循環(huán)腫瘤DNA在惡性腫瘤診療中的應(yīng)用

趙 曉 杜 楠 楊全勝

(解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院， 北京 100048)

·綜 述·

循環(huán)腫瘤DNA在惡性腫瘤診療中的應(yīng)用

趙 曉 杜 楠 楊全勝

(解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院， 北京 100048)

惡性腫瘤危害巨大，絕大多數(shù)患者明確診斷時(shí)已經(jīng)是中晚期，預(yù)后差[1-2]。因此，建立一種方便、微創(chuàng)、靈敏、特異的診斷和監(jiān)測(cè)手段勢(shì)在必行。研究人員發(fā)現(xiàn)腫瘤是一種最常見的基因疾病，不同癌癥有不同的誘因和癥狀，但都可以通過基因突變得到解釋。循環(huán)腫瘤DNA是存在于血液中的細(xì)胞外游離DNA，具有無創(chuàng)、實(shí)時(shí)、可重復(fù)和操作簡(jiǎn)便等特點(diǎn)，通過對(duì)腫瘤患者循環(huán)腫瘤 DNA的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，可能為患者的早期診斷、用藥選擇、病情監(jiān)測(cè)提供全面的實(shí)時(shí)信息。本文對(duì)近年來國內(nèi)外有關(guān)循環(huán)腫瘤DNA及其在惡性腫瘤診療中應(yīng)用的研究綜述如下。

1 循環(huán)腫瘤 DNA

循環(huán)DNA是一種存在于血漿或血清、腦脊液及滑膜液等體液中的細(xì)胞外 DNA。腫瘤患者外周血中存在的循環(huán)DNA，含量明顯高于健康人，并且這些循環(huán) DNA具有腫瘤特征性，稱為循環(huán)腫瘤DNA[3]。循環(huán)腫瘤DNA極易獲得，在惡性腫瘤發(fā)生的早期其含量和基因的異常改變就可以被檢測(cè)到。而且它攜帶有腫瘤患者的基因信息，定量或定性分析這些循環(huán) DNA對(duì)腫瘤的早期診斷、治療、病情監(jiān)測(cè)及預(yù)后的評(píng)價(jià)都具有重要意義。更重要的是能夠?yàn)槟[瘤個(gè)體化治療提供較全面的分子學(xué)特性，是一種理想的腫瘤標(biāo)志物[4]。

1.1 循環(huán)腫瘤 DNA的來源 研究發(fā)現(xiàn)，在原發(fā)腫瘤形成和生長(zhǎng)的各個(gè)階段都會(huì)出現(xiàn)腫瘤細(xì)胞的壞死和凋亡, 無論腫瘤細(xì)胞是原位死亡或是進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)，它們的DNA都會(huì)釋放入血液[5]。關(guān)于循環(huán)腫瘤 DNA 具體的釋放機(jī)制仍存在爭(zhēng)論，通過近年的研究，人們推測(cè)其主要可能來源于以下一些途徑：①循環(huán)血或微轉(zhuǎn)移灶中腫瘤細(xì)胞溶解；②腫瘤細(xì)胞的壞死或凋亡；③腫瘤細(xì)胞不斷釋放DNA進(jìn)入血液循環(huán)；④腫瘤侵襲致周圍細(xì)胞、組織變性而釋放DNA入血；⑤腫瘤分泌的小囊泡——exosome中存在的DNA，即exDNA，其意義尚不清楚。但是，無論循環(huán)腫瘤DNA如何產(chǎn)生，目前研究都認(rèn)為，它與原發(fā)腫瘤的基因組 DNA具有相同的遺傳變異，其變異特征和表達(dá)量都與原發(fā)腫瘤組織呈正相關(guān)，并能反映腫瘤的特征性改變。對(duì)這種腫瘤DNA的替代物的回收和檢測(cè)，為腫瘤的診斷和預(yù)測(cè)開辟了新領(lǐng)域。

1.2 循環(huán)腫瘤 DNA的特點(diǎn) 惡性腫瘤患者循環(huán)腫瘤 DNA含量較正常人群增高，完整性較好，并且一個(gè)癌細(xì)胞克隆群落中的每一個(gè)突變共同組成了獨(dú)一無二的突變信息“條形碼”，對(duì)腫瘤患者循環(huán)DNA的分析被認(rèn)為是實(shí)時(shí)的“液相活檢”。通過提取患者血漿中循環(huán)腫瘤 DNA獲取腫瘤的全部片段，而不是對(duì)腫瘤的某一特殊部位進(jìn)行組織活檢，可以體現(xiàn)出患者疾病的大致輪廓，從而評(píng)估患者當(dāng)前腫瘤的所有突變和克隆情況[6]。同時(shí)，相對(duì)于傳統(tǒng)組織活檢創(chuàng)傷大、標(biāo)本量小等局限性，循環(huán)DNA具有取樣簡(jiǎn)便易行，患者痛苦小等優(yōu)勢(shì)，是一種十分理想的檢測(cè)標(biāo)本。借助現(xiàn)代分子生物學(xué)手段對(duì)循環(huán)游離DNA進(jìn)行提取，并對(duì)其遺傳學(xué)和表觀遺傳學(xué)的異常改變進(jìn)行分析，可能為腫瘤的早期診斷、療效評(píng)估、復(fù)發(fā)監(jiān)測(cè)及預(yù)后判斷提供重要的信息，這種基于血液樣本分析的研究方法正在成為腫瘤領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。

2 循環(huán)腫瘤DNA的檢測(cè)

對(duì)循環(huán)腫瘤DNA的檢測(cè)可分為定性和定量?jī)煞N：前者主要檢測(cè)血清和血漿中腫瘤特異性基因的改變，后者則檢測(cè)血清和血漿的DNA總量。早期研究方法有4類：RNA-DNA 雜交法、二苯胺法、溴化乙錠法和對(duì)流免疫電泳法，它們技術(shù)方法不同，但都有一定的缺陷，特別是在判定檢測(cè)方法的金標(biāo)準(zhǔn)上，表現(xiàn)欠佳，敏感度和特異度均不十分理想。近年來，以分子生物學(xué)的迅速發(fā)展為起點(diǎn)，又有一批新的研究方法產(chǎn)生，在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用，如單核苷酸多態(tài)性分析、放射免疫法、分光光度測(cè)量法、實(shí)時(shí)定量PCR法、熒光定量法等，大大提高對(duì)循環(huán)腫瘤 DNA 檢測(cè)的靈敏度[7]。近年來出現(xiàn)的新一代測(cè)序法，具有成本低、速度快、通量高的特點(diǎn)，在腫瘤臨床領(lǐng)域顯現(xiàn)出很高的應(yīng)用價(jià)值。

2.1 定量檢測(cè) 既往對(duì)于循環(huán)腫瘤 DNA的定量檢測(cè)缺乏統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，曾經(jīng)通過顯色反應(yīng)結(jié)果，根據(jù)顏色與濃度的對(duì)應(yīng)關(guān)系檢測(cè)其濃度，但其靈敏度和特異度不高，未能在臨床上大規(guī)模開展。之后又陸續(xù)出現(xiàn)了血清凝集素抑制法、補(bǔ)體結(jié)合法等一些新的檢測(cè)方法，但靈敏度仍較低。近年來，隨著放射免疫分析和對(duì)流免疫電泳技術(shù)的發(fā)展，DNA檢測(cè)靈敏度有了較大的提高，可以檢測(cè)納克級(jí)(ng)的DNA[8]，而實(shí)時(shí)定量 PCR技術(shù)出現(xiàn)之后，更是可以檢測(cè)皮克(pg)級(jí)的 DNA。除此之外，還有一些改進(jìn)技術(shù)或聯(lián)合應(yīng)用技術(shù)可以更加精確地測(cè)定循環(huán)DNA的含量。近年，多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，在治療過程中，檢測(cè)到的循環(huán)腫瘤DNA數(shù)量跟腫瘤容積有關(guān)聯(lián)，

而治療后，確認(rèn)的患者與殘留病體相符合，并且相比放射治療手段，該方法的檢測(cè)反應(yīng)更佳。

2.2 定性分析 循環(huán)腫瘤DNA 的定性分析是指對(duì)腫瘤特異性基因改變的檢測(cè)。理論上，任何腫瘤相關(guān)的遺傳學(xué)和表遺傳學(xué)改變均可以用來進(jìn)行檢測(cè)。而目前臨床上，主要開展的檢測(cè)包括基因突變、甲基化異常、微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(MSI)和雜合性缺失(LOH)等，如對(duì)K-ras 和p53 基因突變的檢測(cè)。實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)精度較高，曾經(jīng)是定性分析循環(huán)腫瘤 DNA的主流技術(shù)。

2.3 新一代測(cè)序 循環(huán)腫瘤DNA的快速發(fā)展離不開測(cè)序技術(shù)的不斷進(jìn)步，近幾年來，基因測(cè)序領(lǐng)域技術(shù)發(fā)展迅速，通過對(duì)DNA直接測(cè)序就可以鑒別循環(huán)DNA的突變信息，大大縮短了檢測(cè)的時(shí)間和經(jīng)濟(jì)成本，利用血液樣本替代組織進(jìn)行基因突變檢測(cè)成為現(xiàn)實(shí)[9]。其中新一代測(cè)序是二者發(fā)展史上的里程碑，在這里進(jìn)行簡(jiǎn)單介紹[10]。 新一代測(cè)序(NGS)又稱二代測(cè)序、高通量測(cè)序或大規(guī)模平行測(cè)序(MPSS)，是相對(duì)于第一代測(cè)序即桑格測(cè)序(Sanger sequencing) 而言的。

2005年羅氏公司推出了第一臺(tái)高通量測(cè)序儀，其后羅氏公司和Illumina 公司相繼推出了Solexa 基因組分析儀，ABI 公司推出了SOLiD 測(cè)序儀，3類測(cè)序平臺(tái)雖然各有特點(diǎn)，但都以高輸出量與高解析度為特性，在原理上也有許多共同之處：三者都是將目標(biāo)DNA剪切為小片段，然后將單個(gè)小片段DNA分子結(jié)合到固相表面，對(duì)單分子獨(dú)立擴(kuò)增，而且每次只復(fù)制一個(gè)堿基(A、C、T、G)并檢測(cè)信號(hào)，最后通過高分辨率的成像系統(tǒng)獲取測(cè)序結(jié)果。NGS僅用了短短的10年時(shí)間就成功地從科學(xué)研究轉(zhuǎn)化為臨床應(yīng)用，目前在無創(chuàng)產(chǎn)前診斷、單基因遺傳病診斷、器官移植排斥篩查以及腫瘤相關(guān)基因的檢測(cè)方面發(fā)揮出巨大的應(yīng)用價(jià)值。

NGS較第一代測(cè)序在腫瘤診斷方面表現(xiàn)出超高的敏感性和特異性，原因主要有兩個(gè)。首先，多基因組合大大提高了對(duì)腫瘤診斷的敏感性和特異性：傳統(tǒng)的第一代測(cè)序只能一個(gè)基因、一個(gè)基因地進(jìn)行檢測(cè)，而NGS技術(shù)能對(duì)多個(gè)基因同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)。其次，NGS技術(shù)本身檢測(cè)基因突變的靈敏度就高于第一代測(cè)序。目前公認(rèn)的第一代測(cè)序檢測(cè)突變的靈敏度大約在20%，而NGS技術(shù)由于引入了測(cè)序深度(sequencing depth) 這一概念，使其可以檢測(cè)到低于0.5%的突變。測(cè)序深度是指測(cè)序得到的堿基總量(bp) 與目的基因組大小的比值，是評(píng)價(jià)測(cè)序量的指標(biāo)之一。測(cè)序深度越深，對(duì)突變檢測(cè)的靈敏度也越高。另外，NGS 還能檢測(cè)血漿中循環(huán)腫瘤DNA的甲基化狀態(tài)和拷貝數(shù)變異等。

NGS技術(shù)中剛剛興起的單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)也在腫瘤診斷中顯示出廣闊的前景。單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)是將分離的單個(gè)細(xì)胞中微量的全基因組DNA 進(jìn)行無選擇性地?cái)U(kuò)增，獲得高覆蓋率的完整的基因組之后再通過NGS 技術(shù)對(duì)其進(jìn)行測(cè)序，從而揭示細(xì)胞個(gè)體間差異。值得一提的是，2012 年，華大基因同樣利用單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)分析了單個(gè)腎癌細(xì)胞的單核苷酸突變特征，從而在更高的分辨能力上為評(píng)價(jià)基因改變的復(fù)雜性提供了更為優(yōu)化的方法[8]。2014 年，他們又用該方法在結(jié)腸癌中發(fā)現(xiàn)了一個(gè)新的癌基因SLC12A5[9]。單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)還能與循環(huán)腫瘤細(xì)胞(circulating tumor cells，CTCs) 篩選技術(shù)相結(jié)合，檢測(cè)外周血CTCs 單核苷酸變異(single-nucleotide variations，SNV)、基因拷貝數(shù)變異(copy number variations，CNV)或外顯子組插入/缺失突變，為腫瘤診斷及個(gè)體化治療提供一種非侵入性檢測(cè)手段。

NGS的發(fā)展極大促進(jìn)了循環(huán)腫瘤DNA在腫瘤診斷中的應(yīng)用，但是在臨床應(yīng)用中仍有很多問題需要解決，如數(shù)據(jù)在臨床診斷上的作用、測(cè)序數(shù)據(jù)的儲(chǔ)存和分析、數(shù)據(jù)的安全和信息隱私等。

3 循環(huán)腫瘤DNA 的臨床應(yīng)用

人類早在1947年就發(fā)現(xiàn)了循環(huán)核酸，并在30 年后開始對(duì)腫瘤患者血液循環(huán)中的循環(huán)DNA進(jìn)行研究。近幾年，隨著現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)的迅速發(fā)展，通過對(duì)循環(huán)腫瘤DNA檢測(cè)可以在較短時(shí)間內(nèi)獲得多個(gè)基因的表達(dá)水平、突變信息等情況，使得循環(huán)腫瘤DNA在腫瘤的診斷和治療監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用有了新的突破，利用血液樣本替代傳統(tǒng)組織進(jìn)行基因檢測(cè)有望成為現(xiàn)實(shí)。

3.1 早期診斷 循環(huán)腫瘤DNA 水平變化與惡性腫瘤的臨床篩查方面的研究開展較早，早期研究聚焦于惡性腫瘤患者循環(huán)腫瘤DNA含量與正常人之間的差異。1997年關(guān)于癌癥患者血清中存在的游離 DNA 含量約為健康人的 10 倍的報(bào)道，引發(fā)了研究人員對(duì)血循環(huán)中游離 DNA 與惡性腫瘤相關(guān)研究的普遍關(guān)注。后續(xù)多項(xiàng)研究相繼證實(shí)，在結(jié)腸癌、肺癌、乳腺癌等惡性腫瘤患者外周血中的循環(huán)腫瘤DNA含量與正常人存在明顯差異。在惡性腫瘤血行轉(zhuǎn)移方面，有研究發(fā)現(xiàn)：伴有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者循環(huán)腫瘤DNA水平明顯高于無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者，提示循環(huán)腫瘤DNA可能作為血行轉(zhuǎn)移重要的預(yù)測(cè)指標(biāo)。另有報(bào)道腫瘤循環(huán)DNA水平與臨床分期、轉(zhuǎn)移情況及腫瘤大小具有相關(guān)性，可以作為乳腺癌的診斷、分期指標(biāo)[11]。近年來越來越多的研究關(guān)注循環(huán)腫瘤DNA 中的基因突變，如檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌患者EGFR基因突變，進(jìn)一步對(duì)不同惡性腫瘤患者從基因水平上進(jìn)行個(gè)體化診斷分析[12]。這些研究視野的拓展和新發(fā)現(xiàn)，為腫瘤的早發(fā)現(xiàn)、早診斷提供了新的思路和方法。

3.2 療效預(yù)測(cè) 近年來，有關(guān)循環(huán)腫瘤DNA水平變化與抗腫瘤(包括手術(shù)、放療、新輔助化療、姑息性化療等)療效預(yù)測(cè)方面的研究陸續(xù)出現(xiàn)。在循環(huán)腫瘤DNA 水平變化與手術(shù)治療療效預(yù)測(cè)方面，Sozzi等[13]在對(duì)術(shù)后肺癌患者的隨訪中發(fā)現(xiàn)，無復(fù)發(fā)患者循環(huán)腫瘤DNA水平逐漸恢復(fù)正常，而復(fù)發(fā)患者出現(xiàn)2～20 倍的增加；Banki等[14]在對(duì)食管癌術(shù)后患者進(jìn)行隨訪研究發(fā)現(xiàn)，術(shù)后循環(huán)腫瘤DNA 水平降至正常患者，中位生存期12 個(gè)月時(shí)復(fù)查病情穩(wěn)定，無明顯復(fù)發(fā)、 轉(zhuǎn)移征象，而循環(huán)腫瘤DNA水平上升患者出現(xiàn)了疾病的復(fù)發(fā)和進(jìn)展。國內(nèi)也有系統(tǒng)性研究發(fā)現(xiàn)，肺癌、結(jié)腸癌等發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移時(shí)外周血循環(huán)DNA 的含量明顯增高[15]。上述的研究主要從循環(huán)腫瘤DNA整體水平變化進(jìn)行探討，近年來隨著分子生物學(xué)研究的深入，針對(duì)與疾病關(guān)系明確的DNA 片段進(jìn)行定性分析成為新的研究主體。其中，基因突變檢測(cè)中應(yīng)用較為廣泛的如K-ras 基因，可以為結(jié)、直腸癌患者化療是否聯(lián)合西妥昔單抗提供療效預(yù)測(cè)標(biāo)志；EGFR基因外顯子 19 和 21 的突變情況開始進(jìn)入臨床為非小細(xì)胞肺癌分子靶向治療療效預(yù)測(cè)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。ERCC1、TYMS、UGT等基因多態(tài)性分析也正在研究階段，預(yù)計(jì)將為腫瘤個(gè)體化治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

3.3 個(gè)體化治療 過去10年，對(duì)于惡性腫瘤發(fā)生、維持和進(jìn)展的關(guān)鍵驅(qū)動(dòng)分子方面的研究取得了重大進(jìn)展，這些新發(fā)現(xiàn)促成了新型治療策略的突破[16]。腫瘤患者的臨床處理正在從基于患者臨床特征選擇治療方案的傳統(tǒng)治療模式，轉(zhuǎn)變?yōu)榛诨颊吣[瘤分子表達(dá)譜選擇治療方法的個(gè)體化治療模式。這種全新的醫(yī)療模式以個(gè)人基因組信息為基礎(chǔ)，結(jié)合蛋白質(zhì)組、代謝組等相關(guān)內(nèi)環(huán)境信息，為患者量身設(shè)計(jì)出最佳治療方案，選擇合適的藥物及正確的劑量，預(yù)測(cè)藥物的療效，在癌癥治療中已經(jīng)初見成效，正在世界范圍內(nèi)逐步取代現(xiàn)在的腫瘤治療模式[17]。這種治療模式的推廣，對(duì)于腫瘤監(jiān)測(cè)提出了新的要求，促使臨床工作者尋找更為高效、準(zhǔn)確的腫瘤監(jiān)測(cè)手段來判斷患者病情發(fā)展變化及對(duì)治療的反應(yīng)。近幾年來，基因檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展和完善提高了其檢測(cè)結(jié)果的可信度，檢測(cè)設(shè)備和檢測(cè)成本的下降為這一技術(shù)的廣泛應(yīng)用提供了可行性。這些發(fā)展都為我們開展以基因檢測(cè)為基礎(chǔ)的腫瘤監(jiān)測(cè)提供了可能性。

有最新研究報(bào)道，循環(huán)腫瘤 DNA在腫瘤個(gè)體化治療中的作用已經(jīng)在一些轉(zhuǎn)移性乳腺癌，轉(zhuǎn)移性結(jié)、直腸癌和轉(zhuǎn)移性黑色素瘤的研究中得到證實(shí)[18-19]。研究發(fā)現(xiàn)，通過連續(xù)監(jiān)測(cè)轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者循環(huán)腫瘤DNA的 10個(gè)伴隨突變，針對(duì)不同亞克隆腫瘤灶給予不同的化療方案，患者治療效果顯示出明確差異。對(duì)轉(zhuǎn)移性結(jié)、直腸癌患者經(jīng)KRAS等位基因突變檢查診斷后給予抗EGFR抗體藥物治療，經(jīng)影像學(xué)檢查證實(shí)為疾病進(jìn)展的平均時(shí)間為21周，最長(zhǎng)可達(dá)10個(gè)月[20]。德國的研究者們對(duì)復(fù)發(fā)性胃腸道間質(zhì)瘤患者血漿標(biāo)本的循環(huán)腫瘤DNA的突變情況與患者的臨床狀態(tài)進(jìn)行了匹配，發(fā)現(xiàn)兩者具有較好的相關(guān)性[21]。先前研究表明，肺癌患者循環(huán)腫瘤DNA水平比對(duì)照組人群的水平更高，循環(huán)腫瘤DNA可作為接受化學(xué)治療患者疾病進(jìn)展的顯著預(yù)測(cè)標(biāo)志物[22]。此外，另一些研究報(bào)道了循環(huán)腫瘤DNA水平和患者預(yù)后之間的相關(guān)性。雖然僅是初步研究，但這些結(jié)果仍然顯示通過監(jiān)測(cè)循環(huán)腫瘤DNA，有助于我們?cè)谟跋駥W(xué)證據(jù)出現(xiàn)以前，針對(duì)新生轉(zhuǎn)移性腫瘤灶進(jìn)行早期干預(yù)。這些發(fā)現(xiàn)表明：在不久的將來，循環(huán)腫瘤DNA可能被用于高風(fēng)險(xiǎn)人群的篩查、患者的預(yù)后評(píng)估和療效評(píng)價(jià)，其廣泛的應(yīng)用性和潛在的重要性將對(duì)臨床工作產(chǎn)生更大的影響。

4 小結(jié)與展望

循環(huán)腫瘤 DNA 可以直接從患者的外周血中獲取，有望發(fā)展成為一種新型的腫瘤學(xué)監(jiān)測(cè)指標(biāo)。作為一種靈敏、特異、無創(chuàng)的分子生物學(xué)檢測(cè)手段，檢測(cè)循環(huán)腫瘤DNA可以便捷地對(duì)腫瘤做出早期診斷、進(jìn)行療效監(jiān)測(cè)及對(duì)惡性腫瘤做出預(yù)后評(píng)價(jià)，可應(yīng)用于腫瘤的預(yù)防以及個(gè)體化治療的開展。

但是目前，各中心對(duì)于循環(huán)腫瘤DNA的研究方法和研究結(jié)果不盡相同。循環(huán)腫瘤DNA檢測(cè)如何作為一種標(biāo)準(zhǔn)化的方法應(yīng)用于臨床？這就亟需建立一套國內(nèi)外統(tǒng)一的循環(huán)腫瘤DNA定量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)以及各類型腫瘤定性分析的譜式，為將來開展大規(guī)模的流行病學(xué)監(jiān)控、系統(tǒng)地收集癌癥患者外周血標(biāo)本、規(guī)范循環(huán)腫瘤DNA的臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。另外，現(xiàn)代DNA測(cè)序技術(shù)尤其是二代測(cè)序技術(shù)敏感性極高，這也增加了檢測(cè)的非特異性，即假陽性。這類技術(shù)在腫瘤臨床中的應(yīng)用，除了需要完備的質(zhì)量控制和系統(tǒng)的臨床樣本對(duì)比外，還需重新審視現(xiàn)有臨床意義明確的基因的臨床指導(dǎo)價(jià)值。因此，循環(huán)腫瘤DNA在臨床中的廣泛應(yīng)用還需要大規(guī)模臨床試驗(yàn)的驗(yàn)證。

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10.3969/j.issn.1672-8521.2015.01.016

解放軍總醫(yī)院臨床科研扶持基金(304專項(xiàng))資助(2014FC-CXYY-1004)

2014-12-08)