273例HCV基因分型情況分析

盧恩昌，童永清

（1.襄陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院 附屬醫(yī)院， 湖北 襄陽 441021；2.武漢大學(xué) 人民醫(yī)院， 武漢 430071）

丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus，HCV）是導(dǎo)致慢性肝臟疾病的主要原因之一，感染呈全球分布，全球丙型肝炎流行率平均約為3.0%，具體的慢性丙肝發(fā)病率尚不確定。［1-2］中國HCV的感染率為3.2%，約3 800萬。近年來，中國丙型肝炎的診斷率不斷提高，丙型肝炎新報(bào)告病例也不斷增加。一些數(shù)據(jù)顯示，今后10～15年內(nèi)與HCV感染相關(guān)的死亡率將繼續(xù)增加，到2025年與HCV感染相關(guān)的死亡率會(huì)增至現(xiàn)在的3倍。［2］因此，HCV感染已成為嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。臨床有效的抗病毒治療已成為醫(yī)生和患者共同的期待，高效的抗病毒藥物已成為HCV抗病毒治療研究的重點(diǎn)和熱點(diǎn)。而不同的基因型及基因亞型，臨床抗病毒治療的效果差異很大，并且不同的基因型或是基因亞型對(duì)抗病毒藥物的選擇也有所不同，特別是一些靶向治療的藥物。所以確定HCV患者的基因型以及基因亞型對(duì)患者的治療和康復(fù)有著重要意義。

一、資料與方法

（一）臨床資料

收集自2011年3月至2014年5月在襄陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院附屬醫(yī)院進(jìn)行診療的273例HCV患者的相關(guān)資料，對(duì)于這些患者的診斷均符合2004年由中華醫(yī)學(xué)會(huì)修訂的《丙型肝炎防治指南》診斷標(biāo)準(zhǔn)。

（二）方法

1.標(biāo)本基因分型：對(duì)這些患者血液標(biāo)本HCVNS5B基因序列的部分核苷酸序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增。使用ABI 3130基因分析儀對(duì)擴(kuò)增的核苷酸序列進(jìn)行測序，將所測得的核苷酸序列與互聯(lián)網(wǎng)提供的HCV基因庫中基因序列進(jìn)行序列比對(duì)來確定患者的基因亞型。

2.相應(yīng)的基因亞型及基因編號(hào)：有AF009606.1a GI：2316097、D90208.1bGI：221610、AB049088.1b GI：11559442、AF139594.1b GI：23957856、AF356827.1b AF356827.1bGI：15487693、AF169004.2aGI：6707283、D00944.2a GI：221650、AB047641.2a GI：13122265、AF046866.3a GI：2895898、D17763.3a GI：514395、D49374.3b GI：676877、Y12083.6a GI：2326454 共12個(gè)核苷酸序列6種亞型，基因編號(hào)GI來自于互聯(lián)網(wǎng)。

二、結(jié)果

（一）基因型構(gòu)成

所收集的273例HCV患者進(jìn)行亞型確定的結(jié)果見圖1。273例患者中共有4種基因型、6種亞型，分別為1a3例（1.10%）、1b208例（76.19%）、2a41例（15.02%）、3a3例（1.10%）、3b12例（4.40%）、6a6例（2.20%）。6種亞型中以1b為主，2a次之。

圖1 273例HCV基因亞型及構(gòu)成百分比

（二）亞型比對(duì)情況

1a亞型 3例均和 AF009606.1a GI：2316097相吻合；1b亞型208例以與AB049088.1b GI：11559442相吻合為主，也與D90208.1b GI：221610、AF139594.1b GI：23957856 和 AF356827.1b GI：15487693 相吻合；2a亞型41例比較復(fù)雜，涉及三種序列AF169004.2a GI：6707283、D00944.2a GI：221650 和 AB047641.2a GI：13122265；3a亞型3 例涉及兩種序列AF046866.3a GI：2895898 和 D17763.3a GI：514395；3b 亞型 12例均與D49374.3b GI：676877相吻合；6a亞型6例均和Y12083.6aGI：2326454吻合。具體構(gòu)成情況見圖2。

三、討論

圖2 273例HCV基因亞型具體分布情況

目前至少有Okomoto系統(tǒng)、Kanazawa系統(tǒng)、Cha系統(tǒng)和Simmonds系統(tǒng)四種HCV基因型命名系統(tǒng)，國際通用的是Simmonds系統(tǒng)基因命名系統(tǒng)，把HCV據(jù)遺傳變異性分為6種基因型，每種基因型又可分為若干亞型。［3］目前對(duì)于HCV基因分型方法較多，最經(jīng)典可靠的方法是核苷酸測序法，本文所收集的資料所用基因分型方法就是該方法，確保了患者標(biāo)本基因亞型檢測正確性。基因分型對(duì)于丙型肝炎個(gè)體化治療息息相關(guān)。［4］丙型肝炎基因型有明顯地域性，我國內(nèi)地HCV基因型以1b、2a亞型為主，南方和北方還有差別。［5-7］本文收集的273例患者多位于湖北地區(qū)，結(jié)果顯示273例患者是以1b、2a亞型為主，與我國的流行情況相似。湖北處在北方地區(qū)，和北方的流行趨勢和特點(diǎn)相吻合一些，與南方的差別相對(duì)稍大一些。本文統(tǒng)計(jì)的湖北地區(qū)1b和2a亞型所占百分比達(dá)到了90%以上，同時(shí)也有1a、3a、3b和6a亞型流行。不同的基因型核苷酸序列差異較大，并且不同的基因亞型核苷酸序列也有差異，與NCBI上面提供的核苷酸序列進(jìn)行準(zhǔn)確的基因分型有助于醫(yī)師對(duì)患者治療方案的選擇，對(duì)患者進(jìn)行個(gè)體化抗病毒治療有較好的指導(dǎo)作用。對(duì)于HCV基因亞型流行情況進(jìn)行調(diào)查分析，可以較正確地掌握HCV基因型的分布及變化趨勢，可為HCV感染的預(yù)防保健提供一定科學(xué)數(shù)據(jù)和支持，特別是對(duì)湖北地區(qū)HCV的流行特點(diǎn)和趨勢有一定的支持作用。但是由于資料來源有限，且病例數(shù)量不是很多，和我國真實(shí)的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)仍有一定的差距。

［1］CDC.Recommendations for prevention and control of hepatitis C virus （HCV）infection and HCV-related chornic disease［J］.Morbidity and Mortality Weekly Report，1998（19）：1-39.

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［3］Simmonds P，Holmes EC，Cha TA，et al.Classification of hepatitis C virus into six major genotypes and a series of subtypes by phylogenetic analysis of the NS-5 region［J］.J Gen Virol，1993（11）：2391-2399.

［4］Dal Mo lin G，Ansaldi F，Biagi C，et al.Changing molecular epidemiology of hepatitis C virus infection in Northeast Italy［J］.Journal of Medical Virology， 2002（3）：352-356.

［5］Liu F，Chen K，He Z，et al.Hepatitis C seroprevalence and associated risk factors，Anyang［J］.China.Emerging Infectious Diseases，2009（11）：1819-1822.

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［7］Shan H，Ren FR，Zhao HY，et al.A multi-Chinese blood center study testing serologic-negative donor samples for hepatitis C virus and human immunodeficiency virus with nucleic acid testing［J］.Transfusion，2007（11）：2011-2016.