梅毒螺旋體特異性抗體檢測方法的實驗室評價

佘亞輝，韓媛媛，周光庭，賈芳巖

（亳州市人民醫(yī)院檢驗科，安徽 236800）

梅毒螺旋體特異性抗體檢測方法的實驗室評價

佘亞輝，韓媛媛，周光庭，賈芳巖

（亳州市人民醫(yī)院檢驗科，安徽 236800）

目的對ELISA法聯(lián)合化學發(fā)光法用于特異性梅毒抗體檢測的效果進行評價。方法選取2014年1月至2014年4月于該院皮膚性病科就診患者，共628例。對患者血清采用ELISA法進行初篩，再將檢測結(jié)果在復檢標準范圍內(nèi)（0.5＜S/CO＜3）的樣本用化學發(fā)光法進行復檢，然后與梅毒螺旋體明膠凝集試驗（TPPA）法平行測定的結(jié)果進行比較。結(jié)果TPPA法檢測為陽性的標本為171例；ELISA法檢測符合該科梅毒陽性判斷標準的標本共162例，另外還有15例處于該科梅毒。經(jīng)化學發(fā)光法進一步復檢，陽性結(jié)果為9例，陰性結(jié)果為6例，并且此聯(lián)合檢測法得到的171例陽性結(jié)果與TPPA法陽性結(jié)果完全吻合。結(jié)論ELISA法與化學發(fā)光法聯(lián)合檢測的結(jié)果與TPPA有很好的一致性。

化學發(fā)光法； 酶聯(lián)免疫吸附測定； 梅毒螺旋體明膠凝集試驗

梅毒是一種性傳播疾病，近年來感染率有上升的趨勢，但是由于技術(shù)原因，梅毒螺旋體尚不能進行體外培養(yǎng)，而且在顯微鏡下也不宜觀察，因此目前梅毒螺旋體檢測主要還是以實驗室血清學檢測為主要手段，血清學檢測又分非特異性和特異性梅毒螺旋體抗體檢測兩種，非特異抗體實驗主要以RPR和TRUST為主，雖然方便、快速，但是特異性不高，因此目前主要作為抗梅治療之后的療效觀察和確認新近感染及復發(fā)的目的。梅毒螺旋體特異性抗體檢測實驗室以酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）和梅毒螺旋體明膠凝集試驗（TPPA）為主，前者為初篩實驗，后者為確認實驗，化學發(fā)光法相對于上述兩種傳統(tǒng)方法學來說是一種具有全自動、定量、快速等特點的特異性抗體新檢測方法［1－2］。本文以TPPA結(jié)果為參考，ELISA法聯(lián)合化學發(fā)光法結(jié)果與其比較，進行分析，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年1月至2014年4月至亳州市人民醫(yī)院皮膚性病科就診的患者（年齡3～73歲，平均年齡33.2歲）血液標本共628例，其中來自男性的標本415例，來自女性的213例，標本于室溫放置1h后離心分離血清，于－20℃保存。

1.2 儀器與試劑 ELISA檢測儀器為深圳愛康尤瑞納斯120全自動酶免儀；化學發(fā)光儀器為美國雅培Architect i2000化學發(fā)光儀。ELISA試劑盒由英科新創(chuàng)（廈門）科技有限公司提供；TPPA試劑由日本富士瑞必歐株式會社提供；化學發(fā)光試劑及定標液均為美國雅培I2000定量檢測配套試劑。所有試劑均在有效期內(nèi)。

1.3 方法

1.3.1 TPPA檢測 根據(jù)試劑盒操作說明操作，陽性以在U型培養(yǎng)板上聚集成散在樣判定。

1.3.2 化學發(fā)光檢測 試劑為雅培化學發(fā)光儀配套原裝試劑，根據(jù)試劑盒操作說明進行操作及結(jié)果判斷。

1.3.3 梅毒螺旋體抗體的ELISA檢測 對于結(jié)果處于本科室梅毒復檢標準范圍（0.5＜S/CO＜3）內(nèi)的結(jié)果進一步采用化學發(fā)光法進行復檢。S/CO≤0.5判斷為陰性，S/CO≥3判斷為陽性。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS20.0軟件進行數(shù)據(jù)分析，方法間的比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

628例就診患者中，ELISA法檢測為陽性的為162例，陽性檢出率為25.8%（162/628）；TPPA法檢測為陽性的為171例，陽性檢出率為27.2%（171/628）；兩種方法的陽性檢出率比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。對ELISA法檢測結(jié)果在本科室梅毒復查標準（0.5＜S/CO＜3）內(nèi)的結(jié)果（15例）進一步采用化學發(fā)光法進行復檢，得到9例陽性結(jié)果和6例陰性結(jié)果，ELISA法與化學發(fā)光法聯(lián)合檢出的陽性標本完全與TPPA法吻合。

3 討 論

梅毒是一種性傳染疾病，是一種復雜的慢性、系統(tǒng)性性可以侵害人的各種臟器，對人和社會的危害極大的疾病，而且因為其性質(zhì)的特殊性，一旦試驗結(jié)果出錯，很容積引起家庭糾紛乃至醫(yī)療糾紛［3］，會對醫(yī)院、科室造成不良的影響。因此，現(xiàn)在醫(yī)院臨床實驗室的做法一般都是先用ELISA法進行初篩，對陽性標本在第2天再用TPPA法復檢一次，這樣的做法能很大程度上保證結(jié)果的準確性，但是卻延長了患者等待檢測結(jié)果的時間，也增加了檢驗人員的工作量。那么如何能夠更好地解決這些問題呢？筆者試著采用以下兩種方法來解決。

一個方法是采用ELISA法初篩。ELISA試劑盒包被的抗原是根據(jù)基因重組工程進行合成的，可檢測血清中梅毒特異性抗體，在梅毒的各期都有非常高的靈敏度及特異性，而且采用兩步法可以有效避免因血清中抗體效價過高而產(chǎn)生的前帶現(xiàn)象［4－5］。但是也存在著一定的缺陷，那就是在梅毒感染的窗口期或老年人、腫瘤患者、孕婦、自身免疫性性疾病等患者的血清檢測中，會產(chǎn)生一些檢測結(jié)果處在臨界值附近的情況。國內(nèi)外有很多文章都報道過老年人，孕婦，癌癥患者的假陽結(jié)果的病例［6－8］。有文獻報道，用同批號ELISA試劑測定5 000例健康人血清標本和2 000例隨機選取的HBsAg陽性血清標本，分別得到陰性和陽性參考血清的吸光度均值和標準差，橫軸為吸光度，縱軸為標本數(shù)量，使用正態(tài)分布的u檢驗，得到“灰區(qū)”的范圍為0.08～0.11［9］；又有文獻報道，ELISA“灰區(qū)”對于不同檢測項目和應用的領域、地域的不同，其設置不能一概而論［10］。因此根據(jù)梅毒性質(zhì)的特殊性，本實驗室結(jié)合自身情況，為了防止漏檢或假陽性引起誤檢而造成的不必要的醫(yī)療糾紛制定了稍寬的復檢標準（0.5＜S/CO＜3），檢測結(jié)果再次范圍內(nèi)的標本都需要進行復檢。本研究中有15例經(jīng)ELISA法檢測，結(jié)果處于復查標準內(nèi)的標本。經(jīng)化學發(fā)光復查結(jié)果為陰性標本為6例，其中有3例為60歲以上老人和1例孕婦。

另一個方法是對待復檢標本采用化學發(fā)光法進行復檢?；瘜W發(fā)光法作為一種新的檢測方法，從檢測到結(jié)果判定均由儀器自動完成，具有操作方便，人為干擾少的優(yōu)點。雅培I2000化學發(fā)光法采用的是微粒子免疫技術(shù)來對血清或血漿梅毒特異性抗體進行測定，反應原理與ELISA相同，只不過是包被梅毒抗原的載體換為微粒子。反應后對反應液的發(fā)光強度進行測定，根據(jù)光子強度來反映血清中梅毒抗體的水平，強度越高說明機體內(nèi)抗體水平越高。作為臨床化驗室新引進的一種確證實驗，化學發(fā)光法既能夠檢測梅毒的IgG抗體又能檢測IgM抗抗體。其靈敏度和特異性相對TPPA法都有所提高［11］。對梅毒抗體的檢測來說，化學發(fā)光法是一種可以替代TPPA法的新方法［12］，并且對弱陽性標本具有較強的檢出能力，對于本次實驗，TPPA方法檢測出的171例陽性標本，化學發(fā)光法結(jié)果均為陽性，因此兩者之間的符合率較好。其自動化程度高，是一種應用前景非常好的梅毒抗體的檢測方法［13］。

綜上所述，對大中型醫(yī)院來說，采用ELISA法初篩，然后對可疑標本進行化學發(fā)光法復檢可以防止ELISA法的漏檢及誤診，相對TPPA方法繁瑣、干擾因素多的缺點，此兩種方法聯(lián)合檢測不但能夠保證標本結(jié)果的準確而且也能達到醫(yī)院大批量標本的篩查要求。真正做到患者結(jié)果的準確、及時地發(fā)放，更符合以人為本、一切為患者服務的要求［14］。對于中小型醫(yī)院采用手工ELISA法初篩，再對可疑結(jié)果進行TPPA確證，能達到同樣的診斷效率。

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Evaluation of combined detection of antibodies specific for syphilis

She Yahui，Han Yuanyuan，Zhou Guangting，Jia Fangyan
（Department of Clinical Laboratory，People′s Hospital of Bozhou City，BoZhou，Anhui 236800，China）

ObjectiveTo evaluate ELISA combined with chemiluminescence in the detection of syphilis specific antibodies.Methods628patients who came to our hospital and treated in dermatology department were recruited in the study from January 2014to April 2014.Patients′serum samples were detected by using ELISA firstly，and then the samples，the test rusults of which were within the recheck standard range（0.5＜S/CO＜3）were retested by using chemiluminescence.And then the results of parallel Treponema pallidum gelatin agglutination test（TPPA）measurement were compared with.ResultsThere were 171cases of TPPA positive samples detected and 162cases meets the positive criteria for syphilis（S/CO≥3.0）in the hospital.In addition to that，15 cases of syphilis detected were within the recheck standard range.In the samples rechecked by using chemiluminescencea，there were 9cases of positive results，and 6cases of negative results.171cases of positive results were detected by the combined method，which were consistent with TPPA.ConclusionThe detection results of ELISA combined with chemiluminescence detection are consistent with that of TPPA.

chemiluminescence； enzyme－linked immunosorbent assay； treponema pallidum particle assay

10.3969/j.issn.1673－4130.2015.03.016

A

1673－4130（2015）03－0324－02

2014－10－15）

佘亞輝，男，主管檢驗技師，主要從事臨床免疫學與檢驗的研究。