蠲痛飲加減方通過抑制子宮內(nèi)膜抗體對抗子宮內(nèi)膜異位癥痛經(jīng)的觀察

肖 鷗 闕朝錦

(1 四川省彭州市中醫(yī)醫(yī)院婦科，彭州，611930； 2 四川省彭州市人民醫(yī)院，彭州，611930)

蠲痛飲加減方通過抑制子宮內(nèi)膜抗體對抗子宮內(nèi)膜異位癥痛經(jīng)的觀察

肖 鷗1闕朝錦2

(1 四川省彭州市中醫(yī)醫(yī)院婦科，彭州，611930； 2 四川省彭州市人民醫(yī)院，彭州，611930)

目的：探討蠲痛飲加減方治療子宮內(nèi)膜異位癥痛經(jīng)的臨床療效及部分機制。方法：將本院2011年4月至2013年11月50例子宮內(nèi)膜異位癥痛經(jīng)納入研究，根據(jù)入院先后順序分為觀察組和對照組，各25例。對照組予口服孕三烯酮，自月經(jīng)當天起開始服用，口服2次/周，2.5 mg/次，連續(xù)服用12周。觀察組在對照組治療方案的基礎(chǔ)上再予口服蠲痛飲加減方，自月經(jīng)結(jié)束第2日起開始服用，2次/d，每次100 mL溫服，連續(xù)服用12周。2組患者治療期間均無服用其他藥物。療程結(jié)束后觀察2組患者的肝腎功能、痛經(jīng)程度積分、子宮內(nèi)膜中子宮內(nèi)膜抗體(EmAb)的濃度。結(jié)果：1)經(jīng)過藥物干預后痛經(jīng)積分均有所下降，其中觀察組下降的幅度更明顯(P<0.05)；2)蛋白印跡法(Western Blotting)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(Elisa)檢測EmAb水平，發(fā)現(xiàn)2組患者子宮內(nèi)膜的EmAb水平均下降，其中觀察組患者血清中EmAb濃度下降趨勢較對照組明顯(P<0.05)；3)2組均無肝腎功能損害發(fā)生。結(jié)論：EmAb升高能夠誘發(fā)子宮內(nèi)膜異位癥痛經(jīng)，而蠲痛飲加減方能夠通過降低EmAb濃度達到治療子宮內(nèi)膜異位癥痛經(jīng)的目的。

子宮內(nèi)膜異位癥；痛經(jīng)；蠲痛飲加減；EmAb

子宮內(nèi)膜異位癥(Endometriosis)雖然屬于婦科良性浸潤性疾病，但其具有類似惡性腫瘤的局部種植、浸潤生長及遠處轉(zhuǎn)移能力，故仍被認為是屬婦科疑難病癥之一。雖然腹腔鏡是子宮內(nèi)膜異位癥診斷的金標準，但其有創(chuàng)性和價格昂貴性導致其無法作為子宮內(nèi)膜異位癥的常規(guī)檢查手段。近年來針對子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生機制國內(nèi)外學者進行了大量的研究，不斷更新和補充，然而具體的機制相當復雜和未明確。但是有證據(jù)表明，子宮內(nèi)膜抗體(Endometrial Antibody，EmAb)在子宮內(nèi)膜異位癥患者外周血清中往往表現(xiàn)高表達[1-2]。而EMAb濃度變化被認為與子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)生發(fā)展及消退具有正相關(guān)關(guān)系。EmAb在異位子宮內(nèi)膜中形成復合物刺激補體系統(tǒng)，導致炎癥因子的釋放，引起繼發(fā)性痛經(jīng)。于是我們假設(shè)，如果能夠通過藥物干預來對抗子宮內(nèi)膜異位癥患者血清中EmAb的上升，那么很可能可以改善子宮內(nèi)膜異位癥患者的繼發(fā)性痛經(jīng)癥狀。

由于各類西藥都產(chǎn)生不同程度的不良反應(yīng)使患者較難耐受，所以，探尋更安全有效的子宮內(nèi)膜異位癥痛經(jīng)治療方案尤其重要，中藥湯藥的治療價值逐漸受到重視。蠲痛飲是有古至今治療婦科月經(jīng)病的經(jīng)典名方，經(jīng)過臨床藥理研究證實其具有明顯抗炎、抗腫瘤作用。其中在抗炎方面，蠲痛飲是一種多靶位多通路干預的抗炎中藥組方，對IL-1、IL-6等的表達均有抑制作用，那么我們假想，EmAb升高可導致炎癥因子分泌增多，而蠲痛飲卻能抑制炎癥因子的釋放，那么蠲痛飲治療子宮內(nèi)膜異位癥痛經(jīng)是否是通過抑制EmAb實現(xiàn)的？因此本研究通過檢測患者血清中EmAb的表達變化，以探討蠲痛飲加減方治療子宮內(nèi)膜異位癥痛經(jīng)的機制，以豐富治療疾病的理論，為同類研究提供可靠的理論依據(jù)。

1 臨床資料和方法

1.1 一般資料 研究對象為本院2011年4月至2013年11月收治的50例子宮內(nèi)膜異位癥患者，所有患者診斷參照2007年中華醫(yī)學會頒發(fā)的《子宮內(nèi)膜異位癥的診斷與治療規(guī)范》中的診斷標準[3]。將50例患者根據(jù)入院先后順序隨機分為對照組和觀察組，觀察組25例，年齡23～42歲，平均(37.5±3.9)歲，病程6個月至11年，平均(3.5±1.7)年。對照組25例，年齡22～41歲，平均(36.9±3.2)歲，病程7.5個月至10年，平均(3.2±1.8)年。所有患者均存在漸進性痛經(jīng)，2組患者在年齡分布、病程等一般臨床資料差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具可比性。具體見表1。

1.2 病例排除標準[4]具備以下任何一項的患者均被排除本研究：1)合并心、腦、腎等重大臟器疾病患者；2)合并活動性肝炎或者肝臟疾病患者；3)妊娠期、哺乳期婦女；4)精神異常/認知功能障礙患者；5)近3個月內(nèi)服用過激素類藥物；6)不予簽署知情同意書患者。

1.3 治療方法 對照組予口服孕三烯酮(北京紫竹藥業(yè)有限公司，國藥準字H19980020)，第1次于月經(jīng)第1天服用，3 d后服用第2次，以后每周相同時間服用，2.5 mg/次，連續(xù)服用12周。觀察組在對照組治療方案的基礎(chǔ)上再予口服蠲痛飲加減方，自月經(jīng)結(jié)束第2日起開始服用，2次/d，100 mL/次溫服，連續(xù)服用12周。具體方藥如下：丹參15 g，雞血藤20 g，當歸10 g，赤芍10 g，補骨脂10 g，白術(shù)10 g，土茯苓20 g，澤蘭10 g，川芎6 g，龍血竭6 g，田七10 g，炙甘草6 g，水煎藥方200 mL，1劑/d(早晚分服)。

1.4 觀察指標

1.4.1 痛經(jīng)程度評分 痛經(jīng)程度的評分根據(jù)2010年出版的《實用中醫(yī)婦科學》中的相關(guān)標準進行評估，具體如下：腹痛難忍2分，腹痛明顯1分，坐臥不寧2分，休克4分，面色蒼白1分，冷汗淋漓2分，四肢厥冷2分，需臥床休息2分，影響工作學習2分，伴腰部酸痛1分，伴惡心嘔吐1分，伴肛門腹脹1分。

1.4.2 EmAb濃度的檢測

1.4.2.1 Western blotting 2組患者治療前利用宮腔鏡取分泌中期子宮內(nèi)膜，治療12周后在利用宮腔鏡取分泌中期子宮內(nèi)膜，且所有患者均經(jīng)過B超證實未妊娠。將所取子宮內(nèi)膜加入一定比例的裂解液，4 ℃進行勻漿，15 000r/min離心后取上清液，取25 μL上清液進行BCA法測定濃度并計算上樣量。將上清液和上樣緩沖液按照4∶1比例混勻后置于100 ℃的金屬浴中變性7 min。電泳(6%濃縮膠，12%分離膠，60 V，145 min)結(jié)束后將凝膠取出，進行轉(zhuǎn)印(100 V，2 h)之后將PVDF膜取出，用麗春紅對PVDF膜上的蛋白質(zhì)進行預染，以證實蛋白質(zhì)確實轉(zhuǎn)移到膜上。使用TBST配置而成的5%脫脂奶粉進行封閉2 h，TBST洗3次，10 min/次，分別加入相應(yīng)抗體，4 ℃環(huán)境孵育過夜后TBST洗3次，5 min/次，再用堿性磷酸酶標記羊抗兔的二抗IgG(1∶1000)室溫1 h，TBST洗3次，5 min/次。將PVDF膜放入顯影儀器平板中，滴入ECL化學顯影劑反應(yīng)1 min后顯影，計算機掃描，數(shù)據(jù)處理。

1.4.2.2 Elisa 研究對象空腹，無菌情況下用無肝素真空采血管采集肘靜脈血5 mL，1 h內(nèi)，用3 000 r/min轉(zhuǎn)速離心10 min，分離并吸取上層血清，溶血樣本棄用，即刻檢測或4 ℃保存3 d內(nèi)檢測。檢測前樣本恢復至室溫，不可反復復溫。ELISA法試劑盒由廣州達安基因股份有限公司提供，酶標儀、洗板機由上海滬峰生物科技有限公司提供。根據(jù)說明書進行上樣、孵育、洗滌、加酶標抗體、顯色、數(shù)據(jù)讀取、統(tǒng)計分析。在ELISA檢測儀上，于450 nm(若以ABTS顯色，則410 nm)處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。操作方法嚴格按照試劑盒說明書操作。

1.5 治療安全性 檢查2組患者治療前后肝腎功能、三大常規(guī)(血常規(guī)+尿常規(guī)+大便常規(guī))的變化。

2 結(jié)果

2.1 蠲痛飲加減方能夠明顯降低患者的痛經(jīng)程度

通過表3我們發(fā)現(xiàn)：治療前2組治療前痛經(jīng)程度差異無統(tǒng)計學意義(P=0.812)，說明2組治療前痛經(jīng)程度相當，具有可比性。經(jīng)過1個療程治療2組患者的痛經(jīng)程度均有所下降，和治療前比較P=0.047、P=0.031，說明兩種治療方法均發(fā)揮效果，但是我們發(fā)現(xiàn)蠲痛飲加減方在降低患者痛經(jīng)程度上較對照組明顯(P=0.038)。

2.2 蠲痛飲加減方能夠明顯降低患者子宮內(nèi)膜中EmAb濃度 對不同組患者子宮內(nèi)膜進行Western blotting檢測后結(jié)果顯示：治療前2組治療前EmAb灰度值差異無統(tǒng)計學意義(P=0.736)，說明2組治療前EmAb濃度無差別，具有可比性。經(jīng)過1個療程治療2組患者的EmAb灰度值均有所下降，和治療前比較P=0.035，說明兩種治療方法均能夠達到降低EmAb濃度的目的，但是我們發(fā)現(xiàn)蠲痛飲加減方降低EmAb濃度的趨勢更為明顯P=0.012。具體見表3及圖1。

表1 2組一般資料比較

表2 2組痛經(jīng)程度評分比較(分，

表3 2組EmAb灰度值比較

表4 2組Elisa檢測EmAb濃度比較

圖1 2組治療后Western-blotting結(jié)果比較

2.3 通過Logistic分析方法可知子宮內(nèi)膜EmAb與血清EmAb濃度具有正相關(guān)關(guān)系，具體見表5。

表5 Logistic回歸分析結(jié)果

2.4 安全性分析 2組患者治療后均無1例發(fā)生肝腎功能損害，三大常規(guī)指標均無異常體現(xiàn)，但觀察組2例患者出現(xiàn)面部痤瘡，對照組1例患者出現(xiàn)面部痤瘡，1例出現(xiàn)月經(jīng)周期縮短。

3 討論

子宮內(nèi)膜異位真最常見的癥狀之一即是繼發(fā)性痛經(jīng)，痛經(jīng)程度隨著子宮內(nèi)膜局部病變的的惡化而加重，但有文獻證實其疼痛程度與子宮內(nèi)膜的病灶大小無正相關(guān)關(guān)系[5-6]。EmAb屬于以子宮內(nèi)膜腺上皮為靶原的蛋白，Mathur于1982年正式提出子宮內(nèi)膜異位患者其血清及子宮內(nèi)膜的具有特異性抗體，該抗體的出現(xiàn)與子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病有密切關(guān)聯(lián)。施曉[7]等通過對子宮內(nèi)膜異位癥患者血清EmAb后發(fā)現(xiàn)，與健康對照組患者比較，子宮內(nèi)膜異位癥患者血清及腹腔液的EmAb濃度明顯升高(P<0.05)，且患者的痛經(jīng)程度評分隨著EmAb濃度的升高而增加，這一結(jié)果與本研究所得結(jié)論基本一致。筆者認為，正常機體對子宮并不存在抗原性，子宮內(nèi)膜異位癥患者內(nèi)子宮作為異物對機體的補體系統(tǒng)進行刺激，導致大量炎癥遞質(zhì)的產(chǎn)生，免疫系統(tǒng)平衡被破壞，引起了痛經(jīng)，故我們認為對EMAb的檢測可作為子宮內(nèi)膜異位癥的輔助手段。在諸多國內(nèi)外文獻[8-12]中，EMAb的檢測來源既有血清又有子宮內(nèi)膜，其說法眾說紛紜，我們同時對血清及子宮內(nèi)膜的EMAb進行檢測發(fā)現(xiàn)，兩種方法均可發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜異位癥患者的EMAb濃度升高，且血清中EMAb與子宮內(nèi)膜中的EMAb的變化具有一致性，故筆者大膽突出結(jié)論：血清途徑可準確體現(xiàn)子宮內(nèi)膜異位癥患者EMAb的變化，減少患者接受腹腔鏡在生理上及心理上的負擔，不失為一種簡單、快捷、準確、安全的措施。

中醫(yī)學認為子宮內(nèi)膜異位癥屬于“痛經(jīng)”“月經(jīng)病”“不孕”等范疇，其病因主要有以下幾點[13-15]：1)沖任伏熱，真陰不足；2)陰虛火旺，不能攝精血；3)濕痰閉塞子宮；4)血瘀積血閉塞子宮。其發(fā)病與肝腎脾三臟密切關(guān)聯(lián)。本研究使用蠲痛飲加減方進行治療，發(fā)現(xiàn)加用中藥治療的觀察組患者在緩解月經(jīng)疼痛、降低EMAb方面均具有較為明顯的優(yōu)勢，方中當歸、赤芍、川芎、田七、赤芍共奏活血化瘀、通經(jīng)止痛的功效，雞血藤入肝腎兩經(jīng)，在輔助活血藥化瘀作用的同時起到補血作用，龍血竭活血散瘀，定痛止血，使用于本方可達到活血兼止痛的目的。茯苓、白術(shù)、澤瀉聯(lián)合使用起到健脾泄熱化瘀的作用，炙甘草具有緩急止痛，調(diào)節(jié)諸藥的作用?？v觀方中各類藥物在承接了古典方蠲痛飲活血化瘀止痛的基礎(chǔ)上又強化了化瘀健脾、溫腎行氣的功效，將健脾祛濕和活血化瘀止痛藥靈活應(yīng)用。現(xiàn)代藥理學研究發(fā)現(xiàn)，蠲痛飲具有抗炎、鎮(zhèn)痛、促排卵的作用，所以筆者相信，本方不但可以緩解子宮內(nèi)膜異位癥患者的痛經(jīng)癥狀，其在治療該病導致的不孕亦存在效果。在研究過程中，觀察組和對照組均有輕微不良反應(yīng)發(fā)生，筆者發(fā)現(xiàn)上述不良反應(yīng)均屬于孕三烯酮所引起的不良反應(yīng)，所以蠲痛飲加減方仍應(yīng)屬于一種安全性高的治療手段。

綜上所述，子宮內(nèi)膜異位癥繼發(fā)性痛經(jīng)的發(fā)病機制與EmAb密切相關(guān)，而蠲痛飲加減方可以部分逆轉(zhuǎn)該疾病的發(fā)展，從而改善患者預后。考慮可能此次入選樣本量較小有關(guān)，隨訪時間不長等，故有待于增加樣本量，進一步擴大研究予以證實蠲痛飲對于改善子宮內(nèi)膜異位癥繼發(fā)性痛經(jīng)患者的預后及確切機制，為指導臨床治療提供參考價值。

[1]Wang Z,Nie Z,Chen W,et al.RNF115/BCA2 E3 ubiquitin ligase promotes breast cancer cell proliferation through targeting p21(Waf1/Cip1) for ubiquitin-mediated degradation[J].Neoplasia,2013,15(9):1028-1035.

[2]羅元愷.實用中醫(yī)婦科學[M].7版.上海:上?？茖W技術(shù)出版社,2010:53.

[3]段清珍,江希萍.加減薏苡附子敗醬湯合抵當湯治療子宮內(nèi)膜異位癥的療效觀察[J].四川中醫(yī),2012,11(10):23.

[4]許麗華.EmAb、CA-12、TNF-α與子宮內(nèi)膜異位癥的相關(guān)性[J].中國婦幼保健,2011,26(28):51.

[5]朱小鳳,蔣鳳艷.血清CA125、EmAb在子宮內(nèi)膜異位癥中的作用[J].中外醫(yī)療,2010,18(10):1-4.

[6]張治寧,丁永慧,于黎明.子宮內(nèi)膜異位癥患者血清及聯(lián)合測定的診斷價值[J].寧夏醫(yī)學院學報,2011,23(3):188-190.

[7]施曉,章波兒,唐禹馨,等.血清CA125與抗子宮內(nèi)膜抗體聯(lián)合檢測診斷子宮內(nèi)膜異位癥[J].中國康復理論與實踐,2013,9(6):346-347.

[8]王靜雯.子宮內(nèi)膜異位癥患者細胞免疫功能測定及其發(fā)病因素探討[J].中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志,2011,11(2):49-50.

[9]朱小鳳,蔣鳳艷.血清CA125、EMAb在子宮內(nèi)膜異位癥中的作用[J].中外醫(yī)療,2010,29(18):1.

[10]董躍蘭,李豐良,袁濤,等.EMAb、CA125、TNF、ACL與子宮內(nèi)膜異位癥相關(guān)性研究[J].醫(yī)學研究通訊,2013,32(8):33.

[11]馬小蘭,徐正安.血清EMAb和CA125水平對子宮內(nèi)膜異位癥診斷價值的探討[J].臨床和實驗醫(yī)學雜志,2009,8(11):20.

[12]杜海燕,宋芳,張琳.TNF-α及VEGF在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達研究[J].中國婦幼健康研究,2010,21(6):756.

[13]劉朵朵.子宮內(nèi)膜異位癥患者腹腔液及血清VEGF、TNF測定臨床意義[J].陜西醫(yī)學雜志,2010,39(4):448.

[14]劉桂蘭,趙銘宇,韓麗,等.從《內(nèi)經(jīng)·養(yǎng)生篇》理論分析子宮內(nèi)膜異位癥免疫下調(diào)的病因病機[J].中國醫(yī)學創(chuàng)新,2014,7(2):109-110.

[15]陳文萍,黃曉東,付清梅.血清與腹腔液CA125測定對子宮內(nèi)膜異位癥的診斷價值[J].廣東醫(yī)學,2009,30(1):103.

(2014-09-10收稿 責任編輯：徐穎)

Observation on Modified Juantong Decoction Against Endometriosis Dysmenorrhea by Inhibiting Emab

Xiao Ou1, Que Zhaojin2

(1DepartmentofGynecology,PengzhouChineseMedicineHospital,Sichuan611930,China； 2PengzhouPeople'sHospital,Sichuan611930,China)

Objective:To discuss the clinical curative effect and part of its mechanism of modified Juantong decoction for the treatment of endometriosis dysmenorrhea.Methods:Fifty cases of patients with endometriosis dysmenorrhea treated in our hospital during April 2011 to November 2013 were included in the study and divided into observation group and control group according to admission order, with 25 cases in each group. Patients in control group received oral gestrinone from the first day of their menstruation, 2 times per week, 2.5 mg/time, continuously for 12 weeks. The observation group had warm modified Juantong decoction apart from the same treatment as the control group, though from the second day after the menstruation ends, 2 times/day, 100 mL per time, continuously for 12 weeks. No other drugs were applied during treatment in both groups. hepatic and renal function, degree of dysmenorrhea score, endometrial antibody (EmAb) concentration of endometrial of the two groups of the patients after the treatment were observed.Results:1) after the drug intervention, dysmenorrhea score decreased, the decrease of observation group was more obvious (P<0.05); 2) through Western blotting and Elisa detection of EmAb level, it was found that endometrial EmAb level decreased in both of the two groups of patients, the down trend of EmAb serum concentration in the observation group was more significant than the control group (P<0.05); 3) both groups had no hepatic and renal function lesion.Conclusion:The increase of EmAb can induce endometriosis dysmenorrhea, and modified Juantong decoction can reduce EmAb concentration to treat endometriosis dysmenorrhea.

Endometriosis; Dysmenorrhea; Modified Juantong decoction; EmAb

國家自然科學基金項目(編號：30973690)

R271.1;R285.6

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2015.06.016