山羊y+L堿性氨基酸轉運系統(tǒng)轉錄水平表達的研究

周英昊，高 曄，劉林麗，曾 潔，楊雨鑫，張恩平*，陳玉林*

(1.西北農林科技大學動物科技學院，楊凌 712100；2.榆林學院生命科學研究中心，榆林 719000； 3.西北農林科技大學生命科學學院，楊凌 712100)

山羊y+L堿性氨基酸轉運系統(tǒng)轉錄水平表達的研究

周英昊1，高 曄2，劉林麗3，曾 潔1，楊雨鑫1，張恩平1*，陳玉林1*

(1.西北農林科技大學動物科技學院，楊凌 712100；2.榆林學院生命科學研究中心，榆林 719000； 3.西北農林科技大學生命科學學院，楊凌 712100)

旨在研究山羊y+L堿性氨基酸轉運系統(tǒng)中4F2hc、y+LAT1和y+LAT2 mRNA表達的組織特異性及其在不同年齡山羊小腸中的發(fā)育性表達規(guī)律。試驗選取健康、體重相近的1日齡、6月齡、8月齡、10月齡、12月齡陜北白絨山羊各3只，共15只，屠宰后采集心、肝、腎、大腦、背最長肌、體側皮膚、瘤胃、十二指腸、空腸、回腸和結腸組織，利用實時熒光定量PCR技術檢測4F2hc、y+LAT1和y+LAT2 mRNA在1日齡山羊上述組織和全部山羊十二指腸、空腸和回腸的表達情況。結果表明，(1)4F2hc、y+LAT1和y+LAT2 mRNA在1日齡山羊多種組織中均有表達，且有一定的組織特異性。其中，4F2hcmRNA在皮膚表達量最高，y+LAT1 mRNA在回腸表達量最高，y+LAT2 mRNA在大腦和回腸表達量最高。(2)4F2hcmRNA在山羊十二指腸、空腸和回腸表達量均以1日齡山羊為最高，其他月齡山羊相同腸段之間表達量無顯著差異(P>0.05)；y+LAT1 mRNA在十二指腸、空腸和回腸表達量隨山羊年齡的增加均呈現(xiàn)逐漸降低的趨勢；y+LAT2 mRNA在十二指腸、空腸和回腸表達量隨山羊年齡的增加呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢，其在10月齡山羊表達量最高；y+LAT2 mRNA在回腸表達量以1日齡山羊為最低，其他月齡山羊之間差異不顯著(P>0.05)。結果說明，山羊y+L堿性氨基酸轉運系統(tǒng)的主要轉運部位為小腸；該系統(tǒng)中輕鏈y+LAT1和重鏈4F2hc構成的異二聚體轉運蛋白可能發(fā)揮更為主要的轉運作用；4F2hc和y+LAT2基因可能分別在山羊皮膚和大腦中發(fā)揮重要的生理功能；4F2hc、y+LAT1和y+LAT2基因在山羊小腸中受腸段和發(fā)育階段的影響，具有不同的發(fā)育性表達規(guī)律。

山羊；y+L堿性氨基酸轉運系統(tǒng)；實時熒光定量PCR；mRNA表達

動物對氨基酸的吸收和轉運過程，是在多種氨基酸轉運系統(tǒng)的參與下完成的。氨基酸轉運系統(tǒng)按照其底物的不同，可以分為堿性、酸性和中性氨基酸轉運系統(tǒng)，這些氨基酸轉運系統(tǒng)共同擔負著氨基酸在細胞膜上的跨膜運輸功能[1]。y+L堿性氨基酸轉運系統(tǒng)主要位于腸細胞和腎小管的基底，包含由y+L-型氨基酸轉運載體1(y+L-type amino acid transporter 1，y+LAT1)和y+L-型氨基酸轉運載體2(y+L-type amino acid transporter 2，y+LAT2)分別和細胞表面抗原4F2重鏈(4F2 heavy chain，4F2hc)共價結合構成的兩個不同的異二聚體轉運蛋白。y+L系統(tǒng)主要負責堿性氨基酸(賴氨酸、精氨酸、組氨酸等)的轉運，其轉運機制屬于反向交換轉運，即在Na+的協(xié)同作用下，在向細胞內轉入中性氨基酸的同時，按1︰1的比例轉出細胞中的堿性氨基酸[2]。除行使堿性氨基酸的轉運功能外，4F2hc基因還可參與調控皮膚穩(wěn)態(tài)[3]；y+LAT1基因的多態(tài)性可能與神經(jīng)膠質瘤以及賴氨酸尿性蛋白不耐癥的發(fā)生相關[4-6]；y+LAT2 基因的其他生理功能還未見報道。目前對氨基酸轉運載體的研究主要集中在人、小鼠、豬、雞和魚類中，主要對其相應的氨基酸轉運載體基因在mRNA水平上進行表達調控的研究，但是對反芻動物y+L堿性氨基酸轉運系統(tǒng)的研究還相對較少，特別是山羊上的研究幾乎未見報道。

山羊羊毛、羊絨、肌肉的生長和脂肪的沉積源于胃腸道對營養(yǎng)物質的消化和吸收過程。董曉玲等[7]研究表明，精氨酸和組氨酸是山羊生長發(fā)育常見的限制性氨基酸，說明堿性氨基酸的消化和吸收同山羊的生長性能密切相關。張年[8]研究表明，相同日糧組成下，麻城黑山羊及其雜交后代在0～12月齡體重變化呈“S”曲線，山羊體重拐點均在3.5～5 月齡，即各組山羊在達到拐點日齡前，體重呈現(xiàn)較快速度增加，6～12月齡山羊體重增加趨于平緩。由此可見，山羊的體重、器官的功能、營養(yǎng)物質的消化和利用率等在其體成熟前隨生長發(fā)育都可能發(fā)生很大的變化，其中包括對氨基酸需求和利用率的差異，而y+L系統(tǒng)作為重要的堿性氨基酸轉運系統(tǒng)，其轉運能力因此可能存在時間和空間上的雙重差異。有研究表明，小鼠b0，+AT和y+LAT1基因mRNA和蛋白質水平上的表達是一致的[9]。譚會澤等[10]認為，測定轉運載體基因mRNA的表達豐度基本可以反映出其單個細胞轉運載體蛋白的表達量，進一步可反映出其轉運氨基酸的能力。因此，本試驗選擇y+L堿性氨基酸轉運系統(tǒng)的4F2hc、y+LAT1和y+LAT2基因為研究對象，研究其在1日齡山羊多種組織和不同年齡山羊十二指腸、空腸和回腸中的mRNA表達情況，以探討山羊y+L堿性氨基酸轉運系統(tǒng)的主要轉運成分、轉運部位和相關基因的發(fā)育性表達規(guī)律，為進一步研究反芻動物腸道氨基酸吸收和轉運機制以及根據(jù)山羊的生理特點，科學配制日糧提供一定的理論支持。

1 材料與方法

1.1 試驗動物及樣品采集

本試驗所用山羊品種為陜北白絨山羊，選自榆林市陜北白絨山羊試驗基地。選取健康、體重相近的1日齡(已吮奶)、6月齡、8月齡、10月齡、12月齡陜北白絨山羊各3只，共15只，頸動脈放血至死(宰前不禁食)，采集其心、肝、腎、大腦、背最長肌、體側皮膚、瘤胃、十二指腸、空腸、回腸、結腸相對固定位置的組織，用PBS 緩沖液沖洗干凈，濾紙吸干，迅速放入 1.5 mL凍存管中，置液氮速凍，-80 ℃冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 主要試劑和儀器

超純RNA提取試劑盒Ultrapure RNA Kit(康為世紀公司)，反轉錄試劑盒PrimeScriptTMRT Master Mix(TaKaRa公司)，熒光染料SYBR?Premix Ex TaqTM Ⅱ(TaKaRa公司)，實時熒光定量PCR儀(Bio-Rad IQ5)，核酸濃度測定儀，高通量組織研磨儀，冷凍離心機。

1.3 樣品總RNA的提取

采用超純RNA提取試劑盒Ultrapure RNA Kit，按照操作手冊提取所有組織樣品總RNA。用核酸濃度測定儀測定RNA濃度及純度，用1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測RNA質量，-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 cDNA第一條鏈的合成

取500 ng經(jīng)檢測的質量良好的山羊各組織總RNA，采用反轉錄試劑盒PrimeScriptTMRT Master Mix，按照操作說明進行反轉錄反應，產物于-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5 引物設計

以山羊β-actin管家基因為內參基因，從GenBank檢索山羊4F2hc、y+LAT1、y+LAT2和β-actin基因的mRNA序列，用Primer Premier 5.0軟件設計跨內含子的特異性引物(表1)，由南京金斯瑞生物科技有限公司合成。

表1 實時熒光定量PCR引物序列

Table 1 Primer sequences for Real-time quantitative PCR

基因Gene基因登錄號GenBankID引物序列(5′→3′)Primersequence產物長度/bpProductlengthβ?actin(ACTB)XM＿005694067．1S：TGCGTGACATCAAGGAGAAGCA：GGATGCCACAGGACTCCATACCC1984F2hc(SLC3A2)XM＿005699799．1S：TGGATGGGTTTCAGGTTCGGA：CAACAACAGGTCCTTGGTGGGT176y+LAT1(SLC7A7)XM＿005685276．1S：TCATGGCGTTGATCTACTTGTGA：GAAGAACAGGCTGAGCTTGAGA161y+LAT2(SLC7A6)XM＿005692175．1S：CAGTGATGCTGTGGCTGTGACA：TGAAGCGAAGATAGATGCGTTG118

S.上游引物；A.下游引物 S.Sense primer；A.Antisense primer

1.6 實時熒光定量PCR

采用熒光染料SYBR?Premix Ex TaqTMⅡ，以β-actin為內參基因，利用Bio-Rad iQ5實時熒光定量PCR儀對各待測cDNA樣品中4F2hc、y+LAT1和y+LAT2基因mRNA的表達量進行測定，每個樣品3個重復。實時熒光定量PCR反應體系為25 μL：2×SYBR?Premix Ex Taq II(內含TaKaRa Ex TaqHS，dNTP Mixture，Mg2+，Tli RNaseH，SYBR?Green I)12.5 μL，上下游引物(10 μmol·L-1)各1 μL，10倍稀釋的cDNA模板2 μL，滅菌水8.5 μL。反應條件：95 ℃預變性1 min；95 ℃變性15 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸45 s，45個循環(huán)；每個循環(huán)結束后采集熒光。全部反應結束后，進行熔解曲線分析，反應條件：55～95 ℃，每30 s升溫0.5 ℃，循環(huán)數(shù)81，每個循環(huán)結束后采集熒光。

1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

所有樣品用內參基因β-actin進行標準化校正后，采用2-△△Ct法計算4F2hcmRNA、y+LAT1 mRNA和y+LAT2 mRNA相對于β-actinmRNA的表達量。數(shù)據(jù)以“平均值±標準誤(Mean±SE)”表示，n=3，用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行單因子方差分析(one-way ANOVA)，以Duncan法進行多重比較，P<0.05表示差異顯著。

2 結 果

2.1 4F2hcmRNA在1日齡山羊的組織表達差異

圖1顯示，4F2hcmRNA在1日齡山羊多種組織中均有表達。其在皮膚表達量顯著高于其他組織(P<0.05)；除皮膚外，空腸表達量最高；肝、腎和回腸次之，相互之間差異不顯著(P>0.05)；其次為十二指腸、大腦和瘤胃，相互之間差異不顯著(P>0.05)；再次為肌肉和結腸，二者差異不顯著(P>0.05)；心表達量顯著低于其他組織(P<0.05)。

2.2y+LAT1 mRNA在1日齡山羊的組織表達差異

圖2顯示，y+LAT1 mRNA在1日齡山羊多種組織中均有表達。其在小腸的表達量顯著高于其他組織(P<0.05)，小腸中回腸表達量最高，十二指腸和空腸次之，二者差異不顯著(P>0.05)；除小腸外，肝中表達量最高；腎、結腸、大腦、瘤胃和皮膚中表達量依次降低，相互之間差異不顯著(P>0.05)；所有組織中，心和肌肉表達量最低，二者差異不顯著(P>0.05)。

各目的基因相對于β-actin基因表達量的統(tǒng)計結果，數(shù)據(jù)用“平均數(shù)±標準誤”表示。圖上標注字母不同者表示差異顯著(P<0.05)，Duncan法比較。n=3，下同Statistical results of mRNA relative abundance in target gene and β-actin gene.The datum are shown as “Mean±SE”.With different letters indicate significant difference (P<0.05，Duncan test).n=3.The below figures are same圖1 山羊4F2hc mRNA在不同組織的表達Fig.1 The expression of 4F2hc mRNA in different tissues of goats

圖2 山羊y+LAT1 mRNA在不同組織的表達Fig.2 The expression of y+LAT1 mRNA in different tissues of goats

2.3y+LAT2 mRNA在1日齡山羊的組織表達差異

圖3顯示，y+LAT2 mRNA在山羊多種組織中均有表達。其在大腦和回腸中表達量顯著高于其他組織(P<0.05)，二者差異不顯著(P>0.05)；皮膚和腎次之，二者差異不顯著(P>0.05)；其他組織表達量從高到低依次為結腸、空腸、十二指腸、瘤胃、心、肝和肌肉，相互之間差異不顯著(P>0.05)。

圖3 山羊y+LAT2 mRNA在不同組織的表達Fig.3 The expression of y+LAT2 mRNA in different tissues of goats

2.4 山羊4F2hcmRNA在小腸的發(fā)育性表達

圖4顯示，4F2hcmRNA在山羊十二指腸、空腸和回腸的發(fā)育性表達規(guī)律相似，4F2hcmRNA在各腸段表達量均以1日齡山羊為最高(P<0.05)，其他月齡山羊相同腸段之間表達量無顯著差異(P>0.05)。

圖4 4F2hc mRNA在不同年齡山羊小腸的表達Fig.4 The expression of 4F2hc mRNA in small intestine of goats at different ages

2.5 山羊y+LAT1 mRNA在小腸的發(fā)育性表達

圖5顯示，y+LAT1 mRNA在山羊十二指腸、空腸和回腸的發(fā)育性表達規(guī)律相似。y+LAT1 mRNA在各腸段表達量隨著山羊年齡的增加均呈現(xiàn)逐漸降低的趨勢。y+LAT1 mRNA在1日齡山羊十二指腸、空腸、回腸中表達量均為最高，在12月齡山羊十二指腸、空腸和回腸表達量均為最低。

2.6 山羊y+LAT2 mRNA在小腸的發(fā)育性表達

圖6顯示，y+LAT2 mRNA在山羊十二指腸、空腸和回腸發(fā)育性表達規(guī)律相似。y+LAT2 mRNA在小腸隨著山羊年齡的增加均呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢，均以1日齡山羊的表達量最低，10月齡山羊的表達量最高，在十二指腸和空腸12月齡山羊表達量顯著低于10月齡(P<0.05)。回腸y+LAT2 mRNA在1日齡山羊表達量最低，其他各月齡山羊表達量差異不顯著(P>0.05)。

3 討 論

3.1 山羊4F2hcmRNA的組織分布

有關山羊y+L堿性氨基酸轉運系統(tǒng)內各基因表達的組織特異性研究至今未見報道。職愛民[11]研究發(fā)現(xiàn)，仔豬4F2hcmRNA在大腦、肝、腎、肌肉、腸道和心都有表達，而腸道表達最高，這與本研究的結果基本一致。本研究還發(fā)現(xiàn)，4F2hcmRNA在1日齡山羊皮膚組織中表達量顯著高于其他組織(P<0.05)，由此推測，4F2hc基因可能在幼齡動物皮膚組織中發(fā)揮重要的生理功能。E.Boulter等[3]研究稱，4F2hc基因可參與調控皮膚內穩(wěn)態(tài)、修復表皮創(chuàng)傷以及延緩皮膚衰老，其生理作用隨動物年齡的增長而逐步減弱。S.Estrach等[12]發(fā)現(xiàn)，4F2hc基因的過表達可能導致皮膚癌癥的發(fā)生，敲除該基因后可使已發(fā)生的腫瘤退化。M.S.Parmacek等[13]發(fā)現(xiàn)，成年鼠4F2hcmRNA在睪丸、大腦和腎中表達較高，在肌肉和肝等組織中表達較低，這與本研究的結果稍有出入，是否是由于物種差異導致的還不清楚。綜合以上研究結果，推測4F2hc基因除主要在山羊小腸行使堿性氨基酸轉運功能外，可能還在皮膚組織中發(fā)揮其他重要的生理功能。

圖5 y+LAT1 mRNA在不同年齡山羊小腸的表達Fig.5 The expression of y+LAT1 mRNA in small intestine of goats at different ages

圖6 y+LAT2 mRNA在不同年齡山羊小腸的表達Fig.6 The expression of y+LAT2 mRNA in small intestine of goats at different ages

3.2 山羊y+LAT1 mRNA的組織分布

R.Pfeiffer等[14]發(fā)現(xiàn)，y+LAT1 mRNA在人的腎中有較高表達，D.Torrents等[15]進一步發(fā)現(xiàn)其在人的胎盤、血小板、外周血白細胞、肺、脾和小腸中均有表達；其在小鼠小腸和腎表達量很高，在其他組織中表達量很低，這些同本研究的結果基本一致。職愛民[11]發(fā)現(xiàn)，仔豬y+LAT1 mRNA在腸道表達量最高，在大腦、肌肉和肝中沒有表達，這與本研究稍有出入。楊吉軒[16]研究發(fā)現(xiàn)，草魚y+LAT1在所有組織中均有表達，中腸和前腸比其他組織的表達量高，這和本研究的結果完全一致。綜合以上研究，發(fā)現(xiàn)人、小鼠、豬和山羊y+LAT1 mRNA的組織分布存在一定的相似性，即y+LAT1 mRNA均在小腸表達量很高，推測山羊y+LAT1基因主要表達部位在小腸。

3.3 山羊y+LAT2 mRNA的組織分布

M.H.Dave等[9]研究表明，小鼠y+LAT2 mRNA在所有腸段、肝、大腦、腎中表達量均較低，這和本研究的結果一致。譚會澤等[10]發(fā)現(xiàn)，黃羽肉雞y+LAT2 mRNA在回腸表達量最高，但回腸、空腸和十二指腸表達量差異不顯著(P>0.05)。楊吉軒[16]發(fā)現(xiàn)，草魚y+LAT2 mRNA在前腸和中腸表達量比其它組織高。這些與本研究的結果稍有出入。本研究發(fā)現(xiàn)y+LAT2 mRNA在1日齡山羊小腸(回腸)、大腦等組織中有相對較高的表達。M.Zielinska等[17]研究發(fā)現(xiàn)，上調y+LAT2基因的表達可以促進大鼠大腦皮質星形膠質細胞對精氨酸的吸收。綜合以上研究結果，推測山羊y+LAT2 基因主要表達部位在小腸(回腸)和大腦，其可能對大腦中堿性氨基酸的轉運發(fā)揮重要作用。

1日齡山羊y+LAT2 mRNA的相對表達量同4F2hcmRNA 和y+LAT1 mRNA未在同一數(shù)量級，前者較后兩者低。由此推測4F2hc 和y+LAT1構成的異二聚體蛋白可能較4F2hc和y+LAT2構成的異二聚體蛋白發(fā)揮更為主要的氨基酸轉運作用。根據(jù)4F2hcmRNA、y+LAT1 mRNA和y+LAT2 mRNA在各組織的相對表達量，推測山羊y+L堿性氨基酸轉運系統(tǒng)主要的轉運部位為小腸。

3.4 山羊小腸4F2hcmRNA的發(fā)育性表達規(guī)律

關于小腸堿性氨基酸轉運載體基因在動物發(fā)育的不同階段表達量變化的研究報道較少。職愛民[11]研究發(fā)現(xiàn)，藍塘豬十二指腸和空腸4F2hcmRNA 的表達豐度在7 d 時顯著高于其他各日齡(P<0.05)，在26、30、60、90和150 d間表達量無顯著差異(P>0.05)，這與本研究的結果相似。本研究發(fā)現(xiàn)，4F2hcmRNA在各腸段表達量均以1日齡山羊為最高，其他月齡山羊相同腸段之間表達量無顯著差異(P>0.05)。B.D.Humphrey等[18]認為，日糧的化學組成可以直接或間接影響基因的表達，飼料內營養(yǎng)物質轉運載體類型和數(shù)量的變化是動物組織對于飼料成分以及營養(yǎng)水平變化適應性的一種表現(xiàn)。1日齡山羊4F2hcmRNA高表達的原因可能是由于本研究中1日齡山羊在屠宰前已吮奶，蛋白質品質及進入腸道的氨基酸種類和含量可能較以采食飼料為主的6～12月齡山羊高和豐富，使4F2hcmRNA在1日齡山羊各腸段均有較高表達。本研究中，6～12月齡山羊之間相同腸段4F2hcmRNA表達量無顯著差異(P>0.05)，一定程度上說明4F2hc基因可能在日糧成分穩(wěn)定的條件下，在山羊小腸內穩(wěn)定表達。N.Reig等[19]研究認為，輕鏈在沒有重鏈存在的情況下，就可以發(fā)揮氨基酸轉運作用，重鏈可能更多起引導定位的作用。還有研究表明，4F2hc除了作為轉運載體蛋白成分外，還是一種細胞表面分化抗原[20]，這些都可能是4F2hc基因表達保守的原因。

3.5 山羊小腸y+LAT1 mRNA的發(fā)育性表達規(guī)律

E.R.Gilbert等[21]研究了肉雞小腸中多種氨基酸轉運載體，發(fā)現(xiàn)y+LAT1 mRNA的表達量隨時間線性降低，這和本研究的結果相一致。1日齡山羊小腸y+LAT1 mRNA表達量很高，可能與日糧中氨基酸的成分和含量有關。本研究發(fā)現(xiàn)，在日糧成分穩(wěn)定的情況下，山羊y+LAT1 mRNA的表達量隨年齡的增加而進一步降低。J.Pacha[22]認為，隨著腸道組織總質量的增加，腸道中氨基酸轉運載體總體轉運能力增強，但單位面積上腸道組織對部分氨基酸轉運能力會下降，可能是由于氨基酸轉運蛋白密度的下降、不同型的氨基酸轉運載體之間的替換和氨基酸轉運載體周轉速率的變化等一系列原因導致的，在一定程度上可以用來解釋本研究y+LAT1 mRNA的發(fā)育性表達規(guī)律。

3.6 山羊小腸y+LAT2 mRNA的發(fā)育性表達規(guī)律

譚會澤等[10]發(fā)現(xiàn)，嶺南黃肉雞與ArborAcre肉雞十二指腸、空腸y+LAT2 mRNA具有相似的發(fā)育性表達規(guī)律，即y+LAT2 mRNA的表達均隨日齡的增加呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢；嶺南黃肉雞與ArborAcre肉雞回腸y+LAT2 mRNA表達存在明顯不同，且分別不同于十二指腸和空腸，這和本研究的結果相似。1日齡山羊采食初乳，但是y+LAT2 mRNA在1日齡山羊小腸中的表達量卻較其他月齡山羊低，其表達量隨山羊年齡的增加呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢，這同本研究發(fā)現(xiàn)的y+LAT1 mRNA的表達情況明顯不同，可能是由于所有年齡山羊小腸y+LAT2 mRNA表達量均較y+LAT1 mRNA低，所以在y+LAT1 mRNA表達量較高的情況下，其受腸道氨基酸調控的作用并不明顯，進一步推測y+LAT2可能不是山羊y+L系統(tǒng)中主要的氨基酸轉運載體，而是y+LAT1發(fā)揮主要的轉運作用。y+LAT2 mRNA表達量隨山羊年齡的增加呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢，一定程度上也說明y+LAT2對堿性氨基酸的吸收轉運可能隨山羊年齡的增加在有限的范圍內得到提升。y+LAT2 mRNA在山羊回腸中的發(fā)育性表達規(guī)律與十二指腸和空腸存在一定的差異，一定程度上說明腸道近端和遠端對堿性氨基酸的吸收可能存在差異。

4 結 論

山羊y+L堿性氨基酸轉運系統(tǒng)的主要轉運部位在小腸；輕鏈y+LAT1和重鏈4F2hc構成的異二聚體轉運蛋白可能在該系統(tǒng)中發(fā)揮主要的轉運作用；4F2hc和y+LAT2基因可能分別在山羊皮膚和大腦中發(fā)揮重要的生理功能；4F2hc、y+LAT1和y+LAT2基因在小腸中受腸段和山羊發(fā)育階段的影響，具有不同的發(fā)育性表達規(guī)律。

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(編輯 郭云雁)

Study on Transcriptional Level of y+L Cationic Amino Acid Transporter System in Goat

ZHOU Ying-hao1，GAO Ye2，LIU Lin-li3，ZENG Jie1，YANG Yu-xin1，ZHANG En-ping1*，CHEN Yu-lin1*

(1.CollegeofAnimalScienceandTechnology，NorthwestA&FUniversity，Yangling712100，China； 2.TheCenterofLifeScience,YulinCollege，Yulin719000，China； 3.CollegeofLifeSciences，NorthwestA&FUniversity，Yangling712100，China)

The objective of this study was to research the mRNA expression of goat 4F2hc，y+LAT1 andy+LAT2 (y+L cationic amino acid transporter system) in various tissues and their developmental expression in small intestine of goats at different ages.A total of 15 Shanbei White Cashmere goats at the ages of day 1，month 6，8，10 and 12 (3 goats at each age) were slaughtered to collect heart，liver，kidney，brain，muscle，skin，rumen，duodenum，jejunum，ileum and colon tissues.Then 4F2hc，y+LAT1 andy+LAT2 mRNA were quantified by Real-time quantitative PCR in all collected tissues of 1-day-old goats and in duodenum，jejunum，ileum of all goats.The results indicated that，(1) 4F2hc，y+LAT1 andy+LAT2 mRNA were widely expressed in all collected tissues of 1-day-old goats and the expression level varied from tissues.Specifically，4F2hcmRNA in skin，y+LAT1 mRNA in ileum andy+LAT2 mRNA in brain and ileum had the highest abundance.(2) 4F2hcmRNA of duodenum，jejunum and ileum on 1-day-old goats had higher abundance than that in goats on the other month-old，and there was no significant difference in the same segment of small intestine in goats on the other month-old (P>0.05)；y+LAT1 mRNA abundance in small intestine of goats decreased with age；y+LAT2 mRNA abundance in small intestine peaked in 10-month-old goats and then dropped with age，while it in ileum of 1-day-old goats had lower abundance than that in goats on the other month-old，and there was no significant difference in ileum between goats on the other month-old (P>0.05).In conclusion，y+L cationic amino acid transporter system played a main role in transferring amino acid in small intestine of goats and the heterodimer consisting of y+LAT1 and 4F2hc might be the main transporter protein in y+L system.4F2hcandy+LAT2 might perform important physiological functions in skin and brain of goats，respectively.4F2hc，y+LAT1 andy+LAT2 were differentially regulated and distributed with the differences of developmental stages and segments of small intestine in goat.

goat；y+L cationic amino acid transporter system；Real-time quantitative PCR；mRNA expression

10.11843/j.issn.0366-6964.2015.08.005

2014-10-30

國家絨毛用羊產業(yè)技術體系(CARS-40-13)；公益性行業(yè)(農業(yè))科研專項(201303059)；陜西省科學技術研究發(fā)展計劃項目(2014K01-17-03)；陜西省農業(yè)科技攻關項目(2014K01-17-04)

周英昊(1989-)，男，滿族，河北隆化人，碩士生，主要從事動物營養(yǎng)原理與方法研究，E-mail: mymyinghao@163.com

*通信作者：張恩平，教授，E-mail：zhangenping@nwsuaf.edu.cn；陳玉林，教授，E-mail：chenyulin@nwsuaf.edu.cn

S827.2

A

0366-6964(2015)08-1308-09