diào)節(jié)因子，survivin在G2/M期高表達(dá)，可通過相應(yīng)的調(diào)控機(jī)制使細(xì)胞逃避G2/M期的校正，不能有效對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行監(jiān)控，從而誘導(dǎo)其異常分裂，抑制了腫瘤細(xì)胞的凋亡［11]。survivin蛋白還可通過抑制caspase信號(hào)通路來阻斷細(xì)胞的凋亡程序，caspase級(jí)聯(lián)活化是細(xì)胞凋亡發(fā)生的核心機(jī)制，survivin可作用于終末效應(yīng)因子 caspase-3和caspase-7，通過抑制其表達(dá)，干擾凋亡信號(hào)的傳導(dǎo)，從而進(jìn)一步阻斷細(xì)胞的凋亡程序［12]。

放射治療是腫瘤治療的重要手段之一，電離輻射的生物效應(yīng)主要由對(duì)DNA的損傷所致，關(guān)鍵靶點(diǎn)是DNA。輻射可誘導(dǎo)細(xì)胞基因組的不穩(wěn)定性，導(dǎo)致基因表達(dá)的變化，發(fā)生遺傳異常、細(xì)胞形態(tài)異常、功能異常，正是這些基因表達(dá)的異常，從而引起細(xì)胞生物特性改變。Pervan M［13]的實(shí)驗(yàn)顯示輻射可誘發(fā)多數(shù)腫瘤細(xì)胞凋亡，但有的腫瘤細(xì)胞即使給予較高輻射劑量也不會(huì)發(fā)生凋亡。Anai S［14]報(bào)道當(dāng)腫瘤細(xì)胞暴露于小劑量的放射線時(shí)，細(xì)胞會(huì)上調(diào)COX-2蛋白的表達(dá)，這可能是腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生放射損傷逃逸現(xiàn)象的途徑之一。Steinauer［15]研究顯示:放射治療是COX-2蛋白表達(dá)的一種刺激因素，COX-2的表達(dá)隨著照射劑量的增加而顯著增加，同時(shí)COX-2的主要產(chǎn)物前列腺素2(PGE2)的水平在放射治療后也明顯升高，呈劑量依賴性，且前列腺素及其類似物已被證實(shí)是輻射損傷的細(xì)胞保護(hù)劑。survivin可增加腫瘤細(xì)胞的放射抗拒作用，survivin蛋白的高表達(dá)與膠質(zhì)瘤的放射抵抗性有關(guān)，下調(diào)survivin的表達(dá)或是抑制其功能，可以提高腫瘤細(xì)胞對(duì)放射治療的敏感性［16]。Jin X 等［17]發(fā)現(xiàn)，下調(diào)腫瘤細(xì)胞內(nèi)survivin蛋白的表達(dá)后，輻射誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡大大增加。Khan等［18]發(fā)現(xiàn)，下調(diào)survivin蛋白水平或者進(jìn)行基因消除后，頭頸部腫瘤細(xì)胞的放射敏感性明顯增高。本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果顯示，在10Gy劑量的照射條件下，輻射可誘導(dǎo)人膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞COX-2和survivin蛋白表達(dá)的明顯增加。我們可以推測(cè)出，在膠質(zhì)瘤放射治療過程中，一部分腫瘤細(xì)胞發(fā)生了凋亡，存活下來的細(xì)胞通過上調(diào)COX-2和survivin蛋白的表達(dá)，產(chǎn)生一系列的抗凋亡效應(yīng)，抑制了這部分細(xì)胞的凋亡，逃避了放射線的損傷，對(duì)放射治療的敏感性大大下降，因此不能達(dá)到預(yù)期的療效，為日后復(fù)發(fā)留下隱患。

在當(dāng)今惡性腫瘤的治療領(lǐng)域里，只進(jìn)行傳統(tǒng)的手術(shù)、放療和化療并不能達(dá)到顯著的療效，輔助治療的地位日益突出，而靶向治療是基于對(duì)特定靶點(diǎn)結(jié)構(gòu)和功能的認(rèn)識(shí)，通過干擾特異性分子而阻斷腫瘤的生長和擴(kuò)散，其在未來的腫瘤治療中將發(fā)揮巨大的作用。為進(jìn)一步提高放療療效，不增加周圍正常組織毒副反應(yīng)，在放療過程中需要利用各種輔助手段來降低某些腫瘤對(duì)輻射的抵抗能力，提高其放射敏感性，放射增敏劑是重要的輔助治療方法之一［19]。COX-2和survivin是當(dāng)下比較熱門的基因靶點(diǎn)，怎樣消除膠質(zhì)瘤的放射抵抗性，如何增強(qiáng)膠質(zhì)瘤的放射敏感性也是當(dāng)前膠質(zhì)瘤治療領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一。已有研究將COX-2和survivin作為增強(qiáng)膠質(zhì)瘤放射敏感性的靶點(diǎn)，旨在通過提高腫瘤細(xì)胞對(duì)放射線的敏感性，來實(shí)現(xiàn)在不增加放療劑量的基礎(chǔ)上，提高放療的療效，減少復(fù)發(fā)，延長患者生存時(shí)間。聶斌等［20]研究COX-2抑制劑塞來昔布對(duì)腦膠質(zhì)瘤SHG-44細(xì)胞放射增敏的作用，結(jié)果顯示塞來昔布(30μmol·L-1)可增加SHG-44細(xì)胞的放射敏感性，與誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞自噬和G2/M期阻滯有關(guān)。聶亮琴等［21]研究表明塞來昔布可通過參與調(diào)節(jié)細(xì)胞周期和減少DNA損傷修復(fù)來增強(qiáng)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞u373的放射增敏性，其增敏比為1．21，明顯高于正常腦組織細(xì)胞，這證明COX-2抑制劑塞來昔布可作為提高膠質(zhì)瘤放療療效的手段之一。張瞳光等［22]通過克隆形成試驗(yàn)和皮下移植瘤試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)survivin基因過度表達(dá)和惡性膠質(zhì)瘤的放療抵抗性密切相關(guān)，抑制survivin基因能夠顯著增強(qiáng)膠質(zhì)瘤的放射敏感性。Reichert［23]通過siRNA下調(diào)惡性膠質(zhì)瘤LN229細(xì)胞survivin的表達(dá)，結(jié)果顯示細(xì)胞凋亡明顯增加，DNA損傷修復(fù)作用減弱，克隆形成率下降，放射敏感性增強(qiáng)，說明下調(diào)survivin可減少輻射誘導(dǎo)的DNA損傷的修復(fù)。COX-2抑制劑NS398作用于肝癌細(xì)胞中可降低survivin的表達(dá)，相關(guān)性分析顯示NS-398作用后COX-2與survivin蛋白表達(dá)呈顯著正相關(guān)［24]，提示COX-2和survivin之間的確可能存在某種聯(lián)系，但其中的具體機(jī)制仍不清楚，因此COX-2和survivin在促進(jìn)腫瘤作用中的內(nèi)在聯(lián)系有待于深入研究，以進(jìn)一步了解膠質(zhì)瘤產(chǎn)生放療抵抗的分子機(jī)制。

綜上所述，本研究結(jié)果表明輻射可誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞COX-2和survivin蛋白的表達(dá)增多，這可能是膠質(zhì)瘤存在放射抵抗的機(jī)制之一。設(shè)想通過各種手段下調(diào)COX-2和survivin蛋白的表達(dá)可增加細(xì)胞的凋亡，提高膠質(zhì)瘤對(duì)輻射的敏感性，為臨床尋找更加有效的治療方式提供了新的方向。本研究仍存在一些不足，例如沒有進(jìn)行細(xì)胞放射增敏性的研究，沒有將照射劑量進(jìn)行更為細(xì)致的分組，且后期還需要進(jìn)一步調(diào)控COX-2的表達(dá)來觀察其對(duì)膠質(zhì)瘤放射效應(yīng)的影響以及survivin的變化，探討COX-2及survivin之間的關(guān)系，以進(jìn)一步了解神經(jīng)膠質(zhì)瘤產(chǎn)生放療抵抗的分子機(jī)制，為臨床優(yōu)化膠質(zhì)瘤的治療提供新的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

［1] Lima FR，Kahn SA，Soletti RC，et al．Glioblastoma:Therapeutic challenges，what lies ahead［J]．Biochim Biophys Acta，2012，1826(2):338-349．

［2] Sheehan JP，Shaffrey ME，Gupta B，et al．Improving the radiosensitivity of radioresistant and hypoxic glioblastoma［J]．Future Oncol，2010，6(10):1591-1601．

［3] Hoellen ，Kelling K，Dittmer C，et al．Impact of cyclooxygenase-2 in breast cancer［J]．Anticancer Res，2011，31(12):4359-4367．

［4] Kanwar JR，Kamalapuram SK，Kanwar RK．Targeting survivin in cancer:patent review［J]．Expert Opin Ther Pat，2010，20(12):1723-1737．

［5] El-Sayed M，Taha MM．Immunohistochemical expression of cycloxygenase-2 in astrocytoma:correlation with angiogenesis，tumor progression and survival［J]．Turk Neurosurg，2011，21(1):27-35．

［6] 倪 恒，竇長武．生存素survivin與腦膠質(zhì)瘤的研究進(jìn)展［J]．中外醫(yī)學(xué)雜志，2014，12(14):150-153．

［7] 劉永慶，童斯浩，鮑揚(yáng)漪，等．塞來昔布對(duì)肝癌HepG2 HepG3細(xì)胞的免疫增敏作用［J]．安徽醫(yī)藥，2014，18(7):1336-1340．

［8] Ke HL，Tu HP，Lin HH，et al．Cyclooxygenase-2(COX-2)upregulation is a prognostic marker for poor clinical outcome of upper tract urothelial cancer［J]．Anticancer Res，2012，32(9):4111-4116．

［9] Kim YM，Shin YK，Jun HJ，et al．Systematic analyses of genes associated with radiosensitizing effect by celecoxib，a specific cyclooxygenase-2 inhibitor［J]．J Radiat Res，2011，52(6):752-765．

［10] Altieri DC．Survivin and IAP proteins in cell-death mechanisms［J]．Biochem J，2010，430(2):199-205．

［11] Mobahat M，Narendran A，Riabowol K．Survivin as a preferential target for cancer therapy［J]．Int J Mol Sci，2014，15(2):2494-2516．

［12]張賀春，竇長武．凋亡蛋白抑制因子Survivin在腦膠質(zhì)瘤中的作用研究進(jìn)展［J]．內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，36(3):283-287．

［13] Pervan M，Pajonk F，Sun JR，et al．Molecular pathways that modify tumor radiation response［J]．Am JClin Oncol，2001，24(5):481-485．

［14] Anai S，Tanaka M，Shiverick KT，et al．Increased expression of cyclooxygenase-2 correlates with resistance to radiation in human prostate adenocarcinoma cells［J]．J Urol，2007，177(5):1913-1917．

［15] Steinauer KK，Gibbs I，Ning S，et al．Radiation induces upregulation of cyclooxygenase-2(COX-2)protein in PC-3 cells［J]．Int J Radiat Oncol Biol Phys，2000，48(2):325-328．

［16] Rǒdel F，Reichert S，Sprenger T，et al．The role of survivin for radiation oncology:moving beyond apoptosis inhibition［J]．Curr Med Chem，2011，18(2):191-199．

［17] Jin X，Li Q，Wu Q，et al．Radiosensitization by inhibiting survivin in human hepatoma HepG2 cells to high-LET radiation［J]．J Radiat Res，2011，52(3):335-341．

［18] Khan Z，Khan N，Tiwari RP，et al．Down-regulation of survivin by oxaliplatin diminishes radioresistance of head and neck squamous carcinoma cells［J]．Radiother Oncol，2010，96(2):267-273．

［19]冉晨曦，何人可，湯小玲，等．腫瘤放射治療中輻射增敏劑的應(yīng)用進(jìn)展［J]．山東醫(yī)藥，2015，55(3):86-88．

［20]聶 斌，周菊英，吳 瓊，等．自噬在塞來昔布對(duì)腦膠質(zhì)瘤SHG-44細(xì)胞放射增敏效應(yīng)中的作用［J]．蘇州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2012，32(1):18-23．

［21]聶亮琴，周菊英，王利利，等．塞來昔布對(duì)正常腦膠質(zhì)細(xì)胞和腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞放射增敏效應(yīng)的比較及其機(jī)制［J]．中華放射醫(yī)學(xué)與防護(hù)雜志，2014，34(5):342-345．

［22]張瞳光，杜利力，劉顯明，等．siRNA沉默survivin基因表達(dá)對(duì)惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞放射敏感性的影響［J]．中國藥業(yè)，2010，19(9):15-17．

［23] Reichert S，R?del C，Mirsch J，et al．Survivin inhibition and DNA double-strand break repair:A molecular mechanism to overcome radioresistance in glioblastoma［J]．Radiother Oncol，2011，101(1):51-58．

［24] 付衛(wèi)爭，孫國平，范璐璐，等．環(huán)氧合酶-2選擇性抑制劑NS398誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞BEL-7402凋亡及其機(jī)制探討［J]．腫瘤，2010，30(1):11-14．