多指標(biāo)評(píng)分法優(yōu)選復(fù)方茵陳合劑中大黃提取工藝

劉建清，王慶芬，曹毅祥，張 榮

(中國(guó)人民解放軍第一七五醫(yī)院、廈門大學(xué)附屬東南醫(yī)院制劑科，福建漳州 363000)

復(fù)方茵陳合劑由茵陳、梔子、大黃三味藥組成，為我院非標(biāo)準(zhǔn)制劑，臨床上主要用于急性黃疸性肝炎的治療，在我院應(yīng)用二十余年，其降低轉(zhuǎn)氨酶、消除黃疸的療效顯著［1－4]。過(guò)去尚未對(duì)該制劑，煎煮工藝進(jìn)行考察優(yōu)化，前期試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)茵陳、梔子成分穩(wěn)定，受煎煮過(guò)程影響小，而大黃易受煎煮時(shí)間、浸泡時(shí)間等因素影響，因此有必要對(duì)大黃提取進(jìn)行優(yōu)化，建立穩(wěn)定可靠的工藝。本實(shí)驗(yàn)以水為溶劑，大黃中5個(gè)游離蒽醌化合物(包括蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃素甲醚、大黃酚)的提取量為指標(biāo)［5]，以高效液相色譜法對(duì)其含量進(jìn)行測(cè)定，采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化大黃提取工藝。

1 儀器與試劑

1200型高效液相色譜儀(美國(guó) Agilent);AUX220型電子分析天平(日本島津公司);蘆薈大黃素(110736－200716)、大黃酸(批號(hào):0757－200206)、大黃素(批號(hào):110756－200110)、大黃酚(批號(hào):110796－200615)、大黃素甲醚(批號(hào):0759－200311)(以上均購(gòu)至中國(guó)藥品生物制品檢定所);乙腈為色譜純;水為純凈水;其他試劑為分析純;復(fù)方茵陳合劑(自制)。

2 方法與結(jié)果

2．1 正交實(shí)驗(yàn)

2．1．1 復(fù)方茵陳合劑煎煮工藝 稱取茵陳187．5 g、梔子 93．8 g、大黃 62．5 g，其中茵陳、梔子合并加水煎煮2次，每次分別為 1．5 h、1 h，以四層脫脂效［6－8]，另煎。茵陳、梔子濃縮后與大黃煎煮液合并，加水至1 000 mL，流通蒸汽100℃滅菌30 min即得。

2．1．2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 通過(guò)前期預(yù)實(shí)驗(yàn)，擬以浸泡時(shí)間、煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)為考察因素，每個(gè)因素設(shè)立3個(gè)水平(見表1)，采用L9(34)正交設(shè)計(jì)表，試驗(yàn)安排見表1。

表1 實(shí)驗(yàn)因素與水平表

2．2 大黃蒽醌類化合物的含量測(cè)定

2．2．1 色譜條件 色譜柱:伊特利 Kromasile C18(4．6 mm ×250 mm，5 μm);流動(dòng)相:乙腈(A)—0．1%磷酸溶液(B);洗脫梯度:0～15 min 10%A，15～20 min 25%A，20 ～30 min 40%A，30 ～40 min 60%A，40～60 min 80%A，60～70 min 80%→10%A［9];流速:1 mL·min－1;檢測(cè)波長(zhǎng):254 nm;柱溫:30℃。

2．2．2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取蘆薈大黃素9．9 mg、大黃酸 10．2 mg、大黃素 10．0 mg、大黃酚10．2 mg、大黃素甲醚 10．5 mg，分別溶于 50 mL 容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液。

精密吸取上述貯備液中蘆薈大黃素、大黃素、大黃酚各0．5 mL，大黃酸1 mL，大黃素甲醚0．2 mL 置于10 mL容量瓶中，加甲醇定容，混勻即得混合對(duì)照品溶液。

供試品溶液測(cè)定:取煎煮液35 mL，加乙醇使含醇量為 60%，4 000 r·min－1離心10 min，上清液移至200 mL量瓶中，加60%乙醇至刻度，選用孔徑為0．45 μm的微孔濾膜濾過(guò)進(jìn)樣分析。色譜圖見圖1。

2．2．3 線性關(guān)系考察 分別精密吸取蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚各3、5、8、10、15、20μL進(jìn)樣，測(cè)定其峰面積(Y)對(duì)進(jìn)樣量(X)進(jìn)行回歸處理，得出5種成分的回歸方程及線性范圍。見表2。

2．3 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果及方差分析 正交試驗(yàn)結(jié)果見表3(測(cè)得的量為35 mL煎煮液中各蒽醌類化合物含量)，方差分析見表4，5。

圖1 HPLC圖

表2 回歸方程與線性范圍

表3 蒽醌類化合物的正交表設(shè)計(jì)

表4 蒽醌類化合物方差分析表

表5 各指標(biāo)優(yōu)選出的大黃提取工藝

由表4與表5方差分析結(jié)果可得出:大黃煎煮過(guò)程中，有無(wú)浸泡對(duì)大黃各成分，尤其對(duì)蘆薈大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的提取有顯著性的影響;對(duì)大黃素的提取有一定的影響;而煎煮時(shí)間及煎煮次數(shù)對(duì)大黃各蒽醌化合物提取影響較小。綜合各指標(biāo)優(yōu)選出的提取工藝，選擇提取條件為A2B2C3，即浸泡6 h，煎煮3次，每次煎煮時(shí)間15 min。

2．4 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 分別稱取處方量藥材3份，按最佳工藝條件平行操作，提取，處理，進(jìn)樣分析。計(jì)算出蘆薈大黃素平均含量為0．61 mg，RSD為3．4%;大黃酸平均含量為2．42 mg，RSD為4．1%;大黃素平均含量為0．95 mg，RSD 為3．3%;大黃酚平均含量為8．45 mg，RSD 為 4．6%;大黃素甲醚平均含量為0．48 mg，RSD為3．9%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該提取工藝穩(wěn)定可靠。

3 討論

大黃具有瀉下攻積、清熱瀉火等作用，主要含蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚等成分，故本文進(jìn)行正交試驗(yàn)時(shí)，以5個(gè)成分提取量為考察指標(biāo)，優(yōu)化工藝，提高制劑中有效成分含量。

大黃中5個(gè)游離蒽醌化合物極性小，目前文獻(xiàn)報(bào)道［10－12]大多采用甲醇、乙醇等有機(jī)溶劑進(jìn)行提取，但大黃以水煎煮服用仍應(yīng)用廣泛。因而本試驗(yàn)探討優(yōu)化大黃水提工藝，為大黃煎煮提供參考。

本試驗(yàn)中浸泡時(shí)間對(duì)大黃蒽醌化合物的提取有較顯著的影響，考慮可能大黃酚等蒽醌化合物浸出緩慢，較長(zhǎng)時(shí)間浸泡有助于藥物的滲透擴(kuò)散［13－14]，同時(shí)也可以縮短煎煮時(shí)間，防止長(zhǎng)時(shí)間煎煮對(duì)各蒽醌化合物的破壞。

與傳統(tǒng)工藝相比，優(yōu)化后的工藝對(duì)大黃酸的提取基本無(wú)改變，甚至略有降低;但大黃酚、大黃素甲醚等提取量均有了較顯著的提高，即大黃總蒽醌化合物的提取量有了較大的提高。因此該工藝適合大黃的水提生產(chǎn)。

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